【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過對(duì)模型組大鼠尿液生成調(diào)節(jié)激素,鈉鉀泵活性,肝臟各類水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)、含量、mRNA的含量、磷酸化水平的系統(tǒng)研究探究濕阻中焦證對(duì)肝臟Na~+-K~+-ATP酶活性、尿液生成調(diào)節(jié)激素、水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的影響及平胃散干預(yù)關(guān)系,探討平胃散是否通過影響Na~+-K~+-ATP酶活性,調(diào)整尿液生成調(diào)節(jié)激素失衡狀態(tài),使肝臟水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白含量、表達(dá)、活性發(fā)生變化,維持水鹽平衡,揭示尿液調(diào)節(jié)激素與水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在濕困脾胃后的作用機(jī)制,及平胃散對(duì)肝細(xì)胞跨膜物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)功能的調(diào)控作機(jī)理。實(shí)驗(yàn)方法:濕阻中焦證造模后比色法測(cè)定肝臟鈉鉀泵活性,過氧化物酶法檢測(cè)肝臟中葡萄糖含量,HPLC檢測(cè)肝臟ATP含量,ELISA測(cè)定血清中各類激素和肝臟組織中SGLT1、GLUT2、NKCC1含量、PCR法測(cè)定肝臟組織SGLT1、GLUT2、NKCC1中mRNA的含量,WB法測(cè)定肝臟組織中SGLT1、GLUT2、NKCC1磷酸化水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1濕阻中焦證模型的評(píng)估:(1)對(duì)大鼠進(jìn)行一般情況觀察,濕困脾胃證大鼠形體消瘦,食欲較差,飲水明顯減少,嗜睡倦臥。(2)濕邪侵襲后大鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)和糖吸收異常,肝臟葡萄糖不能轉(zhuǎn)化利用,ATP生成減少,鈉鉀泵活力降低。(3)濕困脾胃后各類水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在肝組織免疫表達(dá)異常。(4)服藥治療后,模型組大鼠宏觀體征、客觀指標(biāo)、病理損傷、免疫功能、代謝能力都有所改善。2尿液生成激素的含量造模后,與空白組對(duì)照,濕困脾胃證大鼠腎素、血管升壓素、內(nèi)皮素、腎上腺素、血管緊張素Ⅱ的含量出現(xiàn)降低,醛固酮和利鉀尿肽的含量升高;與濕困脾胃證大鼠比較,機(jī)體進(jìn)行自我修復(fù)后或服用平胃散后腎素、血管緊張素Ⅱ、心房鈉尿肽的含量均高于濕困脾胃證大鼠,內(nèi)皮素、醛固酮、利鉀尿肽、抗利尿激素、腎上腺素的含量均低于模型組;與自然恢復(fù)組比較,給予不同劑量中藥治療組中腎素、血管緊張素Ⅱ、醛固酮、心房鈉尿肽的含量高于自然恢復(fù)組,給予不同劑量的中藥后,腎上腺素和血管升壓素的含量低于自然恢復(fù)組大鼠;服用高劑量和中劑量中藥組內(nèi)皮素的含量高于恢復(fù)組,服用中藥中劑量組利鉀尿肽的含量高于自然恢復(fù)組,服用中藥低劑量組內(nèi)皮素的含量低于自然恢復(fù)組,用平胃散高劑量,和低劑量灌胃后的大鼠利鉀尿肽的含量明顯比自然恢復(fù)組低。3肝臟水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)、含量、mRNA的含量、磷酸化活性。(1)水糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白免疫表達(dá)、含量、mRNA的含量、磷酸化活性變化濕困脾胃后,與正常組進(jìn)行對(duì)照,濕困脾胃證大鼠肝臟中SGLT1的蛋白免疫表達(dá)出現(xiàn)上調(diào),SGLT1的含量表現(xiàn)為降低,mRNA的含量降低,磷酸化活性降低;經(jīng)過恢復(fù)后,與濕困脾胃證大鼠進(jìn)行對(duì)照,恢復(fù)組肝臟中SGLT1的蛋白表達(dá)表現(xiàn)為上調(diào),SGLT1的含量會(huì)降低,mRNA的含量出現(xiàn)降低,磷酸化活性升高;與自然恢復(fù)組比較,給予不同劑量的中藥組肝臟中SGLT1的蛋白表達(dá)上調(diào),SGLT1的含量升高,mRNA的含量升高,SGLT1磷酸化活性降低。濕困脾胃后,與空白組進(jìn)行對(duì)照,濕困脾胃證大鼠肝臟中GLUT2的蛋白表達(dá)表現(xiàn)為下調(diào)趨勢(shì),GLUT2的含量出現(xiàn)降低,mRNA的含量降低,磷酸化活性降低;與濕困脾胃證大鼠進(jìn)行對(duì)照,自然恢復(fù)后肝臟中GLUT2的蛋白表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)GLUT2的含量升高,mRNA的含量升高,磷酸化活性升高;與恢復(fù)組比較,給予不同劑量的平胃散中藥后肝臟中GLUT2的蛋白表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)的趨勢(shì),GLUT2的含量高,mRNA的含量升高,平胃散低劑量組肝臟中GLUT2磷酸化活性升高,平胃散高、中劑量有降低趨勢(shì)。(2)水鹽協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白免疫表達(dá)含量、mRNA的含量、磷酸化活性變化造模后,與空白組進(jìn)行對(duì)照,濕困脾胃證大鼠肝臟中NKCC1的蛋白表達(dá)上調(diào),NKCC1的含量升高,mRNA的含量降低,NKCC1磷酸化活性降低。與濕困脾胃證大鼠比較,經(jīng)恢復(fù)后肝臟中NKCC1的蛋白表達(dá)出現(xiàn)下調(diào),NKCC1的含量會(huì)降低,mRNA的含量升高,NKCC1磷酸化活性升高,與自然恢復(fù)組比較,平胃散高劑量組肝臟中NKCC1的蛋白表達(dá)有上調(diào)趨勢(shì),平胃散中、低劑量組肝臟中NKCC1的蛋白表達(dá)有下調(diào)趨勢(shì),不同劑量中藥組NKCC1的含量升高,mRNA的含量升高,平胃散高、中、劑量組肝臟中NKCC1磷酸化活性有降低趨勢(shì),低劑量中藥組肝臟中NKCC1磷酸化活性有升高趨勢(shì)。(3)水通道蛋白免疫表達(dá)含量、mRNA的含量、磷酸化活性變化前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),濕阻中焦后,肝臟中水通道蛋白1和水通道蛋白4的免疫表達(dá)增強(qiáng),含量,mRNA的含量及磷酸化活性都降低,服用不同劑量的中藥平胃散后,水通道蛋白1和水通道蛋白4的免疫表達(dá)降低,含量,mRNA的含量及磷酸化活性都升高。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:濕阻中焦證不僅會(huì)影響大鼠腎素、血管緊張素、醛固酮、內(nèi)皮素、血管升壓素、心房鈉尿肽和利鉀尿肽等水液代謝激素;還會(huì)導(dǎo)致水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白肝臟表現(xiàn)異常,SGLT1、NKCC1、AQP1、AQP4免疫表達(dá)上調(diào),GLUT2免疫表達(dá)下調(diào);SGLT1、GLUT2、AQP1、AQP4含量會(huì)降低,NKCC1含量升高;肝臟SGLT1、GLUT2、NKCC1、AQP1、AQP4中mRNA的含量減少;SGLT1、GLUT2、NKCC1、AQP1、AQP4磷酸化水平降低;葡萄糖升高,ATP減少,鈉鉀泵的活力降低。這可能會(huì)是濕阻中焦發(fā)生的重要機(jī)制。平胃散能通過增強(qiáng)代謝率,進(jìn)而增強(qiáng)鈉鉀泵活力。通過調(diào)節(jié)血清中水液代謝調(diào)節(jié)激素的平衡,調(diào)節(jié)尿量使細(xì)胞內(nèi)外電解質(zhì)達(dá)到平衡。同時(shí)通過調(diào)節(jié)肝臟水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)、含量和磷酸化活性,平衡細(xì)胞內(nèi)外的離子,從而使人體的整個(gè)水液代謝趨于平衡。
【圖文】：

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2018 屆碩士學(xué)位論文65附件附錄 1：附圖1 濕阻中焦證模型大鼠圖 1 自制大鼠造模箱 圖 2 在造模箱內(nèi)造模的大鼠圖 3 在造模箱內(nèi)造模前的大鼠 圖 4 在造模箱內(nèi)造模后的大鼠2 免疫組化病理圖片2.1 SGLT1 在肝臟的分布

在造模箱內(nèi)造模的大鼠
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2638801