【摘要】：目的研究新藥二氫楊梅素銨鹽對急、慢性酒精性肝損傷小鼠的解酒醒腦及保肝作用,并初步探討其作用機(jī)制。方法1.將SPF級(jí)C57BL/6J小鼠分為5組,即空白對照組(正常小鼠),模型組(酒精組),二氫楊梅素組(5 mg/kg,DHM組),二氫楊梅素銨鹽低劑量組(5 mg/kg,低TDHM組),二氫楊梅素銨鹽高劑量組(10 mg/kg,高TDHM組)。DHM組及低、高TDHM組均予以相應(yīng)劑量藥物灌胃,空白對照組、酒精組予以等體積生理鹽水灌胃,30 min后,酒精組及各藥物組予56°白酒(0.25 m L/20 g)灌胃,建立急性酒精性中毒模型。觀察各組小鼠的醉酒狀態(tài)及酒精耐受時(shí)間、宿醉時(shí)間。6小時(shí)后處死小鼠,比色法檢測外周血AST、ALT變化,ELISA法檢測肝組織中ADH、ALDH和腦組織中β-EP、LENK濃度。2.將SPF級(jí)C57BL/6J小鼠分為5組,分組情況同上,參照NIAAA模型(Gao-Binge模型),建立慢性酒精性肝病模型。各組均予對照飼料適應(yīng)飼養(yǎng)5天,接著酒精組與藥物組均更換為含5%酒精液體飼料,每日上午各藥物組予相應(yīng)劑量灌胃處理10天,次日清晨酒精組與DHM組及低、高TDHM組均予以31.5%乙醇灌胃,正�？瞻捉M予以45.0%麥芽糖糊精溶液灌胃,9小時(shí)后處死小鼠。每日觀察小鼠的精神狀態(tài)、體重變化等一般情況,HE、油紅O染色觀察各組小鼠肝臟組織病理學(xué)變化,比色法檢測肝組織AST、ALT活力,生化檢測TG、ADH、ALDH水平,ELISA檢測肝組織SOD、MDA濃度,Western-blot法測定CYP2E1的表達(dá)。結(jié)果1.二氫楊梅素銨鹽對急性酒精中毒小鼠解酒保肝作用結(jié)果:(1)行為學(xué)觀察:低TDHM組、高TDHM組與酒精組相比(41.40±21.03min,50.90±35.83min vs 11.30±8.16min)均可延長小鼠醉酒時(shí)間(p0.001,p0.01),且均較DHM組(41.40±21.03min,50.90±35.83min vs17.70±15.55min)顯著(p0.05)。高TDHM組小鼠醒酒時(shí)間最短(152.40±46.04 min vs 256.71±36.54min,p0.001),DHM組、低TDHM組也較酒精組小鼠醒酒時(shí)間(188.40±49.09min,172.40±45.66min vs 256.71±36.54min)縮短(p0.01),各TDHM組與DHM組之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)血清ALT、AST水平:DHM組,高TDHM組ALT活力較酒精組(10.70±3.08,8.58±4.83 vs 17.72±6.84)明顯下降(p0.05),各TDHM組與DHM組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。DHM組及低、高TDHM組AST活力較酒精組(45.35±10.17,33.02±2.68,32.21±8.11 vs 64.12±15.00)均明顯下降(p0.05,p0.001,p0.01),低、高TDHM藥物組均較DHM組作用效果顯著(p0.05)。(3)肝組織勻漿ADH、ALDH濃度:與酒精組相比DHM組及低、高TDHM組ADH濃度(0.38±0.02,0.51±0.13,0.49±0.06 vs 0.30±0.06)均可提高(p0.05,p0.01,p0.001),且低、高TDHM組較DHM組作用顯著(p0.01)。低、高TDHM組ALDH濃度較酒精組相比(13.38±3.85,15.99±5.91 vs 7.40±4.47)均明顯提高(p0.05),且低、高TDHM組較DHM組(13.38±3.85,15.99±5.91 vs 7.86±3.15)作用顯著(p0.05)。(4)腦組織勻漿β-EP、LENK濃度:與酒精組相比,DHM組及低、高TDHM組(324.82±25.54,309.83±32.55,283.89±38.42 vs 384.28±39.83)均可下調(diào)腦組織β-EP水平(p0.05,p0.01,p0.01),各TDHM組與DHM組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各組小鼠LENK濃度之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.二氫楊梅素銨鹽對慢性酒精性肝損傷小鼠的保肝作用結(jié)果:(1)HE染色及油紅O染色病理學(xué)改變:與對照組相比酒精組小鼠肝組織發(fā)生嚴(yán)重的脂肪變性,DHM組與低、高TDHM組脂肪變性輕于酒精組。(2)肝組織TG含量:與酒精組相比,DHM組、低TDHM組TG水平(0.08±0.007,0.08±0.004 vs 0.11±0.02)明顯降低(p0.05,p0.01),且低TDHM組較DHM組降低明顯(p0.05)。(3)肝組織中ALT、AST水平:酒精組小鼠肝組織ALT、AST水平明顯減低,DHM組與低TDHM組ALT水平較酒精組(2.14±0.52,2.12±0.56 vs 1.51±0.17)明顯升高(p0.05),各TDHM組與DHM組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與酒精組相比,DHM組及低、高TDHM組AST水平(5.00±0.42,5.53±0.38,5.57±0.82 vs 3.97±0.45)升高(p0.01,p0.001,p0.01),且低TDHM組較DHM組升高明顯(p0.05)。(4)肝組織ADH、ALDH活力:與酒精組相比低、高TDHM組ADH水平(25.02±12.13,23.16±13.33 vs 10.18±3.26)均可提高(p0.05)。與酒精組相比DHM組及高TDHM組ALDH水平(74.54±14.56,82.77±20.93 vs 56.02±14.17)均升高(p0.05),低DHM組升高顯著(105.18±25.45 vs 56.02±14.17,p0.01),且較DHM組作用明顯(p0.05)。(5)肝組織MDA、SOD濃度:與酒精組相比,DHM組及低、高TDHM組MDA(40.28±1.48,35.30±4.82,34.88±4.36 vs 47.29±4.35),明顯降低(p0.01,p0.01,p0.001),低、高TDHM組較DHM組降低明顯(p0.05)。與酒精組相比,低、高TDHM組(8.63±0.98,8.76±2.91 vs 5.55±1.10)可提高SOD水平(p0.001,p0.05),各TDHM組與DHM組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(6)肝組織CYP2E1水平:與酒精組相比DHM組及低、高TDHM組均可降低CYP2E1水平(p0.05,p0.01,p0.01),低、高TDHM組較DHM組作用明顯(p0.05,p0.01)。結(jié)論1.同DHM一樣,TDHM對急性酒精中毒小鼠有解酒、促醒作用,其作用機(jī)制可能與減少肝細(xì)胞損傷,提高代謝及降低腦組織β-EP有關(guān),并且解酒醒腦作用較DHM顯著。2.同DHM一樣,TDHM對慢性酒精性肝損傷有保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與減少肝細(xì)胞破壞,提高代謝,降低TG、MDA、CYP2E1水平,起到抗氧化、減少氧自由基有關(guān),并且保護(hù)作用優(yōu)于DHM。3.TDHM作為DHM的水溶性衍生物,可提高藥物生物利用度,有望成為ALD的新一代預(yù)防與治療藥物。
【圖文】：

它在臨床運(yùn)用的價(jià)值[9]。如若想使得 DHM 的是生物活性充分發(fā)揮，首要問題需改善提高它的水溶性，如果水溶性提高，那么會(huì)更加顯示出它的生物活性優(yōu)勢。很多學(xué)者為提高其水溶性，也相繼研制出 DHM 相關(guān)衍生物，本研究團(tuán)隊(duì)前期合成了一種 DHM 衍生物，二氫楊梅素銨鹽（ammonium dihydromyricetin，TDHM），化學(xué)分子式為：(2R,3R)-3,5,7-三羥基-2-(3,4,5-三羥基苯基)苯并二氫吡喃-4-酮，分子量為 421，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖 1-b，它的水溶解度達(dá) 6500mg/L，而 DHM 的水溶解度不超過 263.54mg/L，較 DHM 顯示出良好的溶解度，該藥物已獲得美國專利（專利號(hào)：US.9139551B2），但其是否能在保持 DHM 的解酒、保肝、抗氧化、抗纖維化作用的前提下，提高 DHM 生物利用度為酒精相關(guān)性疾病防治提供新的選項(xiàng)，是我們要探討的內(nèi)容。本研究采用具親酒性 C57BL / 6J 小鼠，，進(jìn)行酒精灌胃胃造模，相似于人類飲酒模式。通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，初步探討 TDHM 對酒精性肝損傷的解酒保肝作用及其機(jī)制。

圖 2 醉酒小鼠翻正反射消失 對急性酒精性中毒小鼠醉酒時(shí)間的影響精灌胃后，酒精組小鼠很快出現(xiàn)醉酒狀態(tài)，出現(xiàn)畫圈不穩(wěn)，呼吸、心率加快、翻正反射消失，二便失禁等為醉酒時(shí)間（min）,研究顯示各藥物組小鼠的醉酒狀HM 組、高 TDHM 組較酒精組（41.40±21.03min，5min）醉酒狀態(tài)明顯延遲（p＜0.001；p＜0.01），并且酒時(shí)間也晚于 DHM 組小鼠（41.40±21.03min vs170±35.83min vs17.70±15.55min，p＜0.05），如圖 3
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2642109