【摘要】：本課題受到國(guó)家自然基金NO.81673618資助,旨在通過(guò)CNT2探討菊苣提取物降尿酸作用機(jī)制。研究背景高尿酸血癥全球發(fā)病率逐年增加,在我國(guó)已達(dá)到10%,在沿海經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)城市甚至達(dá)到25%。目前,我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、飲食的變化等因素更是加劇了高尿酸血癥發(fā)病率的增長(zhǎng),并且高尿酸血癥與痛風(fēng)、代謝性疾病、心血管疾病、高血壓、腎臟疾病、2型糖尿病等疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),已成為繼高血糖、高血壓、高血脂后不容忽視的第四高。高尿酸血癥(Hyperuricaemia,HUA)是血尿酸水平在體內(nèi)持續(xù)性升高或者血尿酸過(guò)飽和的一種病理狀態(tài)。尿酸是嘌呤代謝的終產(chǎn)物,血尿酸水平是基于嘌呤的吸收、嘌呤的代謝以及尿酸的排泄之間的平衡,嘌呤攝入增多、嘌呤代謝紊亂、尿酸排泄減少或三者共同作用均可導(dǎo)致高尿酸血癥的發(fā)生。臨床中常用的降尿酸藥物主要包括兩類,抑制嘌呤代謝酶活性的藥物,如非布司他、托匹司他、別嘌呤醇等;增加尿酸排泄的藥物,如苯溴馬隆、丙磺舒、新型URAT-1抑制劑、尿酸酶等,而目前臨床上尚無(wú)作用于嘌呤吸收途徑的降尿酸藥物。大量流行病學(xué)研究顯示富含嘌呤飲食的過(guò)量攝入是高尿酸血癥發(fā)病的危險(xiǎn)因素,并且有實(shí)驗(yàn)證明攝入酵母核酸僅在幾天內(nèi)就能誘發(fā)健康受試者血尿酸水平升高。同時(shí)有實(shí)驗(yàn)證明,低嘌呤飲食可使高尿酸血癥患者血清尿酸水平降低。因此可以看出嘌呤攝入增加確可增加血尿酸水平,抑制其腸胃吸收可以作為防治高尿酸血癥的一個(gè)作用環(huán)節(jié)。嘌呤(Purine)類物質(zhì)胃腸道吸收的主要部位在小腸,吸收主要形式是核苷,核苷的跨膜運(yùn)輸需要依賴核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。人體內(nèi)核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白主要有兩類:濃度型核苷轉(zhuǎn)運(yùn)體(concentrative nucleoside transporter,CNTs 或 SLC28)和平衡型核苷轉(zhuǎn)運(yùn)體(equilibrative nucleoside transporter,ENTs或SLC29)。CNTs是Na+依賴的富集型核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,是一種主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,可逆濃度差將細(xì)胞外核苷轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi),主要分布在腸上皮細(xì)胞頂膜;ENTs是通過(guò)易化擴(kuò)散方式轉(zhuǎn)運(yùn)嘧啶和嘌呤類物質(zhì),主要分布在腸上皮細(xì)胞基底外側(cè)膜,其中,濃度型核苷轉(zhuǎn)運(yùn)體CNT2是腸道吸收轉(zhuǎn)運(yùn)嘌呤核苷的主要轉(zhuǎn)運(yùn)體。hCNT2是嘌呤核苷特異性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在胃、空腸、回腸和腎等臟器豐富表達(dá),在小腸上皮細(xì)胞吸收嘌呤核苷的過(guò)程中,CNT2起主要作用。已有研究發(fā)現(xiàn)CNT2的蛋白和mRNA表達(dá)水平升高,使外源添加的核苷酸經(jīng)載體轉(zhuǎn)運(yùn)量增加。亦有實(shí)驗(yàn)證實(shí)口服給予猴CNT2選擇性抑制劑可通過(guò)抑制腸道嘌呤核苷的攝入顯著降低血尿酸水平。同時(shí)實(shí)驗(yàn)室前期虛擬篩選出菊苣中含有的可與CNT2結(jié)合的咖啡酸類、黃酮類及倍半萜類等21個(gè)化合物,其中含量較高、專屬性相對(duì)較強(qiáng)的菊苣酸可抑制IEC-6細(xì)胞CNT2對(duì)腺苷的轉(zhuǎn)運(yùn)。那么菊苣提取物能否通過(guò)干預(yù)CNT2的表達(dá)而影響腸道的嘌呤核苷吸收?嘌呤的過(guò)量吸收對(duì)內(nèi)源性核苷酸合成途徑及嘌呤的分解代謝途徑的關(guān)鍵酶以及血清尿酸水平的影響又是如何?尚有待研究。基于這些生活與臨床中的問(wèn)題,提出如下假說(shuō):高尿酸血癥的發(fā)病原因之一是過(guò)量的嘌呤攝入使得腸道嘌呤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CNT2表達(dá)增多,而CNT2的表達(dá)增加又可引起腸道嘌呤吸收增加,嘌呤代謝酶活化,尿酸生成增多。健脾祛濕中藥菊苣可通過(guò)對(duì)腸道CNT2的調(diào)控發(fā)揮降尿酸的作用機(jī)制。為驗(yàn)證此假說(shuō),本實(shí)驗(yàn)利用大鼠和鵪鶉兩種高尿酸血癥模型動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。研究目的第一:切入腸道嘌呤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CNT2,從腸道嘌呤吸收角度明確HUA大鼠和鵪鶉CNT2表達(dá)與高尿酸血癥發(fā)病的病理聯(lián)系,并結(jié)合嘌呤代謝途徑關(guān)鍵酶活性進(jìn)一步闡釋兩種模型動(dòng)物的病理表現(xiàn)。第二:通過(guò)分析菊苣提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠及鵪鶉腸道CNT2、嘌呤代謝途徑關(guān)鍵酶的影響,以及菊苣提取物對(duì)HUA鵪鶉空腸外翻腸囊轉(zhuǎn)運(yùn)腺苷的干預(yù),探討其降尿酸可能的干預(yù)環(huán)節(jié)和作用機(jī)制。研究方法本論文包括文獻(xiàn)綜述研究和實(shí)驗(yàn)研究?jī)刹糠�。文獻(xiàn)綜述部分通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外近十年文獻(xiàn),對(duì)高尿酸血癥流行病學(xué)特征、發(fā)病機(jī)制、中醫(yī)藥治療的研究進(jìn)展以及腸道嘌呤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究進(jìn)展及其與高尿酸血癥的關(guān)聯(lián)進(jìn)行梳理,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究提供理論與方法基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)研究部分采用病因誘導(dǎo)法復(fù)制動(dòng)物模型,利用高嘌呤食餌一定劑量的酵母誘導(dǎo)的HUA鵪鶉模型,利用同大鼠模型相同劑量的酵母合用小劑量腺嘌呤誘導(dǎo)HUA大鼠模型。結(jié)合生化檢測(cè)、實(shí)時(shí)熒光PCR、Western Blotting、免疫組化、高效液相等實(shí)驗(yàn)手段,從整體動(dòng)物、器官、組織、分子多層面對(duì)嘌呤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CNT2病理狀態(tài)下的表達(dá)變化進(jìn)行研究,闡釋菊苣提取物對(duì)于兩種模型動(dòng)物血清尿酸水平、嘌呤代謝酶活性、嘌呤吸收量、CNT2蛋白、mRNA表達(dá)量等的干預(yù)作用。實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容分為兩個(gè)章節(jié)。第一章高尿酸血癥狀態(tài)下模型動(dòng)物小腸CNT2的表達(dá)研究結(jié)合實(shí)驗(yàn)室前期基礎(chǔ)及文獻(xiàn)檢索結(jié)果,選擇嘌呤攝入增多為誘因的高尿酸血癥大鼠模型,篩選造模劑劑量,復(fù)制高尿酸血癥大鼠模型,觀察高尿酸血癥大鼠血尿酸水平、大鼠腸道CNT2表達(dá)變化。復(fù)制高嘌呤食餌誘導(dǎo)的高尿酸血癥鵪鶉模型,檢測(cè)其小腸CNT2的表達(dá)變化,探討高尿酸血癥狀態(tài)下CNT2的表達(dá)變化,為后續(xù)藥理藥效研究奠定基礎(chǔ)。第二章探討菊苣提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠、鵪鶉小腸CNT2表達(dá)的影響在病理研究的基礎(chǔ)上,明確菊苣提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠、鵪鶉小腸CNT2mRNA及蛋白表達(dá)的干預(yù),探討菊苣提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠、鵪鶉嘌呤代謝關(guān)鍵酶的影響,以及菊苣提取物對(duì)HUA鵪鶉空腸外翻腸囊腺苷轉(zhuǎn)運(yùn)的干預(yù),闡釋菊苣提取物降尿酸可能的作用環(huán)節(jié)及機(jī)制。研究結(jié)果高尿酸血癥狀態(tài)下模型動(dòng)物小腸CNT2的表達(dá)研究結(jié)果顯示:①一定劑量酵母聯(lián)合腺嘌呤誘導(dǎo)的高尿酸血癥大鼠模型、高嘌呤食餌誘導(dǎo)的高尿酸血癥鵪鶉模型的血清尿酸水平持續(xù)穩(wěn)定的升高,模型比較穩(wěn)定。②與正常組相比,高尿酸血癥大鼠十二指腸、空腸、回腸的CNT2 mRNA相對(duì)表達(dá)量均增加,其中空腸的CNT2 mRNA表達(dá)增加顯著。③與正常組相比,高尿酸血癥鵪鶉空腸CNT2蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著增加。菊苣提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠、鵪鶉的小腸CNT2表達(dá)的干預(yù)結(jié)果顯示:①菊苣提取物可穩(wěn)定降低模型動(dòng)物的血清尿酸水平、血清及肝臟中嘌呤代謝酶活性。②菊苣提取物可顯著下調(diào)高尿酸血癥大鼠CNT2 mRNA、蛋白相對(duì)表達(dá)量,顯著下調(diào)高尿酸血癥鵪鶉CNT2蛋白相對(duì)表達(dá)量。③腸囊外翻實(shí)驗(yàn)中菊苣提取物可降低高尿酸血癥鵪鶉空腸底物的轉(zhuǎn)運(yùn)量。研究結(jié)論1.HUA大鼠、鵪鶉腸道嘌呤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CNT2相對(duì)表達(dá)量上調(diào)與血清尿酸水平升高存在病理聯(lián)系。2.中藥菊苣的成分可與CNT2結(jié)合,干預(yù)小腸CNT2的相對(duì)表達(dá)量,及腸道嘌呤的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)。菊苣提取物可顯著下調(diào)高尿酸血癥大鼠腸道嘌呤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CNT2mRNA及蛋白表達(dá)、高尿酸血癥鵪鶉腸道CNT2蛋白表達(dá),減少模型動(dòng)物腸道嘌呤吸收,降低嘌呤代謝酶活性,從而達(dá)到降尿酸的作用機(jī)制。創(chuàng)新點(diǎn):1.從嘌呤吸收的角度切入,探討高尿酸血癥大鼠、鵪鶉兩種動(dòng)物模型HUA與腸道嘌呤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CNT2的相對(duì)表達(dá)量的病理聯(lián)系。2.發(fā)現(xiàn)菊苣提取物降尿酸的作用機(jī)制之一是顯著下調(diào)模型動(dòng)物腸道CNT2的相對(duì)表達(dá)量,減少嘌呤吸收。
【圖文】：

低（Ｐ＜０．０５），乙胺丁醇組、酵母＋腺嘌呤組大鼠體重在１４４２ｄ顯著降低（Ｐ＜０．０５），逡逑酵母＋乙胺丁醇組大鼠體重在２８￣４２ｄ顯著降低（Ｐ＜０．０５），酵母＋小劑量乙胺丁醇組大鼠逡逑體重在７ｄ、２８￣４２ｄ顯著降低（ＰＣ０．０５）。結(jié)果如表２，，圖１所示。逡逑表２各組大鼠不同時(shí)間體重變化（ｇ

４９ｄ攝食量顯著減少（Ｐ＜０．０５），乙胺丁醇組在２１ｄ攝食量顯著增加（Ｐ＜０．０５），酵母＋逡逑乙胺丁醇組及酵母＋小劑量乙胺丁醇組在４２ｄ、４９ｄ攝食量顯著減少（Ｐ＜０．０５）。如表３，逡逑圖２所示。逡逑表３各組大鼠不同時(shí)間攝食量變化（ｇ／ｋｇ，Ｔ±ｓ，ｎ＝１０）逡逑組別邐７ｄ邐１４ｄ邐２１ｄ邐２８ｄ邐３５ｄ邐４２ｄ逡逑正常組邐９６．３９±５．９０邐７５．９６士９．２５邐７４．２０±５．００邐６８．７１±６．６９邐５７．８７±６．００邐５９．０６±２．４１逡逑酵母組邐９１．１８±５．７９邐６９．１６±ｌ0．３５邐６９．５３±５．９５邐６３．３７±６．８６邐５０．０９±４．５６＊邐５０．３４±２．３７＊逡逑腺嘌呤組邐７９．５７±６．７１＊邐７５．０４±６．４７邐８１．６４土５．９５＊邐７２．８５±８．０８邐６０．４１士６．７３邐４６．６４±５．０８＊逡逑乙胺丁醇組邐９３．９７±６．０５邐７８．６８±１０．４１邐８４．８３±４．３６＊邐７７．５４±８．８８邐６１．７６±９．９１邐５７．４１±４．６７逡逑酵母＋腺嘌呤組邐８９．４７±９．０４邐６８．０８±１１．３７邐５９．８２±３．７６＊邐５０．７１±１０．１８＊邐４５．１４±８．６５＊邐４１．５１±５．４４＊逡逑酵母＋小劑量腺邐９５．９０±７．２８邐７３．４０±９．０９邐６６．３７±５．５５＊邐６２．０２±３．６９邐５１．６８±５．５２邐４９．５１±３．２２＊逡逑嘌呤組逡逑酵母＋乙胺丁醇邐９４．２５±４．３２邐７１．４２±１１．２０邐７４．３８±１．
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李少峰;陳燕;董陸玲;甄剛;李芙琴;;張家口市體檢人群高尿酸血癥患病現(xiàn)況及影響因素分析[J];預(yù)防醫(yī)學(xué);2018年03期

2 師朵芝;李德利;方明月;劉雙月;王青青;賡迪;馬超;王如峰;;外翻腸囊法研究金蓮花總黃酮的吸收特征[J];藥物評(píng)價(jià)研究;2018年01期

3 鞏仔鵬;李梅;侯靖宇;吳林霖;陳亭亭;李月婷;陳思穎;李勇軍;王愛(ài)民;蘭燕宇;王永林;;外翻腸囊法研究羊耳菊提取物在大鼠腸內(nèi)的吸收[J];中國(guó)中藥雜志;2018年03期

4 吳鴻霞;王娟;李偉;;2014-2016年新疆阿克蘇地區(qū)中老年人群高尿酸血癥患病率調(diào)查及影響因素[J];職業(yè)與健康;2017年14期

5 劉藝;程梅梅;董健健;周安;;外翻腸囊法研究肝豆湯醇提物主要成分的腸吸收特征[J];中國(guó)中藥雜志;2017年13期

6 馮國(guó)華;林華;普菁瑩;高麗輝;李玲;牛艷芬;;3,5,2',4'-四羥基查爾酮對(duì)大鼠尿酸及PC12細(xì)胞嘌呤代謝酶的影響[J];昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2017年05期

7 張?jiān)萍t;沙敏;趙義娟;陳曉云;龍瓏;張碧芳;馬皓楠;;大理白族灣橋社區(qū)老年人群血尿酸水平與代謝綜合征各組分的相關(guān)性研究[J];中華老年心腦血管病雜志;2017年05期

8 朱春勝;張冰;林志健;白云飛;;菊苣降尿酸有效成分及機(jī)制研究[J];中草藥;2017年05期

9 王陳芳;徐英英;瞿中潔;留菁菁;;泄?jié)嵋婺I方對(duì)高尿酸血癥腎損害大鼠白介素-1β的影響[J];中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理;2017年06期

10 聶安政;林志健;王雨;周月;孫小霞;李凡;蔡萌;周偉龍;張冰;;氧嗪酸鉀聯(lián)合酵母對(duì)SD大鼠尿酸生成和排泄及腎功能的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2016年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前2條

1 張國(guó)強(qiáng);馬秋剛;吳興利;計(jì)成;;外翻腸囊法研究肉仔雞腸道對(duì)肌苷酸的吸收[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)分會(huì)第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

2 唐文迎;李小武;滕脈坤;;人源磷酸核糖焦磷酸(PRPP)合成酶1(hPRS1)的表達(dá)、純化、結(jié)晶以及初步晶體學(xué)分析[A];第十次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 周月;基于分子對(duì)接技術(shù)探討菊苣抑制嘌呤吸收作用機(jī)制[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

2 吳倩;牛磺酸對(duì)高尿酸血癥腎病大鼠尿酸排泄的影響[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 楊會(huì)軍;健脾滲濕方對(duì)痛風(fēng)尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白調(diào)控作用研究[D];云南中醫(yī)學(xué)院;2014年

4 于舒雁;金錢草總黃酮對(duì)高尿酸血癥動(dòng)物模型的影響[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2014年

5 譚唱;萆參除痹湯對(duì)于高尿酸血癥模型血清尿酸及小鼠腎臟尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)鹽蛋白OAT1、URAT1 mRNA表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

6 劉楊柳;甜菜堿對(duì)高尿酸血癥小鼠腎損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2013年

7 伍麗娟;血府逐瘀湯對(duì)高尿酸血癥大鼠腎小管上皮細(xì)胞OAT3和URAT1作用的研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2013年

8 朱立然;萆參總皂苷對(duì)高尿酸血癥大鼠尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2013年

9 陳美南;李富玉教授治療高尿酸血癥的臨床研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

10 王圣燕;水柳皂苷對(duì)痛風(fēng)相關(guān)酶活性影響的初步研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2009年

本文編號(hào)：2647249