【摘要】：水飛薊賓是從菊科植物水飛薊的果實(shí)及種子中提取的多酚黃酮類化合物,具有抗炎、抗腫瘤和抗氧化等作用。本文對水飛薊賓的體外抗腫瘤活性及保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞兩方面進(jìn)行了研究:主要從氧化應(yīng)激角度闡述了水飛薊賓誘導(dǎo)人惡性膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡的機(jī)制;以及對H_2O_2處理的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,水飛薊賓對U251細(xì)胞增殖具有明顯的抑制作用。核染色分析驗(yàn)證了水飛薊賓誘導(dǎo)U251細(xì)胞死亡為細(xì)胞凋亡。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明,水飛薊賓作用U251細(xì)胞24 h、48 h和72 h均誘導(dǎo)了U251細(xì)胞凋亡,且呈時(shí)間和濃度依賴關(guān)系;同時(shí),水飛薊賓作用24 h后細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高,線粒體膜電位下降,并且水飛薊賓可以造成U251細(xì)胞G2/M期和S期阻滯。Western blot結(jié)果表明,水飛薊賓處理后上調(diào)了U251細(xì)胞內(nèi)Cleaved-Caspase-3和Cleaved-Caspase-9表達(dá),而Caspase-8沒有被活化。當(dāng)加入抗氧化劑NAC后,抑制了水飛薊賓對U251細(xì)胞的凋亡作用。在對神經(jīng)母細(xì)胞瘤的作用研究中,水飛薊賓作用24 h對SH-SY5Y細(xì)胞活力影響較小,而200μM H_2O_2處理細(xì)胞24 h后,細(xì)胞活力接近50%,此濃度作為氧化損傷最適濃度,與模型組相比較,用50μM和100μΜ水飛薊賓預(yù)處理SH-SY5Y細(xì)胞3 h能顯著提高細(xì)胞存活率(P0.01)和減少凋亡,降低細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的水平,穩(wěn)定線粒體膜電位,降低了和凋亡相關(guān)Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3的表達(dá)。由此可見,水飛薊賓對不同的細(xì)胞株有不同的作用,水飛薊賓長時(shí)間處理U251細(xì)胞可以誘導(dǎo)凋亡和抑制增殖,而水飛薊賓短時(shí)間處理卻可以保護(hù)H_2O_2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷。水飛薊賓誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡可能通過造成細(xì)胞G2/M期和S期阻滯,提高細(xì)胞內(nèi)ROS水平,進(jìn)而通過線粒體途徑來誘導(dǎo)人惡性膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡。而水飛薊賓保護(hù)SH-SY5Y細(xì)胞免受H_2O_2損傷可能通過水飛薊賓的抗氧化性和穩(wěn)定線粒體膜電位,從而抑制細(xì)胞的凋亡。
【圖文】：

TNFR1）是最佳特征模型，定義了細(xì)胞凋亡外在階段的事件序列。圖 1.1 以圖形方式表示以上事件。圖1.1 凋亡外源途徑的分子機(jī)制及氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)TNFα 的關(guān)鍵生物學(xué)功能是通過死亡受體 TNFR1 介導(dǎo)的。TNFα-TNFR1 通過二硫鍵結(jié)合導(dǎo)致受體三聚化和交聯(lián)，反過來釋放死亡域中的抑制沉默子，這也導(dǎo)致 TNFR1 中相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域（TRADD）的響應(yīng)[16]。 因此，，形成復(fù)合物 I 和 II 并激活不同的下游信號傳導(dǎo)途徑，即存活或凋亡（圖 1.1）。TRADD 在復(fù)合物 I 中起到受體相互作用蛋白 1（RIP1）和 TNF 受體相關(guān)因子 2（TRAF2）的支架作用。這反過來促進(jìn)了 TGF-β 激酶 1 的募集和 NF-κB、Jun N-末端蛋白激酶（JNK）和 p38 的激活。與 NF-κB 活化一起，抗凋亡蛋白如 c-FLIP、Bcl-xL、X 連鎖凋亡抑制劑（XIAP）和細(xì)胞凋亡抑制因子（c-IAP）1 和 2 也被激活（圖 1.1）。凋亡信號調(diào)節(jié)激酶 1（ASK1）的激活與 ROS 對 c-FLIP 蛋白酶體降解和 JNK 活化有關(guān)[19]。接下來闡述復(fù)合物 II 介導(dǎo)的凋亡機(jī)制，復(fù)合物 II 在 TNFR1 受體內(nèi)吞作用后在細(xì)胞

最終產(chǎn)生活性 Caspase-9 并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡（圖 1.1）。而 Smac/DIABLO 和HtrA2/Omi 抑制 IAP 活性，從而通過間接激活 Caspase-3 促進(jìn)細(xì)胞凋亡。另一方面，AIF、EndoG 和 CAD 從線粒體釋放后直接進(jìn)入細(xì)胞核并切割 DNA，而與 Caspase 無任何相互作用（圖 1.2）。這種機(jī)制被稱為細(xì)胞晚期事件，只有在細(xì)胞凋亡后才會發(fā)生[18]。細(xì)胞色素 C 是線粒體膜間隙蛋白，被限制在線粒體內(nèi)膜的外側(cè)，與線粒體特有磷脂和心磷脂結(jié)合，它在細(xì)胞內(nèi)電子傳遞鏈反應(yīng)中占有重要地位。氧化應(yīng)激可以促進(jìn)細(xì)胞色素 C 從線粒體內(nèi)釋放。研究表明，心磷脂（CL）被氧化降低了其與細(xì)胞色素 C 結(jié)合的親和力，并且還促進(jìn)了線粒體內(nèi)膜（IMM）上細(xì)胞色素 C 的活性[26]（圖 3）。在心磷脂的存在下，細(xì)胞色素 C 顯示出過氧化物酶活性。在心磷脂的復(fù)合物中，H2O2催化細(xì)胞色素 C 依賴性的心磷脂過氧化。此外，Perier 等[27]人已經(jīng)證明了隨著復(fù)合物 I 活性被抑制，線粒體內(nèi)氧化應(yīng)激增加，在膜間隙中產(chǎn)生 H2O2，這反過來增加了可溶性細(xì)胞色素 C的釋放量，隨后，這種可溶性細(xì)胞色素 C 通過線粒體膜孔釋放到細(xì)胞質(zhì)中。
【學(xué)位授予單位】：吉林化工學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285

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