【摘要】：目的:1、探討大黃素對大鼠創(chuàng)傷性脊髓損傷后運動功能恢復(fù)的影響。2、探討大黃素對大鼠創(chuàng)傷性脊髓損傷后脊髓水腫的影響及其機制。3、探討大黃素對大鼠創(chuàng)傷性脊髓損傷后氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的影響。方法:345只SPF級健康Sprague-Dawley(SD)雌鼠被隨機分為假手術(shù)組(A組)、模型組(B組)、大黃素低劑量治療組(20mg·kg~(-1),C組)、大黃素中劑量治療組(40mg·kg~(-1),D組)和大黃素高劑量治療組(80mg·kg~(-1),E組),n=69。采用Allen’s打擊法制作大鼠創(chuàng)傷性脊髓損傷的模型。(1)術(shù)后3d、7d、14d及28d,采用BBB(Basso Beattie Bresnahan)評分及斜板實驗觀察大鼠的運動功能恢復(fù)情況。(2)術(shù)后3d,采用HE(Hematoxylin and Eosin)染色觀察大鼠脊髓組織的病理變化,干濕重法檢測脊髓組織含水量,伊文思藍染色法檢測血-脊髓屏障(Blood-spinal cord brier,BSCB)通透性,RT-PCR和Western Blot檢測水通道蛋白-4(Aquaporin-4,AQP-4)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)mRNA和蛋白表達。(3)術(shù)后7d,予以甲苯胺藍染色觀察神經(jīng)元內(nèi)尼氏小體情況;予以透射電鏡觀察脊髓神經(jīng)纖維的改變;Western Blot檢測核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、NAD(P)H醌氧化還原酶1(NAD(P)H:quinine oxidoreductase 1,NQO1)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)蛋白表達;ELISA檢測脊髓組織腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、白細胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白細胞介素6(interleukin-6,IL-6)的含量;免疫熒光觀察GFAP、神經(jīng)元膠原抗原2(neuronglialantigen-2,NG2)、巨噬/小膠質(zhì)細胞(Ectodermal Dysplasia-1,ED-1)的表達情況。結(jié)果:(1)BBB評分及斜板實驗檢測結(jié)果顯示,術(shù)后7d、14d、28d,C組、D組、E組均顯著高于B組(P0.05),且E組最佳(P0.05)。(2)術(shù)后3d,HE染色顯示,B組損傷節(jié)段內(nèi)出現(xiàn)大片出血灶,神經(jīng)細胞腫脹、破壞,大量炎性細胞浸潤,組織間隙增寬,水腫嚴重,C組、D組、E組上述病理改變較B組改善,其中E組改善最明顯;脊髓組織含水量B組與D組、E組間,以及C組、D組、E組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C組、D組、E組的脊髓伊文思藍含量較B組明顯降低(P0.05),AQP-4和MMP-2 mRNA的蛋白表達,C組、D組、E組與B組比較明顯降低(P0.05),但MMP-2 mRNA的表達,C組與D組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)術(shù)后7d,B組、C組尼氏小體開始融合,D組、E組較B組、C組融合明顯減輕;透射電鏡結(jié)果顯示,B組、C組脊髓神經(jīng)纖維出現(xiàn)明顯脫髓鞘改變,D組、E組髓鞘變性較B組、C組減輕;Western Blot檢測,Nrf2、HO-1、GFAP、NF-κB的蛋白表達,C組、D組、E組與B組之間比較,NQO1蛋白表達,D組、E組與B組之間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。ELISA檢測結(jié)果顯示,C組、D組、E組TNF-α、IL-6含量較B組,D組、E組IL-1β含量較B組均顯著降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫熒光顯示,C組、D組、E組GFAP、NG2的表達較B組增加,D組、E組更明顯;C組、D組、E組ED-1的表達較B組顯著降低。結(jié)論:1、大黃素能促進大鼠創(chuàng)傷性脊髓損傷后肢體功能的康復(fù)。2、大黃素能減輕大鼠創(chuàng)傷性脊髓損傷后的脊髓水腫,這可能與大黃素能下調(diào)脊髓損傷后脊髓組織AQP-4和MMP-2的表達,降低BSCB通透性有關(guān)。3、大黃素對大鼠創(chuàng)傷性脊髓損傷后的脊髓神經(jīng)細胞具有保護作用,其機制可能與激活Nrf2-ARE抗氧化應(yīng)激通路,降低NF-κB、ED-1、TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子的表達,促進GFAP、NG2表達有關(guān)。
【圖文】：

附圖 1 模型制備及損傷大鼠圖片F(xiàn)ig.1 Model preparation and the rat after SCI.3 714 280510152025②②②②②②②②②②②②②②②t / d①①①①②②BB評圖 2 創(chuàng)傷性脊髓損傷后不同時間段 BBB 評分（n=6，x ±s）①P＜0.05，與 A 組比較；

3 714 280204060CDEt / d②②②②②②②②②②②②①①①①②②斜斜斜（斜°）圖 3 創(chuàng)傷性脊髓損傷后不同時間段斜板實驗評分（n=6，x ±s）①P＜0.05，與 A 組比較；②P＜0.05，與 B 組比較；③P＜0.05，與 C 組比較；④P＜0.05, 與 D 組比較Fig.3 The slope measurements on the 3rd, 7th, 14th, and 28thday after traumatic spinal cordinjury (n=6，，x ±s).①P＜0.05, VS group A;②P＜0.05, VS group B;③P＜0.05, VS group C;④P＜0.05, VS group DA B C
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2641623