【摘要】：天山雪蓮是生長在我國高海拔地區(qū)的傳統(tǒng)名貴的藥用植物,富含黃酮類化合物。食管癌是常見的惡性腫瘤之一,很難治愈,嚴(yán)重影響著人們的生活質(zhì)量。而有研究報道從很多植物中獲得的花青苷對食管癌都具有較強的抗性。因此,本研究以轉(zhuǎn)入花青苷合成調(diào)控基因(PAP1和LC)后呈現(xiàn)紅色的天山雪蓮愈傷組織為材料,從化學(xué)成分、藥理活性和分子生物學(xué)三個方面系統(tǒng)的研究轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物對人食管癌細胞CaEs-17的抗腫瘤活性,為高抗腫瘤活性天山雪蓮育種提供理論支持,為天山雪蓮的抗腫瘤功效得以充分利用提供技術(shù)支持。所得主要研究結(jié)果如下:(1)對兩種天山雪蓮愈傷組織的總黃酮含量進行檢測,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因天山雪蓮愈傷組織的總黃酮含量(8257.88±759.20)mg·kg~(-1) DW是非轉(zhuǎn)基因愈傷組織(3039.70±223.48)mg·kg~(-1) DW的2.72倍。(2)對兩種天山雪蓮愈傷組織中單體酚的種類和含量進行分析,結(jié)果顯示兩種天山雪蓮愈傷組織中單體酚的種類幾乎相同,但是轉(zhuǎn)基因天山雪蓮愈傷組織中的單體酚含量較高,且在轉(zhuǎn)基因愈傷組織中檢測到了使其呈現(xiàn)紅色的矢車菊素半乳糖苷(Cyanidin-galactoside),而非轉(zhuǎn)基因愈傷組織中未檢測到。(3)采用CCK-8法和細胞形態(tài)學(xué)觀察檢測兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物對人食管癌CaEs-17細胞的增殖抑制作用,結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因天山雪蓮愈傷組織醇提物對CaEs-17細胞的增殖抑制作用較強,其IC_(50)值(0.2874 mg·mL~(-1))比非轉(zhuǎn)基因愈傷組織醇提物的IC_(50)值(0.3903 mg·mL~(-1))低26.4%。熒光倒置顯微鏡觀察到人食管癌CaEs-17細胞的生長明顯受到抑制,細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,細胞體積縮小,間距變大,相互分離,細胞核高度固縮,細胞成片死亡。(4)對兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物誘導(dǎo)人食管癌CaEs-17細胞凋亡的作用進行分析。流式細胞儀分析結(jié)果顯示,兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物對CaEs-17細胞均具有明顯的細胞凋亡誘導(dǎo)作用,且均呈濃度依賴性,但轉(zhuǎn)基因愈傷組織醇提物對CaEs-17細胞的凋亡誘導(dǎo)作用較強。(5)運用RT-PCR檢測兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物對相關(guān)凋亡基因Bcl-2和Bax表達量的影響。結(jié)果顯示兩種天山雪蓮愈傷組織醇提物都可以上調(diào)促凋亡基因Bax的表達量,呈不斷上升的趨勢,下調(diào)抑凋亡基因Bcl-2的表達量,呈不斷下降的趨勢,但轉(zhuǎn)基因愈傷組織醇提物的調(diào)控作用更加顯著。綜上所述,與非轉(zhuǎn)基因愈傷組織相比,轉(zhuǎn)基因天山雪蓮愈傷組織醇提物對人食管癌細胞CaEs-17的抗腫瘤活性顯著提高,這與轉(zhuǎn)基因愈傷組織中矢車菊半乳糖苷及其代謝相關(guān)類黃酮化合物的含量的大幅度增加有很大關(guān)系。
【圖文】：

花青苷的研究概況falvonoids）是植物中一類重要的多酚次生代飲食中具有高保健功能和高營養(yǎng)價值的活性用價值，是研究者們一直關(guān)注的焦點。類黃）為基礎(chǔ)，，中間通過三碳原子連接，從而形（圖 1-1）（秦曉曉 2016）。類黃酮化合物實的色素，其在植物中一般都是以與糖結(jié)合形黃酮大體分為以下幾類（張丹萍和丁丁 201烷酮（flavanone）、黃烷醇（flavanol）、二氫異橙酮（aurones）、花青素（anthocyanidins）。

的一種呈現(xiàn)藍色的物質(zhì)，1835 年 Marguart 究得到了花色苷的結(jié)構(gòu)。由于花青苷是一種官中，使植物花瓣、果實等呈現(xiàn)出五彩斑斕子。花青苷通過水解可得到極不穩(wěn)定的花青和氧氣等多種內(nèi)在和外在因素的影響而發(fā)以糖苷鍵結(jié)合而成的穩(wěn)定的花青苷的形式存離得到的花青素共有 20 種，并將在植物中接的取代基種類的不同分為矢車菊素（葵素（Pelargonidin）、矮牽牛素（Petunidin）、，其結(jié)構(gòu)特點見表 1-2（王靜等 2013）。花類和不同含量的花青苷都會使植物呈現(xiàn)不 的影響，常隨著植物自身和外界環(huán)境的變或毒性很小的天然植物代謝產(chǎn)物，在日常生
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285

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本文編號：2648804