發(fā)布時(shí)間：2020-04-26 21:57

【摘要】：【目的】本研究以在乳腺癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用的CAF誘導(dǎo)EMT為切入點(diǎn),選擇乳腺癌肺轉(zhuǎn)移裸鼠模型為研究對(duì)象,在驗(yàn)證陽(yáng)和湯抗乳腺癌肺轉(zhuǎn)移效應(yīng)的基礎(chǔ)上,觀察其不同給藥劑量對(duì)CAF、TGF-?1、EMT等的關(guān)鍵標(biāo)志物的影響,從調(diào)控腫瘤微環(huán)境的角度深入探討陽(yáng)和湯干預(yù)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制�！痉椒ā�1.乳腺癌肺轉(zhuǎn)移裸鼠模型的建立:于裸鼠右側(cè)胸壁第二對(duì)乳腺脂肪墊接種0.2ml人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞懸液(濃度為5×10~7/ml)。觀察腫瘤細(xì)胞增殖情況,當(dāng)增殖為肉眼可見(jiàn)時(shí)即造模成功。通過(guò)病理切片觀察組織形態(tài)評(píng)價(jià)模型的有效性。2.陽(yáng)和湯干預(yù)裸鼠成瘤及肺轉(zhuǎn)移研究:將造模成功的30只裸鼠隨機(jī)分為5組,分別為模型組、陽(yáng)性組、陽(yáng)和湯高劑量組、陽(yáng)和湯中劑量組和陽(yáng)和湯低劑量組,每組6只,另選6只健康裸鼠作為空白組。連續(xù)給藥21天后取瘤、取肺。石蠟組織切片觀察裸鼠肺部轉(zhuǎn)移灶情況。繪制裸鼠體重變化曲線、原位瘤生長(zhǎng)曲線,計(jì)算原位瘤抑瘤率。3.陽(yáng)和湯干預(yù)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移與調(diào)節(jié)CAF、TGF-?1、EMT的關(guān)系:取裸鼠肺組織,制作石蠟切片,免疫組化法檢測(cè)肺組織中CAF標(biāo)志物?-SMA的表達(dá);Real-time PCR法檢測(cè)肺組織中TGF-?1基因的表達(dá);Western Blot法檢測(cè)肺組織中EMT標(biāo)志物E-cadherin、Vimentin的表達(dá)�！窘Y(jié)果】1.造模成功,成瘤率100%。乳腺癌原位瘤均位于裸鼠右側(cè)第二乳頭下方,邊界清楚,形狀規(guī)則,觸診活動(dòng)度尚可,包膜完整,部分出現(xiàn)粘連。取材時(shí)觀察到,原位瘤成魚(yú)肉色,質(zhì)韌,切開(kāi)后中心存在灰色壞死組織。原位瘤組織與肺組織HE染色均可查見(jiàn)腫瘤。2.乳腺癌原位瘤組織HE染色均可查見(jiàn)腫瘤;肺組織HE染色除空白組、陽(yáng)性組外,均可查見(jiàn)腫瘤。繪制原位瘤生長(zhǎng)曲線,各組原位瘤抑瘤率分別為陽(yáng)性組(51.44%)、陽(yáng)和湯高劑量組(18.16%)、陽(yáng)和湯中劑量組(26.37%)、陽(yáng)和湯低劑量組(9.22%)。3.藥物干預(yù)后,各組裸鼠肺組織中空白組?-SMA表達(dá)量均高于其余各組(P0.01);與模型組相比,陽(yáng)性組?-SMA明顯減少(P0.01),陽(yáng)和湯中劑量組?-SMA減少(P0.05)�？瞻捉MTGF-β1mRNA表達(dá)量均低于其余各組(P0.01);與模型組相比,陽(yáng)性組TGF-β1m RNA明顯減少(P0.01),陽(yáng)和湯中劑量組TGF-β1mRNA減少(P0.05)。表明陽(yáng)和湯可以降低裸鼠肺組織CAF、TGF-β1基因的表達(dá)�？瞻捉ME-cadherin的表達(dá)量均高于其余各組(P0.01);與模型組相比,陽(yáng)性組、陽(yáng)和湯中劑量組、陽(yáng)和湯低劑量組E-cadherin明顯減少(P0.01)�？瞻捉MVimentin表達(dá)量均低于其余各組(P0.01);與模型組相比,陽(yáng)性組Vimentin明顯減少(P0.01),陽(yáng)和湯中劑量組Vimentin減少(P0.05)。表明陽(yáng)和湯可以上調(diào)裸鼠肺組織E-cadherin的表達(dá),下調(diào)Vimentin的表達(dá),進(jìn)而抑制EMT過(guò)程�！窘Y(jié)論】陽(yáng)和湯抑制乳腺癌肺轉(zhuǎn)移瘤浸潤(rùn),是通過(guò)降低裸鼠肺組織TGF-β1m RNA、α-SMA(CAF)表達(dá),上調(diào)E-cadherin,下調(diào)Vimentin,進(jìn)而抑制EMT過(guò)程,抑制乳腺癌肺轉(zhuǎn)移。
【圖文】：

易激惹，常有打斗現(xiàn)象，乳頭較其他組隆起增大。瘤情況觀察鼠接種后第 7 天，造模成功，模型組原位瘤成瘤率 100%。原位瘤均位側(cè)第二乳頭下方，肉眼可見(jiàn)一小結(jié)節(jié)，質(zhì)硬，瘤體邊界清楚，形狀規(guī)則動(dòng)度較差，，包膜完整，部分出現(xiàn)粘連。取材時(shí)觀察到，原位瘤成魚(yú)肉色切開(kāi)后中心可存在灰色壞死組織�？棇W(xué)觀察原位瘤組織學(xué)觀察取的模型組原位瘤瘤體呈結(jié)節(jié)狀，類圓形或橢圓形，與周圍組織境界清，腫瘤質(zhì)地較軟，內(nèi)可見(jiàn)較大范圍灶性壞死、出血和實(shí)性結(jié)構(gòu)。鏡下觀腺導(dǎo)管結(jié)構(gòu)消失，癌細(xì)胞單個(gè)雜亂排列，細(xì)胞大小形態(tài)較一致，核大，型，胞漿豐富，細(xì)胞呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)。

圖 2 造模后 21 天裸鼠肺組織 HE 染色（×400） A 空白組：正常肺組織，僅伴少量充血；圖 B 模型組：肺組織可查見(jiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移灶血、壞死、含鐵血黃素沉著）小結(jié)成瘤情況觀察：造模成瘤率 100%。乳腺癌原位瘤均位于裸鼠右側(cè)第二，邊界清楚，形狀規(guī)則，觸診活動(dòng)度較差，包膜完整，部分出現(xiàn)粘連。察到，原位瘤成魚(yú)肉色，質(zhì)韌，切開(kāi)后中心可存在灰色壞死組織。原位HE 染色可見(jiàn)乳腺導(dǎo)管結(jié)構(gòu)消失，癌細(xì)胞單個(gè)雜亂排列，細(xì)胞大小形態(tài)較一，可見(jiàn)核異型，胞漿豐富，腫瘤中心缺血缺氧壞死。肺組織 HE 染色均瘤轉(zhuǎn)移灶，與空白組肺組織相比，轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞排列緊密、核大深染、核核仁明顯。模型組中 4 號(hào)裸鼠肉眼可見(jiàn)原位瘤，但 HE 染色顯示：乳腺導(dǎo)管結(jié)構(gòu)正
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 閆婉君;馬興聰;高曉燕;薛興歡;張淑群;;黃芩素抑制乳腺癌肺轉(zhuǎn)移作用機(jī)制的體內(nèi)研究[J];腫瘤預(yù)防與治療;2015年06期

2 呂曉皚;王蓓;楊瑞文;胡嬋娟;葉荊;;302名乳腺癌高風(fēng)險(xiǎn)人群中醫(yī)體質(zhì)研究[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2015年10期

3 李陽(yáng);黃立中;龔輝;肖玉潔;王云啟;梁慧;;加味陽(yáng)和湯治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的臨床觀察[J];中南藥學(xué);2015年10期

4 劉玲琳;徐海濱;胡祖健;何俊玲;蘇昆侖;楊歐歐;羅華;楊慧芬;劉勝;孫

本文編號(hào)：2641935