【摘要】：羊肚菌(Morehella esculenta(L.)Pers)隸屬羊肚菌科(Morchellaceae)羊肚菌屬(Morchella),其子實(shí)體形狀酷似羊肚,因此得名羊肚菌。野生羊肚菌味道鮮美,營(yíng)養(yǎng)豐富,是很好的食用和藥用真菌。目前對(duì)羊肚菌的研究集中在人工栽培方面,在羊肚菌的結(jié)構(gòu)研究中,能夠?qū)⒍嗵墙Y(jié)構(gòu)清晰解析出來的幾乎沒有,且涉及羊肚菌多糖抗S180實(shí)體瘤機(jī)制方面的研究未見報(bào)道。本課題采用熱水浸提法提取羊肚菌粗多糖,DEAE-52纖維素層析法和透析法等對(duì)其分離純化。結(jié)合HPGPC、HPLC、FT-IR、GC-MS和NMR分析法等,對(duì)羊肚菌多糖(ME-X)的一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析,為其二三級(jí)結(jié)構(gòu)解析提供依據(jù)。運(yùn)用CCK-8法和中性紅法分別檢測(cè)ME-X對(duì)增殖免疫細(xì)胞及巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響共同評(píng)價(jià)ME-X的免疫調(diào)節(jié)活性;運(yùn)用CCK-8法檢測(cè)ME-X對(duì)腫瘤細(xì)胞的結(jié)果評(píng)價(jià)ME-X的體外抗腫瘤活性;建立S180腫瘤小鼠模型評(píng)價(jià)ME-X的體內(nèi)抗腫瘤活性,并運(yùn)用Illumina HiScq TM 200測(cè)序法對(duì)小鼠腫瘤進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,初步探究ME-X的抗腫瘤機(jī)制,并運(yùn)用ELISA法對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。主要結(jié)果如下:(1)以四川省小金縣野生羊肚菌子實(shí)體作為實(shí)驗(yàn)材料,采用熱水浸提法,從200 g四川省小金縣野生羊肚菌子實(shí)體中分離得到40 g粗多糖,得糖率20%。(2)結(jié)果表明ME-X由甘露糖、葡萄糖、半乳糖組成,且比例為4:4:1,即以(2,4→6)-α-D-吡喃甘露糖為主鏈骨架,6-O上出支鏈,環(huán)狀支鏈由3個(gè)(1→6)-α-D-葡萄糖和1個(gè)(1,2→6)-α-D-半乳糖構(gòu)成,→2)-α-D-葡萄糖作為末端糖與(1,2→6)-α-D-半乳糖1-O相連。(3)ME-X的免疫調(diào)節(jié)活性表明:與空白對(duì)照組相比,ME-X在一定濃度范圍內(nèi)具有良好的促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖的作用。當(dāng)ME-X多糖濃度為10μg/mL時(shí),T、B淋巴細(xì)胞增殖活性最好,增殖率分別為31.8%、63.02%;當(dāng)ME-X多糖濃度為20μg/mL時(shí),促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖能力及巨噬細(xì)胞吞噬活性均最好,增殖率為63.09%,吞噬率為22.49%。(4)ME-X的抗腫瘤活性表明:與空白對(duì)照組相比,ME-X在一定濃度范圍內(nèi)具有很好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性。當(dāng)ME-X多糖濃度為20μg/mL時(shí),抑制腫瘤細(xì)胞增殖效果最好,抑制率分別40.31%(MFC)、33.81%(CT26.WT)和21.19%(S180)。(5)結(jié)果發(fā)現(xiàn)ME-X能在體內(nèi)抑制S180腫瘤的生長(zhǎng),抑癌率可達(dá)50.32%,并且是通過PI3K/AKT信號(hào)通路和Ras信號(hào)通路,共同抑制腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)。通過這些研究不僅可以為ME-X免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供科學(xué)依據(jù),同時(shí)還可以為ME-X的防癌、抗癌方面研究提供一定的理論支撐。
【圖文】：

圖 2-1 ME-X 的洗脫曲線Fig 2-1 Chromatogram of ME-X2.3.3 ME-X 高效凝膠滲透色譜（HPGPC）ME-X 的 HPGPC 結(jié)果如下：由圖 2-2 可知，ME-X 的 HPGPC 洗脫曲線有一個(gè)明顯的吸收峰，峰型較高且成對(duì)稱結(jié)構(gòu)，后續(xù)研究均基于此峰對(duì)應(yīng)區(qū)域的多糖。由圖 2-3 可知，ME-X 的 Z+1 均分子量（Mz+1）為 2166652 Da；

圖 2-1 ME-X 的洗脫曲線Fig 2-1 Chromatogram of ME-X2.3.3 ME-X 高效凝膠滲透色譜（HPGPC）ME-X 的 HPGPC 結(jié)果如下：由圖 2-2 可知，ME-X 的 HPGPC 洗脫曲線有一個(gè)明顯的吸收峰，，峰型較高且成對(duì)稱結(jié)構(gòu)，后續(xù)研究均基于此峰對(duì)應(yīng)區(qū)域的多糖。由圖 2-3 可知，ME-X 的 Z+1 均分子量（Mz+1）為 2166652 Da；
【學(xué)位授予單位】：西華師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284;R285

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本文編號(hào)：2648801