【摘要】：天山雪蓮是生長(zhǎng)在我國(guó)高海拔地區(qū)的傳統(tǒng)名貴的藥用植物,富含黃酮類化合物。食管癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,很難治愈,嚴(yán)重影響著人們的生活質(zhì)量。而有研究報(bào)道從很多植物中獲得的花青苷對(duì)食管癌都具有較強(qiáng)的抗性。因此,本研究以轉(zhuǎn)入花青苷合成調(diào)控基因(PAP1和LC)后呈現(xiàn)紅色的天山雪蓮愈傷組織為材料,從化學(xué)成分、藥理活性和分子生物學(xué)三個(gè)方面系統(tǒng)的研究轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物對(duì)人食管癌細(xì)胞CaEs-17的抗腫瘤活性,為高抗腫瘤活性天山雪蓮育種提供理論支持,為天山雪蓮的抗腫瘤功效得以充分利用提供技術(shù)支持。所得主要研究結(jié)果如下:(1)對(duì)兩種天山雪蓮愈傷組織的總黃酮含量進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因天山雪蓮愈傷組織的總黃酮含量(8257.88±759.20)mg·kg~(-1) DW是非轉(zhuǎn)基因愈傷組織(3039.70±223.48)mg·kg~(-1) DW的2.72倍。(2)對(duì)兩種天山雪蓮愈傷組織中單體酚的種類和含量進(jìn)行分析,結(jié)果顯示兩種天山雪蓮愈傷組織中單體酚的種類幾乎相同,但是轉(zhuǎn)基因天山雪蓮愈傷組織中的單體酚含量較高,且在轉(zhuǎn)基因愈傷組織中檢測(cè)到了使其呈現(xiàn)紅色的矢車菊素半乳糖苷(Cyanidin-galactoside),而非轉(zhuǎn)基因愈傷組織中未檢測(cè)到。(3)采用CCK-8法和細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察檢測(cè)兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物對(duì)人食管癌CaEs-17細(xì)胞的增殖抑制作用,結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因天山雪蓮愈傷組織醇提物對(duì)CaEs-17細(xì)胞的增殖抑制作用較強(qiáng),其IC_(50)值(0.2874 mg·mL~(-1))比非轉(zhuǎn)基因愈傷組織醇提物的IC_(50)值(0.3903 mg·mL~(-1))低26.4%。熒光倒置顯微鏡觀察到人食管癌CaEs-17細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯受到抑制,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,細(xì)胞體積縮小,間距變大,相互分離,細(xì)胞核高度固縮,細(xì)胞成片死亡。(4)對(duì)兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物誘導(dǎo)人食管癌CaEs-17細(xì)胞凋亡的作用進(jìn)行分析。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示,兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物對(duì)CaEs-17細(xì)胞均具有明顯的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用,且均呈濃度依賴性,但轉(zhuǎn)基因愈傷組織醇提物對(duì)CaEs-17細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用較強(qiáng)。(5)運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物對(duì)相關(guān)凋亡基因Bcl-2和Bax表達(dá)量的影響。結(jié)果顯示兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物都可以上調(diào)促凋亡基因Bax的表達(dá)量,呈不斷上升的趨勢(shì),下調(diào)抑凋亡基因Bcl-2的表達(dá)量,呈不斷下降的趨勢(shì),但轉(zhuǎn)基因愈傷組織醇提物的調(diào)控作用更加顯著。綜上所述,與非轉(zhuǎn)基因愈傷組織相比,轉(zhuǎn)基因天山雪蓮愈傷組織醇提物對(duì)人食管癌細(xì)胞CaEs-17的抗腫瘤活性顯著提高,這與轉(zhuǎn)基因愈傷組織中矢車菊半乳糖苷及其代謝相關(guān)類黃酮化合物的含量的大幅度增加有很大關(guān)系。
【圖文】：

花青苷的研究概況falvonoids）是植物中一類重要的多酚次生代飲食中具有高保健功能和高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的活性用價(jià)值，是研究者們一直關(guān)注的焦點(diǎn)。類黃）為基礎(chǔ)，，中間通過(guò)三碳原子連接，從而形（圖 1-1）（秦曉曉 2016）。類黃酮化合物實(shí)的色素，其在植物中一般都是以與糖結(jié)合形黃酮大體分為以下幾類（張丹萍和丁丁 201烷酮（flavanone）、黃烷醇（flavanol）、二氫異橙酮（aurones）、花青素（anthocyanidins）。

的一種呈現(xiàn)藍(lán)色的物質(zhì)，1835 年 Marguart 究得到了花色苷的結(jié)構(gòu)。由于花青苷是一種官中，使植物花瓣、果實(shí)等呈現(xiàn)出五彩斑斕子�；ㄇ嘬胀ㄟ^(guò)水解可得到極不穩(wěn)定的花青和氧氣等多種內(nèi)在和外在因素的影響而發(fā)以糖苷鍵結(jié)合而成的穩(wěn)定的花青苷的形式存離得到的花青素共有 20 種，并將在植物中接的取代基種類的不同分為矢車菊素（葵素（Pelargonidin）、矮牽牛素（Petunidin）、，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)見(jiàn)表 1-2（王靜等 2013）�；惡筒煌康幕ㄇ嘬斩紩�(huì)使植物呈現(xiàn)不 的影響，常隨著植物自身和外界環(huán)境的變或毒性很小的天然植物代謝產(chǎn)物，在日常生
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2648804