發(fā)布時(shí)間：2020-04-25 08:56

【摘要】：背景:齊墩果酸(oleanolic acid,OA)是一種三萜類化合物,廣泛存在于山楂、烏梅、女貞子等一些傳統(tǒng)的中草藥中,具有保肝、抗腫瘤和心血管系統(tǒng)保護(hù)等多種生物活性。OA在保肝作用方面主要體現(xiàn)于對血清轉(zhuǎn)氨酶的降低,故臨床上用于肝炎的護(hù)肝治療~([1]),而對肝內(nèi)膽汁淤積癥的治療還尚未有研究報(bào)道。膽汁酸攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體(NTCP)、外排轉(zhuǎn)運(yùn)體(Bsep、Mrp2和Mrp3)、Ⅱ相代謝酶(UGT1A1、Sult2a1)以及核因子(FXR和Nrf2)參與了膽汁酸的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝,對緩解肝內(nèi)膽汁淤積癥具有重要意義。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?本文旨在探索OA對肝內(nèi)膽汁淤積癥的作用以及其作用機(jī)制,為OA在臨床上應(yīng)用于肝內(nèi)膽汁淤積癥提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法:1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組和處理:將35只SPF級雄性大鼠(體重在180-220g),用標(biāo)準(zhǔn)飼料和水進(jìn)行1周的喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)共有5組(n=7),具體如下所示:(1)正常組;(2)ANIT組(3)OA(50mg/kg)預(yù)干預(yù)組;(4)OA(100mg/kg)預(yù)干預(yù)組;(5)UDCA預(yù)干預(yù)組。本實(shí)驗(yàn)中將預(yù)先給大鼠給藥10天,在第10天對所有組別(除去空白組)的大鼠進(jìn)行灌胃ANIT,ANIT單次急性造模要求大鼠給藥前后都禁食12 h并在給藥后48h進(jìn)行取材。2、實(shí)驗(yàn)檢測項(xiàng)目:(1)利用各種生化檢測試劑盒對大鼠血清中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA的含量進(jìn)行檢測;利用肝臟組織HE染色的來觀察肝組織的形態(tài)和損傷程度。(2)采用Rt-qPCR技術(shù)檢測肝組織中鈉離子-�；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NTCP)、膽鹽輸出泵(Bsep)、多藥耐藥蛋白2(Mrp2)、多藥耐藥蛋白3(Mrp3)以及Ⅱ相代謝酶(UGT1A1、Sult2a1)的mRNA的表達(dá)水平。(3)采用Western-blot技術(shù)檢測肝臟鈉離子-�；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NTCP)、膽鹽輸出泵(Bsep)、多藥耐藥蛋白2(Mrp2)、多藥耐藥蛋白3(Mrp3)、Ⅱ相代謝酶(UGT1A1、Sult2a1)以及核因子(FXR、Nrf2)的蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1、ANIT可以顯著增加大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA的含量,增加大鼠肝組織壞死和炎癥反應(yīng);應(yīng)用OA和UDCA預(yù)處理均能降低肝內(nèi)膽汁淤積癥大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA的含量,恢復(fù)肝組織正常形態(tài)并減少炎癥反應(yīng),改善肝內(nèi)膽汁淤積。此外OA的效果呈現(xiàn)劑量相關(guān)。2、OA可解除ANIT對膽汁酸攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體(NTCP)、外排轉(zhuǎn)運(yùn)體(Bsep、Mrp2)和Ⅱ相代謝酶(UGT1A1、Sult2a1)的mRNA和蛋白的表達(dá)的抑制作用,促進(jìn)膽汁酸的外排和代謝解毒,改善肝內(nèi)膽汁淤積。此外,OA還可以上調(diào)Mrp3mRNA和蛋白來進(jìn)一步緩解肝損傷,彌補(bǔ)機(jī)體自發(fā)適應(yīng)性誘導(dǎo)的不足。3、OA可能通過激活FXR和Nrf2參與調(diào)控外排轉(zhuǎn)運(yùn)體(Bsep、Mrp2或Mrp3)的蛋白表達(dá)。結(jié)論:1、OA可以改善ANIT誘導(dǎo)的肝內(nèi)膽汁淤積。2、OA通過調(diào)控膽汁酸的轉(zhuǎn)運(yùn)體和代謝酶的mRNA和蛋白的表達(dá),增加膽汁酸的外排和代謝,改善ANIT誘導(dǎo)的肝內(nèi)膽汁淤積。3、OA可能通過Nrf2和FXR參與膽汁酸外排轉(zhuǎn)運(yùn)體(Bsep、Mrp2或Mrp3)的調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R-332;R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2640049