【摘要】：目的:通過建立氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(EA.hy926)氧化應(yīng)激損傷模型,觀察丹參酮ⅡA調(diào)控PI3K/Akt/m TOR信號通路介導(dǎo)自噬對氧化應(yīng)激損傷EA.hy926細胞的影響及其分子機制。材料與方法:第一部分:丹參酮ⅡA對ox-LDL誘導(dǎo)EA.Hy926自噬及時效關(guān)系探討。1.采用MTT法分別觀察不同濃度ox-LDL及丹參酮ⅡA對EA.Hy926細胞增殖的影響,篩選ox-LDL及丹參酮ⅡA干預(yù)EA.Hy926細胞的最佳濃度2.采用比色法檢測細胞氧化應(yīng)激損傷MDA含量及SOD活力,化學(xué)熒光探針法觀察細胞氧化應(yīng)激損傷ROS染色情況,探討丹參酮ⅡA對ox-LDL誘導(dǎo)EA.hy926細胞氧化應(yīng)激損傷的影響3.采用熒光免疫法細胞技術(shù)及Westernblot法檢測細胞內(nèi)MAP1-LC3蛋白不同時間點表達的變化觀察丹參酮ⅡA對ox-LDL誘導(dǎo)的EA.Hy926自噬效應(yīng)的影響第二部分:丹參酮ⅡA調(diào)控PI3K/Akt/m TOR信號通路介導(dǎo)自噬對內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用研究選用PI3K/Akt/m TOR信號通路抑制劑LY294002,體外培養(yǎng)EA.hy926細胞,隨機分為酮ⅡA組、LY294002組。用比色法檢測細胞氧化應(yīng)激損傷MDA含量及SOD活力,利用熒光免疫法及Naolive 3D cell explorer實時無標(biāo)記3D顯微成像系統(tǒng)檢測自噬發(fā)生,同時應(yīng)用Westernblot法檢測自噬相關(guān)蛋白以及PI3K/Akt/m TOR通路蛋白的表達情況�；赑I3K/Akt/m TOR信號通路探討丹參酮ⅡA調(diào)節(jié)自噬對ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用及分子機制。結(jié)果:1.100μg/ml ox-LDL作用于EA.Hy926細胞24H造成明顯氧化應(yīng)激損傷,丹參酮ⅡA能減輕ox-LDL對EA.Hy926細胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激損傷。免疫熒光法發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA組LC3蛋白在6H,12H,24H形成較模型組增多,在12H表達最多。Westernblot法發(fā)現(xiàn)LC3蛋白表達水平在12H及24H明顯增高,但在12H自噬效應(yīng)蛋白LC3表達最為明顯。2.與正常組相比,模型組MDA含量增高,SOD活力降低,LC3-II/I蛋白含量增多(P0.01);丹參酮ⅡA干預(yù)后細胞中MDA含量降低,SOD活力增高,LC3-II/I蛋白含量增多(P0.01)。加入PI3K的抑制劑LY294002后細胞中MDA含量增高,SOD活力降低,LC3-II/I蛋白含量降低。3.與正常組相比,模型組PI3K、P-Akt、P-m TOR、蛋白表達水平明顯減少(P0.05或P0.01);與模型組相比,丹參酮ⅡA干預(yù)后細胞中PI3K、P-Akt、P-m TOR蛋白表達水平明顯減少(P0.05或P0.01);與ox-LDL+丹參酮ⅡA組相比,加入PI3K的抑制劑LY294002后細胞中的PI3K、P-Akt、P-m TOR蛋白表達水平均明顯降低(P0.05或P0.01)。結(jié)論:1、丹參酮ⅡA對ox-LDL誘導(dǎo)EA.hy926細胞活力下降、氧化應(yīng)激增強等損傷反應(yīng)具有明顯抑制作用。2、丹參酮ⅡA對ox-LDL誘導(dǎo)EA.hy926氧化應(yīng)激細胞模型的自噬活性有影響并存在時效關(guān)系。3、丹參酮ⅡA對ox-LDL誘導(dǎo)EA.hy926細胞自噬活性具有明顯促進作用,且自噬活性增強是丹參酮ⅡA對ox-LDL誘導(dǎo)EA.hy926細胞損傷的保護作用機制之一。4、丹參酮ⅡA可能通過調(diào)控PI3K/Akt/m TOR信號通路促進自噬,對ox-LDL誘導(dǎo)的EA.Hy926細胞氧化應(yīng)激損傷起到保護作用。
【圖文】：

圖 1 不同濃度的 ox-LDL 對 EA. hy926 細胞增殖 of different concentrations of ox-LDL on the proliferatiocellsμg/ml ox-LDL 對 EA. hy926 細胞 MDA 含量及 SOD

圖 3 不同濃度的丹參酮 IIA 對 EA. hy926 細胞f different concentrations of tanshinone IIA on the phy926 cells參酮 IIA 對 ox-LDL 誘導(dǎo) EA. hy926 細胞 ROS 染
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285

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本文編號：2649003