【摘要】：痹證的主要癥狀為關(guān)節(jié)腫脹、疼痛。痹證的疼痛多屬于慢性疼痛,表現(xiàn)為痛覺過敏。烏頭味辛、苦,性熱,是治療寒痹證的要藥。本研究擬建立寒、熱痹證大鼠模型,并觀察烏頭在寒、熱痹證模型大鼠上的鎮(zhèn)痛作用的差異,并分析其機(jī)制。第一部分寒、熱痹證大鼠模型的研究目的:建立寒、熱痹證大鼠模型,并發(fā)現(xiàn)寒濕、濕熱因素對(duì)模型大鼠痛覺過敏影響的差異。方法:在大鼠右后肢足趾部皮下注CFA 0.1ml,并將模型大鼠每天分別放入設(shè)置好條件恒溫人工氣候箱4h。寒痹模型組的環(huán)境條件為:溫度設(shè)置為10℃,濕度設(shè)置為70%,風(fēng)速設(shè)置為1.5m/s,熱痹模型組的環(huán)境條件為:溫度設(shè)置為30℃,濕度設(shè)置為70%,風(fēng)速設(shè)置為1.5m/s。分別在造模前和造模后第3d、第5d、第7d、第9d、第11d、第13d測(cè)量各組大鼠50%機(jī)械痛反應(yīng)值、痛反應(yīng)時(shí)間、腋溫,造模前和造模后第3d、第7d、第14d測(cè)量大鼠的體重,以及24h監(jiān)控各組大鼠的飲食、飲水和尿量的變化。并采用蛋白芯片法,檢測(cè)模型大鼠脊髓L4-6段67個(gè)炎性因子的表達(dá)。結(jié)果:模型組大鼠造模后第3d50%機(jī)械痛反應(yīng)值和痛反應(yīng)時(shí)間均顯著性降低(與基礎(chǔ)值相比較P0.01),并分別于第7d、第9d達(dá)到峰值,且一直持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束(與對(duì)照組相比較P0.01)。引入寒濕因素后,早期大鼠患足對(duì)機(jī)械刺激的敏感性不同程度降低,其中第7天作用明顯(與模型組相比較P0.01),但在后期隨造模時(shí)間延長(zhǎng)大鼠50%機(jī)械痛反應(yīng)值較模型組大鼠不同程度降低;其中第13天作用明顯(與模型組相比較P0.05)。寒涼因素引入后,早期可不同程度抑制大鼠患足對(duì)溫度刺激敏感性的升高,其中造模后第3、7天作用明顯(與模型組相比較P0.01);但后期隨造模時(shí)間延長(zhǎng)可不同程度提高大鼠患足對(duì)溫度刺激的敏感性,其中造模后第9、11天作用明顯(與模型組相比較P0.05)。造模后模型動(dòng)物體溫及飲食飲水量未見明顯變化,但引入寒濕與濕熱因素后,寒痹、熱痹模型大鼠體重、24小時(shí)總排尿量與對(duì)照組大鼠、模型組大鼠有不同程度的差異,表現(xiàn)為體重的降低,尿量的減少,其中寒濕因素的引入作用明顯。蛋白芯片檢測(cè)趨化因子Fractalkine是比較符合本研究方向的表達(dá)差異蛋白。結(jié)論:大鼠右后肢足趾部皮下注射弗氏完全佐劑后14d,大鼠患足對(duì)機(jī)械刺激、溫度刺激敏感,痛覺過敏形成。寒濕、濕熱因素的引入對(duì)模型大鼠痛覺具有一定影響,且寒濕因素可使模型大鼠痛覺過敏加劇。大鼠脊髓Fractalkine蛋白的表達(dá),可分析寒濕、濕熱因素的引入對(duì)痹證模型大鼠痛覺敏感的影響。第二部分烏頭對(duì)寒痹、熱痹大鼠痛覺過敏干預(yù)作用的研究目的:觀察烏頭對(duì)寒痹、熱痹模型模型大鼠的鎮(zhèn)痛作用的差異,并分析其作用機(jī)制。方法:大鼠隨機(jī)分為9組,即對(duì)照組,模型組,布洛芬組,熱痹模型組,寒痹模型組,烏頭熱痹1.6、0.8g生藥/kg組,烏頭寒痹1.6、0.8g生藥/kg組。除對(duì)照組外,各組大鼠右后肢足趾部皮下注CFA 0.1ml,并將模型大鼠每天分別放入設(shè)置好條件恒溫人工氣候箱4h。寒痹模型組的環(huán)境條件為:溫度設(shè)置為10℃,濕度設(shè)置為70%,風(fēng)速設(shè)置為1.5m/s,熱痹模型組的環(huán)境條件為:溫度設(shè)置為30℃,濕度設(shè)置為70%,風(fēng)速設(shè)置為1.5m/s。分別在造模前和造模后第3d、7d、10d、14d測(cè)量各組大鼠50%機(jī)械痛反應(yīng)值、痛反應(yīng)時(shí)間。并采用Western Blot法,免疫組化法檢測(cè)大鼠患側(cè)脊髓L4-6段及背根神經(jīng)節(jié)中CD11b/c、FNK、CX3CR1和NMDAR的表達(dá)。結(jié)果:造模后,模型大鼠50%機(jī)械痛反應(yīng)值、痛反應(yīng)時(shí)間明顯降低(與同組基礎(chǔ)值相比較P0.01)。模型組大鼠在造模后各時(shí)間點(diǎn)患足50%機(jī)械痛反應(yīng)值均、痛反應(yīng)時(shí)間明顯低于對(duì)照組(與對(duì)照組相組比較P0.01),且于造模后第7d50%機(jī)械痛反應(yīng)值達(dá)到最低,在造模后第14d未見明顯恢復(fù)。引入寒濕因素后第3d,大鼠患足對(duì)機(jī)械刺激的敏感性明顯降低(與模型組相比較P0.01),但在第10d、第14d,可使大鼠50%機(jī)械痛反應(yīng)值較模型組大鼠明顯降低(與模型組相比較P0.05);引濕熱因素后各時(shí)間點(diǎn)大鼠患足對(duì)機(jī)械刺激敏感程度變化不大(與模型組相比較P0.05);但造模后第7、1Od寒痹模型組與熱痹模型組相比較,有明顯差異(與熱痹模型組相組比較P0.01,P0.05)。烏頭各劑量組可不同程度提高寒痹模型大鼠的50%機(jī)械痛反應(yīng)值,其中烏頭1.6g/kg在給藥后第10、14d,烏頭0.8g/kg在給藥后第10、14d作用明顯(與寒痹模型組相比較P0.01,P0.05);烏頭各劑量組可不同程度提高熱痹模型大鼠對(duì)機(jī)械刺激的敏感性,且劑量越大作用越明顯,表現(xiàn)為50%機(jī)械痛反應(yīng)值不同程度的降低,其中烏頭1.6g/kg在給藥后第3、7、14d作用明顯(與熱痹模型組相比較P0.01),烏頭0.8g/kg在給藥后第3d作用明顯(與熱痹模型相比較P0.05)。且同劑量烏頭熱痹組與烏頭寒痹模型相組比較亦有不同程度差異,其中烏頭1.6g/kg在給藥后各時(shí)間點(diǎn),烏頭0.8g/kg在給藥后第3、7、14d烏頭寒痹組大鼠50%機(jī)械痛反應(yīng)值明顯增高(同劑量烏頭熱痹組與寒痹模型相組比較P0.01,P0.05)。寒涼因素的引入可不同程度抑制大鼠患足對(duì)溫度刺激敏感性的升高,其中造模后第3、7d作用明顯(與模型組相比較P0.01);濕熱因素的引入在第3d可延長(zhǎng)模型大鼠痛反應(yīng)時(shí)間(與模型組相比較P0.05),其余各時(shí)間點(diǎn)作用不明顯;寒痹模型組大鼠患足痛反應(yīng)時(shí)間在造模后第7、10d明顯長(zhǎng)于熱痹模型大鼠(與熱痹模型組比較P0.01)。烏頭各劑量組可不同程度延長(zhǎng)寒痹模型大鼠患足的痛反應(yīng)時(shí)間,其中烏頭1.6g/kg第7d作用明顯(與寒痹模型組相比較P0.05);烏頭各劑量組可不同程度提高熱痹模型大鼠對(duì)溫度刺激的敏感性,表現(xiàn)為痛反應(yīng)時(shí)間不同程度的縮短,其中烏頭1.6g/kg第3d、7d、10d作用最為明顯(與熱痹模型組相比較P0.05,P0.01)。烏頭0.8g/kg在給藥后第7d,烏頭寒痹組的痛反應(yīng)時(shí)間明顯高于同劑量烏頭熱痹組(同劑量烏頭熱痹組與寒痹模型相組比較P0.05)。Western Blot法,免疫組化法檢測(cè)造模后,模型組大鼠患側(cè)脊髓、背根神經(jīng)節(jié)中NMDAR、CD11b/c、FNK、CX3CR1的表達(dá)明顯增高(對(duì)照組相比比較P.01)。寒、熱痹證模型組大鼠脊髓中NMDAR、CD1b/c、FNN、CX3RR表達(dá)均高于模型組,痹模型組比寒寒模型組升高的更明顯(與模型組相比較PP..01寒痹模型組與熱熱模型組相比較P.01)。烏頭可明顯抑制寒痹模型大鼠患側(cè)脊髓背根神經(jīng)節(jié)中中NMDAR、CD1b/c、FNK、CX3RR的表達(dá)(與寒痹模型組相比較較0005,,P0.0),對(duì)熱痹大鼠的作用則相反(與熱痹模型組相比較P0.01)。結(jié)論:寒、熱因素的引入加重痹證模型大鼠疼覺敏感。烏頭對(duì)寒痹的鎮(zhèn)痛效果明顯,但對(duì)熱痹的疼痛有加劇用。烏頭的這種作用與其調(diào)節(jié)模型大鼠患側(cè)脊髓背角和背根神經(jīng)節(jié)中FKH、CX3CR1、CD11b/c、NMDAR的表達(dá)有關(guān)。
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注：模型組與對(duì)照組相比較＞＜０．０１；邋＞＜０．０１；與模型組相比較—Ｐ＜０．０１，邋＞＜０．０５；烏頭熱痹模型組以及寒痹模型組與熱痹模型組相比較ｍｐｃＯ．Ｏｌ，邋＝Ｐ＜０．０５；烏頭給藥給藥寒痹模型組與逡逑寒痹模型組相比較＾邋Ｐ＜０．０ｌ／Ｐ＜０．０５；同劑量烏頭熱痹模型組與寒痹模型相組比較＊＊Ｐ＜０．０１，逡逑★尸＜０＿０５；逡逑表２．５烏頭對(duì)寒、熱痹模型大鼠脊髓中＿，＼表達(dá)的影響（§，無±３）（１）逡逑邐Ｍ邐動(dòng)物數(shù)邐劑量（ｇ／ｋｇ）邐ＮＭＤＡＲ對(duì)照組邐５邐－邐０．１６Ｕ０．００１＊逡逑模型組邐５邐－邐０．３４７±０．００２逡逑布洛芬組邐６邐０．０６邐０．２３４±０．００５＊＇逡逑熱痹模型組邐５邐－邐０．５９０±０．００４＂＂逡逑寒痹模型組邐５邐－邐０．５１６±０．００５邋一６８逡逑烏頭熱痹組邐６邐0．８邐ｏ．ｓｓｅｉｏ．ｏｏ？＊逡逑６邐１．６邐０．６３６士０．００４°＊逡逑烏頭寒痹組邐６邐０．８邐０．５０１±０．００２＾＊＊逡逑邐６邐Ｌ６邐０．４２８±０．００２}★★逡逑注：模型組與對(duì)照組相比較＞＜０．０１；與模型組相比較“尸＜０．０１，＇尸＜０．０５；烏頭熱痹模型組以及寒痹模型組與熱痹模型組相比較＝Ｐ＜０．０１，邋＝Ｐ＜０．０５；烏頭給藥給藥寒痹模型組與寒痹模型組逡逑相比較ｈ尸＜０．０１，＞＜０．０５；同劑量烏頭熱痹模型組與寒痹模型相組比較＊＊Ｐ＜０．０１，邋＊尸＜０．０５；逡逑．１■＞—逡逑

邐—逡逑Ａ邋Ｂ邋Ｃ邋Ｄ邋Ｅ邋ＦＧＨＩ逡逑圖２．邋３烏頭對(duì)寒、熱痹模型大鼠脊髓中ＮＭＤＡ表達(dá)的影響逡逑注：Ａ－對(duì)照組，Ｂ－模型組，Ｃ－布洛芬組，Ｄ－熱痹模型組，Ｅ－寒痹模型組，，Ｆ－烏頭熱痹中劑量組，逡逑Ｇ－烏頭熱痹氋劑量組，Ｈ－烏頭寒痹中劑量組，Ｉ－烏頭寒痹高劑量組逡逑關(guān)于ＦＫＮ結(jié)果顯示，造模后，模型組大鼠脊髓中ＦＫＮ的表達(dá)明顯高于對(duì)照組（與逡逑對(duì)照組相比較Ｐ＜０．０１），布洛芬抑制了模型大鼠脊髓中ＦＫＮ的表達(dá)（與模型組相比逡逑較Ｐ＜０．０１）。相比模型組，寒、熱痹證模型大鼠脊髓中ＦＫＮ蛋白表達(dá)顯著性X椉櫻ㄓ脲義夏Ｐ妥橄啾冉匣В

本文編號(hào)：2643573