【摘要】：知母為百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的干燥根莖,具有清熱瀉火,滋陰潤燥的功效。知母分布全國各地,主產(chǎn)于河北省和山西省。河北省張家口地區(qū)知母資源豐富,但目前沒有統(tǒng)一的質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。因此,為了用藥的安全性和有效性,應(yīng)對張家口地區(qū)產(chǎn)知母藥材進(jìn)行鑒別及有效成分含量測定,并建立其指紋圖譜及共有模式圖。為張家口地區(qū)產(chǎn)的知母建立一個(gè)統(tǒng)一的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),具有十分重要的意義�，F(xiàn)代藥理研究表明知母中甾體皂苷類、雙苯吡酮類成分能有效抑制小腸內(nèi)α-葡萄糖苷酶,減小糖在小腸內(nèi)的吸收面積,延后吸收時(shí)間,從而降低餐后血糖。本實(shí)驗(yàn)從體外研究知母提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制作用,從知母降血糖這一藥理作用方面完善對張家口地區(qū)產(chǎn)知母的質(zhì)量評價(jià)。本實(shí)驗(yàn)通過比較產(chǎn)于張家口地區(qū)與其他地區(qū)知母在藥材鑒別、水分、灰分、酸不溶性灰分、有效成分含量測定、指紋圖譜、藥效等方面的不同,對張家口地區(qū)產(chǎn)知母的質(zhì)量控制進(jìn)行了研究,為鑒別張家口地區(qū)產(chǎn)知母提供了有效方法。1.知母的鑒別不同產(chǎn)地的知母通過以下兩種方法進(jìn)行鑒別。一、從知母的性狀對其進(jìn)行鑒別:采用外觀觀察法表明,25批知母質(zhì)地堅(jiān)硬、內(nèi)部斷面顏色為黃白色、有光澤、氣微、味微甜、略苦、有黏性、毛知母有須毛、知母肉沒有須毛,不同產(chǎn)地知母沒有明顯的區(qū)別均符合國家藥典的規(guī)定。二、照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)對其進(jìn)行薄層鑒別:供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的熒光斑點(diǎn)。不同產(chǎn)地知母色譜圖并沒有明顯區(qū)別,但其可以作為知母的定性鑒別。2.知母的水分、總灰分、酸不溶性灰分檢測按照2015版《中國藥典》附錄通則(0832)第二法對知母進(jìn)行水分測定表明,張家口地區(qū)產(chǎn)野生知母肉水分含量為7.77%~8.21%,平均水分含量為7.99%,種植知母肉水分含量為7.33%~8.76%,平均水分含量為8.00%。其他產(chǎn)地種植知母肉水分含量為8.77%~9.35%,平均水分含量為9.07%比張家口地區(qū)高1.07%。張家口地區(qū)產(chǎn)種植毛知母水分含量為7.32%~8.05%,平均水分含量為7.83%。其他產(chǎn)地種植毛知母水分含量為7.64%~9.50%,平均水分含量為8.51%比張家口地區(qū)高0.68%。均符合藥典中規(guī)定的不得超過12.00%。按照2015版《中國藥典》附錄通則(2302)法對知母進(jìn)行總灰分測定表明,張家口地區(qū)產(chǎn)野生知母肉總灰分含量為4.12%~5.40%,平均總灰分含量為4.67%,種植知母肉總灰分含量為5.09%~5.73%,平均總灰分含量為5.39%。其他產(chǎn)地種植知母肉總灰分含量為4.72%~5.98%,平均總灰分含量為5.39%。張家口地區(qū)產(chǎn)種植毛知母總灰分含量為3.84%~5.96%,平均總灰分含量為5.20%。其他產(chǎn)地種植毛知母總灰分含量為4.73%~5.67%,平均總灰分含量為5.20%。均符合藥典中規(guī)定的不得超過9.00%。按照2015版《中國藥典》附錄通則(2302)法對知母進(jìn)行酸不溶性灰分測定表明,張家口地區(qū)產(chǎn)野生知母肉酸不溶性灰分含量為1.35%~1.62%,平均酸不溶性灰分含量為1.47%,種植知母肉酸不溶性灰分含量為1.48%~1.64%,平均酸不溶性灰分含量為1.58%。其他產(chǎn)地種植知母肉酸不溶性灰分含量為1.52%~1.72%,平均酸不溶性灰分含量為1.58%。張家口地區(qū)產(chǎn)種植毛知母酸不溶性灰分含量為1.54%~1.78%,平均酸不溶性灰分含量為1.70%。其他產(chǎn)地種植毛知母酸不溶性灰分含量為1.53%~1.89%,平均酸不溶性灰分含量為1.72%。均符合藥典中規(guī)定的不得超過4.00%。3.知母中總黃酮、總皂苷含量檢測70%乙醇超聲提取30 min,離心,取上清液,加5%亞硝酸鈉溶液0.5 m L,搖勻,放置6 min,10%硝酸鋁溶液0.5 m L,搖勻,放置6 min,加5%氫氧化鈉溶液5 m L,70%乙醇定容至25 m L,在258 nm波長處測定吸光度值表明,張家口地區(qū)產(chǎn)野生知母肉總黃酮含量為3.56%~4.92%,平均總黃酮含量為4.16%,產(chǎn)種植知母肉總黃酮含量為2.01%~2.65%,平均酸不溶性灰分含量為2.35%。其他產(chǎn)地種植知母肉總黃酮含量為1.29%~3.35%,平均總黃酮含量為2.29%比張家口地區(qū)低0.06%。張家口地區(qū)產(chǎn)種植毛知母總黃酮含量為1.03%~4.92%,平均總黃酮含量為2.92%。其他產(chǎn)地種植毛知母總黃酮含量為1.57%~3.83%,平均總黃酮含量為2.88%比張家口地區(qū)低0.04%。30%丙酮超聲提取30 min,離心,取上清液,然后加磷酸6.0 m L和1.0%對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液2.0 m L,在60℃水浴中加熱60 min后進(jìn)行冰水浴冷卻5 min,再加無水乙醇4.0 m L,搖勻,30%丙酮定容至25 m L,在520 nm波長處測吸光度值表明,張家口地區(qū)產(chǎn)野生知母肉總皂苷含量為7.42%~8.12%,平均總皂苷含量為7.74%,種植知母肉總皂苷含量為6.78%~7.58%,平均總皂苷含量為7.18%。其他產(chǎn)地種植知母肉總皂苷含量為6.45%~7.57%,平均總皂苷含量為6.97%比張家口地區(qū)低0.21%。張家口地區(qū)產(chǎn)種植毛知母總皂苷含量為6.65%~8.24%,平均總皂苷含量為7.59%。其他產(chǎn)地種植毛知母總皂苷含量為6.76%~8.32%,平均總皂苷含量為7.57%比張家口地區(qū)低0.02%。4.知母中新芒果苷、芒果苷含量檢測采用Syncronis C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色譜柱,以乙腈-水(13:87)為流動(dòng)相,流速0.25 m L·min-1,檢測波長258 nm,柱溫35℃,進(jìn)樣量5μL,運(yùn)行時(shí)間6 min,測得新芒果苷、芒果苷含量。結(jié)果表明,新芒果苷、芒果苷的線性范圍分別為1.25~80μg·m L-1、1.875~120μg·m L-1。張家口地區(qū)產(chǎn)野生知母肉新芒果苷含量含量為1.44%~2.90%,平均新芒果苷含量含量為2.22%,種植知母肉新芒果苷含量為0.94%~1.65%,平均新芒果苷含量為1.28%。其他產(chǎn)地種植知母肉新芒果苷含量為0.49%~1.86%,平均新芒果苷含量為1.12%比張家口地區(qū)低0.16%。張家口地區(qū)產(chǎn)種植毛知母新芒果苷含量為0.98%~2.61%,平均新芒果苷含量為1.68%。其他產(chǎn)地種植毛知母新芒果苷含量為0.66%~1.88%,平均新芒果苷含量為1.29%比張家口地區(qū)低0.39%。張家口地區(qū)產(chǎn)野生知母肉芒果苷含量含量為1.45%~2.58%,平均芒果苷含量含量為1.73%,種植知母肉芒果苷含量為0.83%~1.20%,平均芒果苷含量為0.96%。其他產(chǎn)地種植知母肉芒果苷含量為0.33%~1.71%,平均芒果苷含量為0.97%比張家口地區(qū)高0.01%。張家口地區(qū)產(chǎn)種植毛知母芒果苷含量為0.93%~2.09%,平均芒果苷含量為1.40%。其他產(chǎn)地種植毛知母芒果苷含量為0.70%~1.79%,平均芒果苷含量為1.43%比張家口地區(qū)高0.03%。5.知母指紋圖譜的建立采用ACQUITY UPLC?HSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色譜柱,以A為水,B為乙腈,按不同比例進(jìn)行梯度洗脫(0~2 min,5%~20%B;2~5 min,20%~25%B;5~10 min,25%~100%B),流速0.25 m L·min-1,檢測波長210 nm,柱溫35℃,進(jìn)樣5μL,運(yùn)行時(shí)間10 min條件下建立知母的指紋圖譜。將10批張家口地區(qū)和5批其他地區(qū)知母進(jìn)行指紋圖譜研究,建立了不同產(chǎn)地知母的指紋圖譜及共有模式圖,確定16個(gè)色譜峰為15批知母的共有峰。將15批樣品進(jìn)行聚類分析,結(jié)果將樣品分為2類,取第1類中1~11號張家口知母樣品指紋圖譜建立張家口地區(qū)知母指紋圖譜及共有模式圖,并確定20個(gè)色譜峰為11批藥材的共有峰。將張家口地區(qū)指紋圖譜共有模式圖、15批知母樣品指紋圖譜進(jìn)行相似度分析結(jié)果表明,1~11號樣品與張家口知母指紋圖譜共有模式的相似度均在0.95以上,反映出張家口知母內(nèi)在整體化學(xué)結(jié)構(gòu)極為相似,為人工種植提供了依據(jù)。6.知母提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制作用采用對硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)法研究知母提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制作用顯示,張家口地區(qū)產(chǎn)野生知母肉抑制率為90.35%~95.44%,平均抑制率為91.80%,種植知母肉抑制率為73.71%~86.54%,平均抑制率為80.68%。其他產(chǎn)地種植知母肉抑制率為59.16%~89.86%,平均抑制率為78.80%比張家口地區(qū)低1.88%。張家口地區(qū)產(chǎn)種植毛知母抑制率為85.37%~93.76%,平均抑制率為90.00%。其他產(chǎn)地種植毛知母抑制率為81.74%~90.69%,平均抑制率為87.2%比張家口地區(qū)低2.8%。將知母各組分對α-葡萄糖苷酶的抑制率進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示知母中芒果苷和總皂苷成分對α-葡萄糖苷酶具有良好的抑制作用,而知母中新芒果苷成分對α-葡萄糖苷酶沒有明顯的抑制作用。因此,芒果苷可作為知母的質(zhì)量標(biāo)志物(Q-Marker),有助于建立知母的全程質(zhì)量控制及質(zhì)量溯源體系。
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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