發(fā)布時間：2020-04-26 06:38

【摘要】：結(jié)核病是一種由結(jié)核分枝桿菌引起的高感染性和高致死性的傳染性疾病。近年來,耐藥結(jié)核病尤其是耐多藥結(jié)核病(MDR-TB)、廣泛耐藥結(jié)核病(XDR-TB)和艾滋病合并結(jié)核病(HIV-TB)的出現(xiàn),給全球結(jié)核病控制帶來了極大挑戰(zhàn)。大量研究認為結(jié)核分枝桿菌能夠以生物膜的形式存在,且生物膜(BF)的形成可能是引起結(jié)核分枝桿菌耐藥性增加的重要機制之一。生物膜(biofilm,BF)是細菌粘附于表面時,被自身所分泌的多糖基質(zhì)、纖維蛋白、脂質(zhì)蛋白等包繞其中而形成的含有大量細菌膜樣復(fù)合體。本實驗對12種無機鹽進行抗結(jié)核分枝桿菌活性與干預(yù)生物膜生長活性篩選試驗,發(fā)現(xiàn)亞硝酸鈉具有良好的抗結(jié)核分枝桿菌及抑制結(jié)核分枝桿菌生物膜生長活性,MIC值皆為4mmol/L,MBC值為8 mmol/L,且3mmol/L亞硝酸鈉與3.2μg/ml利福平聯(lián)合用藥時,具有很好的協(xié)同抑菌與抑制生物膜生長效果。亞硝酸鈉能夠干預(yù)結(jié)核分枝桿菌ATP的合成,導(dǎo)致ATP含量降低和較弱熒光顯色,這可能是其抑制結(jié)核桿菌生物膜的機制。中草藥是新藥發(fā)現(xiàn)的重要來源之一,我國中草藥資源非常豐富,本實驗利用貴州中草藥資源的多樣性,建立實驗中草藥樣本庫。先后對30種中草藥進行抗結(jié)核分枝桿菌活性與干預(yù)生物膜生長活性篩選試驗,發(fā)現(xiàn)苦參的甲醇提取物(0.4 mg/ml)能明顯抑制結(jié)核桿菌H37Rv生物膜的形成,濃度提高到0.8 mg/ml時,結(jié)核桿菌可被苦參殺死。山茱萸80%乙醇提取物在3.2mg/ml具有抗結(jié)核分枝桿菌活性,進一步結(jié)果表明,在改良羅氏培養(yǎng)基上,山茱萸乙醇提取物小極性部位為抗結(jié)核分枝桿菌有效活性部位,山茱萸大極性部位不能明顯促進結(jié)核分枝桿菌生長,但在7H9-ADC肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)上,能夠明顯促進結(jié)核分枝桿菌生物膜成膜,且呈量效關(guān)系。本實驗研究結(jié)果提示,不同中草藥對結(jié)核桿菌生物膜的形成存在不同的干預(yù)結(jié)果,進一步開展活性跟蹤研究,將為發(fā)現(xiàn)干預(yù)結(jié)核桿菌生物膜的分子骨架奠定基礎(chǔ)。本論文對結(jié)晶紫染色法評價結(jié)核分枝桿菌生物膜進行方法學(xué)優(yōu)化,結(jié)果顯示,在H37Rv菌懸液(10~8 CFU/ml)接種量為100μl、培養(yǎng)時間7天、1%結(jié)晶紫染色、染色時間15min的條件下,呈明顯量效關(guān)系。
【圖文】：

都能夠抑制結(jié)核分枝桿菌生物膜成膜（圖2.1），呈量效關(guān)系，其中，NaNO2的抑制效果最為明顯（表 2.5），其余樣本無明顯干預(yù)效果。表 2.5 12 種無機鹽對生物膜的干預(yù)試驗結(jié)果Table 2.5 The intervention results of 12 kinds of inorganic salts on Biofilm金屬離子化合物生物膜計分5μg/ml 10μg/ml 15μg/ml 20μg/ml 25μg/mlCuSO42.8 2.3 2.1 1.5 1.2AgNO32.7 2.0 1.6 1.4 1.3NaNO22.6 2.3 1.2 1.0 0.5CaCl22.7 2.7 2.8 3.2 3.0FeSO4 2.0 2.1 2.5 2.2 2.3NaCl 2.6 2.0 2.3 2.6 2.7MgSO43.0 2.2 2.0 2.8 1.8FeCl22.6 2.5 2.4 2.3 2.4KI 2.8 2.5 3.0 2.3 2.6（NH4）2SO42.2 2.4 2.0 2.6 1.9BaCl22.5 2.2 2.0 2.8 1.8FeCl32.6 2.6 2.7 2.6 2.7陰性對照 3.2注：1) 生物膜長滿液面，厚而致密，計 4 分；2) 生物膜長滿液面，薄而稀疏，計 3 分；3) 生物膜長至液面的一半，計 2 分；4) 生物膜長至液面的四分之一，計 1 分；5) 不長生物膜，計 0 分。（判斷標準下同）Note:1) Biofilm covered with liquid

貴州大學(xué)碩士畢業(yè)論文表 2.7 NaNO2抗結(jié)核分枝桿菌活性實驗結(jié)果Table 2.7 The tests results of NaNO2on Mycobacterium tuberculosis組別抑制結(jié)核桿菌活性1mmol/L 2mmol/L 4mmol/L 8mmol/L 16mmol/LNaNO2- - ++ +++ +++空白對照組 - - - - -注：每管菌落數(shù)低于 5 個（含 5 個）視為有效，其中菌落 0~1 個記“+++”，2~4 個記“++”，5 個記“+”，菌落數(shù)在 6 個以上視為無效，記“-”。（判斷標準下同）Note: the CFU≤5 is defined as effective, 0~1 marked “+++”, 2~4 marked “++”, 5 marked“+”, and the CFU＞6 is defined asnoneffective, marked “-”.
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2641210