【摘要】：[目的]黃連素是一種廣譜抗菌藥物,最近研究發(fā)現(xiàn)其在糖尿病中有降低血糖的功效,其作用機(jī)制值得深入研究。本實(shí)驗(yàn)旨在研究黃連素在2型糖尿病(T2DM)小鼠模型中抗炎及調(diào)節(jié)腸道菌群的作用,為黃連素在糖尿病治療方面的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。[方法]采用高脂飲食和低劑量鏈脲佐菌素聯(lián)合誘導(dǎo)方法構(gòu)建2型糖尿病小鼠模型。將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組、2型糖尿病模型組(T2DM models)、T2DM小鼠黃連素灌胃組(T2DM+BBR ig)及T2DM小鼠黃連素腹腔注射組(T2DM+BBR ip)。從造模成功開(kāi)始,T2DM+BBR ig組及T2DM+BBR ip組小鼠用黃連素連續(xù)處理6周,正常對(duì)照組及T2DM模型組小鼠用生理鹽水做對(duì)照處理。采用細(xì)菌平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)各組小鼠腸道中腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌和擬桿菌等5種主要腸道菌群的變化;用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)各組小鼠空腹血糖水平;ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清胰島素、IgG和IgA水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)小鼠胰腺組織中TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平;HE染色和免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)各組小鼠胰島的病理變化和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度。體外培養(yǎng)THP-1源性巨噬細(xì)胞,將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為4組:PBS組、LPS組、LPS+BBR(5μM)組及LPS+BBR(10μM)組。用western-blot檢測(cè)各組細(xì)胞中TLR4水平和NF-κB的核轉(zhuǎn)位情況;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平。[結(jié)果]T2DM模型組小鼠與正常對(duì)照組比較,空腹血糖、胰島素、血清IgA水平以及胰腺組織中TLR4、TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平均顯著性升高,P0.01;胰島病理?yè)p傷和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度顯著增加;小鼠腸道菌群發(fā)生顯著性改變:雙歧桿菌、乳酸桿菌、擬桿菌數(shù)量顯著下降,P0.01,腸桿菌和腸球菌數(shù)量顯著性增加,P0.01。黃連素處理組與T2DM組比較,小鼠空腹血糖、胰島素、血清IgA水平和胰腺組織中TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平顯著性下降,P0.05;胰島病理?yè)p傷和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度明顯減輕;雙歧桿菌、乳酸桿菌、擬桿菌數(shù)量顯著性增加,P0.05,而腸桿菌和腸球菌數(shù)量顯著性下降,P0.05;血清IgG水平在四組小鼠間無(wú)顯著性差異,P0.05。T2DM+BBR ip組與T2DM+BBR ig組比較,小鼠血糖下降速度較快,但腸道菌群改變幅度較小。在黃連素處理6周后,T2DM+BBR ip組與T2DM+BBR ig組小鼠的各項(xiàng)指標(biāo)均接近正常水平。體外研究顯示:在THP-1源性巨噬細(xì)胞中,黃連素能顯著性下調(diào)LPS對(duì)TLR4信號(hào)通路的激活,使TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平顯著性下降,NF-κB核轉(zhuǎn)位受阻,與LPS組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05;BBR 10μM作用顯著性大于BBR 5μM,P0.05。[結(jié)論]黃連素可以減輕2型糖尿病小鼠體內(nèi)的慢性炎癥從而緩解糖尿病,其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群及阻斷TLR4-NF-κB信號(hào)通路起作用。
【圖文】：

P<0.05；其中 T2DM+BBR ig 組小鼠血糖從第 2周開(kāi)始糖<7.0 mmol/L），而 T2DM+BBR ip 組小鼠血糖從第 2 周 ip組小鼠的血糖下降速度明顯快于 T2DM+BBR ig組。結(jié)果表 1 黃連素處理后各組小鼠血糖水平的變化he levels of fasting plasma glucose in every group of mice after treatmenGroupsControlmmol/L）T2DM models（mmol/L）T2DM+BBR ig（mmol/L）T（4.82±1.32 12.34±1.35 ** 12.27±2.31 4.35±1.07 11.37±2.17 ** 8.86±1.17#$64.33±0.87 10.68±1.47 ** 6.33±1.57##&44.62±1.13 10.67±1.21 ** 5.47±0.21##.01 compared with normal control; ##: P<0.01 compared with T2DM m T2DM models; $: P<0.05 compared with 0 week; &: P<0.05 compa

平和 HOMA-IR 均顯著高于正常對(duì)照組，P<0.01；黃連素處理后，T2DM 小鼠的胰及 HOMA-IR 均顯著降低，P<0.01。T2DM+BBR ig 組與 T2DM+BBR ip 組比較，血水平無(wú)顯著性差異，，P>0.05；HOMA-IR 在 T2DM+BBR ip 組顯著低于 T2DM+BP<0.05。結(jié)果見(jiàn)表 2和圖 2。表 2 黃連素處理后各組小鼠的空腹胰島素和 HOMA-IR 水平Table 2 The levels of FIns and HOMA-IR in every group of mice after administration of BBRGroups FIns (μIU/ml) HOMA-IRControl 34.45±3.81 7.07±0.51T2DM models 55.91±3.38 ** 26.51±0.86 **T2DM+BBR ig 40.83±5.19##9.93±1.27##T2DM+BBR ip 38.68±7.37##$7.96±0.61##&Note: **: P<0.01 compared with normal control; ##: P<0.01 compared with T2DM models; $: P>0.0compared with T2DM+BBR ig; &: P<0.05 compared with T2DM+BBR ig.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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