【摘要】：急性肝損傷(ALF)是一種伴有嚴(yán)重肝細(xì)胞壞死及肝功能衰竭的臨床綜合征,具有極高的死亡率。但目前,除了肝移植仍沒(méi)有有效的治療手段。因此,尋找安全有效的防治方法有重要意義。本論文以昆明小鼠和L02細(xì)胞為模型,研究了8-辛基小檗堿(OBBR)對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制,為尋找預(yù)防急性肝損傷的藥物提供理論基礎(chǔ)。本研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下:(1)探究了8-辛基小檗堿的安全性。對(duì)昆明小鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明8-辛基小檗堿的LD_(50)值約為720.138 mg/kg;在對(duì)SD大鼠的亞慢性毒性研究中,與對(duì)照組相比,藥物組大鼠的重要臟器指數(shù)(心、肝、脾、肺、腎等)及血液學(xué)檢測(cè)結(jié)果均沒(méi)有顯著性變化。因此,8-辛基小檗堿是一種相對(duì)安全的化合物。(2)在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,運(yùn)用D-GalN/LPS誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠模型研究了8-辛基小檗堿對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用。觀察統(tǒng)計(jì)了8-辛基小檗堿對(duì)D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)誘導(dǎo)的小鼠死亡率的影響;對(duì)肝臟組織進(jìn)行了病理學(xué)觀察;檢測(cè)了各組小鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性;檢測(cè)了小鼠血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及C-反應(yīng)蛋白(CRP)的表達(dá)和肝臟組中織環(huán)氧化酶-2(COX-2)和一氮化氮合酶(iNOS)的表達(dá);同時(shí)檢測(cè)了小鼠肝臟組織谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的表達(dá)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,8-辛基小檗堿提高了D-GalN/LPS誘導(dǎo)的小鼠存活率;改善了D-GalN/LPS引起的病理學(xué)改變;抑制了D-GalN/LPS誘導(dǎo)的血清ALT和AST活性的升高;降低了D-GalN/LPS誘導(dǎo)的小鼠血清中TNF-α、IL-6及CRP的表達(dá)和肝臟組織中COX-2及iNOS的表達(dá);并抑制了D-GalN/LPS誘導(dǎo)的肝臟組織MDA的產(chǎn)生和GSH、SOD的消耗。這些結(jié)果一致表明,8-辛基小檗堿對(duì)急性肝損傷有保護(hù)作用。(3)基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的原理,根據(jù)反向藥效團(tuán)匹配方法預(yù)測(cè)了8-辛基小檗堿的潛在作用靶點(diǎn)。利用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)生物學(xué)方法及網(wǎng)絡(luò)可視化軟件,構(gòu)建了“藥物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果表明,8-辛基小檗堿的藥理作用集中于代謝性性疾病、癌癥、免疫性疾病等,與各種肝臟疾病及炎癥之間也具有顯著性關(guān)系。KEGG通路分析及配體受體相互作用結(jié)果表明,8-辛基小檗堿可能通過(guò)抑制MAPK及NF-κB信號(hào)通路而對(duì)急性肝損傷起保護(hù)作用。(4)在體外實(shí)驗(yàn)中,利用LPS誘導(dǎo)的L02細(xì)胞作為急性肝損傷模型對(duì)8-辛基小檗堿的肝保護(hù)作用機(jī)制進(jìn)行了探究。首先利用MTT法分析了8-辛基小檗堿對(duì)L02細(xì)胞增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,8-辛基小檗堿濃度小于0.1μg/mL時(shí)對(duì)L02細(xì)胞沒(méi)有明顯的影響,其存活率達(dá)85%以上,其IC_(50)值為1.28μg/mL。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,8-辛基小檗堿降低了LPS誘導(dǎo)的L02細(xì)胞中細(xì)胞因子如TNF-α及COX-2的表達(dá),這說(shuō)明8-辛基小檗堿對(duì)LPS誘導(dǎo)的L02細(xì)胞具有保護(hù)作用。采用qRT-PCR方法對(duì)LPS誘導(dǎo)的L02細(xì)胞中通路相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行了分析,結(jié)果表明,8-辛基小檗堿抑制了LPS誘導(dǎo)的TLR4、ERK、p38、JNK及NF-κB的mRNA表達(dá)。同時(shí),利用Western Blot方法分析了8-辛基小檗堿對(duì)信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的影響,結(jié)果表明,8-辛基小檗堿抑制了LPS誘導(dǎo)的TLR4、p-ERK、p-p38和p-JNK表達(dá)的增加,同時(shí),8-辛基小檗堿抑制了LPS誘導(dǎo)的NF-κB從細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)移。綜上所述,8-辛基小檗堿對(duì)急性肝損傷有較好的保護(hù)作用,并有可能作為一種新型的急性肝損傷防治藥物。
【圖文】：

圖 1-2 8-辛基小檗堿的結(jié)構(gòu)式Fig 1-2 Chemical structure of 8-octyl berberine有多種藥理作用，但其生物利用度較低。8代衍生物，8-辛基小檗堿與小檗堿具有高

圖 4-1 8-辛基小檗堿對(duì) D-GalN/LPS 誘導(dǎo)的小鼠存活率的影響Fig 4-1 Effect of 8-octyl berberine on the survival rate of mice induced by D-GalN/LPSNote: Mice were orally administered saline or 8-octyl berberine (15 and 30 mg/kg) for 7 consecutive days beforeD-GalN/LPS injection. The survival rate were observed within 24 h after D-GalN/LPS injection.**p < 0.01 versuscontrol group;##p < 0.01 versus GaIN/LPS group. D-GalN/LPS, D-galactosamine/lipopolysaccharide. OBBR, 8-octylberberine.
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2642177