發(fā)布時(shí)間：2020-04-24 11:05

【摘要】：目的:在鏈脲佐菌素(streptozocin)誘導(dǎo)的大鼠糖尿病性神經(jīng)病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)模型上,觀察鉤吻素子(koumine,KM)抗糖尿病性神經(jīng)病理性疼痛作用及其特點(diǎn),為KM可能用于防治DNP提供實(shí)驗(yàn)依據(jù);進(jìn)而探討KM抗DNP作用與腦組織前額葉皮質(zhì)和杏仁核星形膠質(zhì)細(xì)胞活化程度、促炎細(xì)胞因子水平以及神經(jīng)甾體別孕烯醇酮水平的關(guān)系,初步分析KM抗DNP作用的腦內(nèi)可能機(jī)制,以期為KM防治DNP可能的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ),并有助于深化理解DNP發(fā)生的中樞機(jī)制。方法:⑴一次性腹腔注射鏈脲佐菌素70 mg/kg誘導(dǎo)DNP大鼠模型;實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組以及模型鼠KM處理組(KM-0.28mg/kg、KM-1.4mg/kg、KM-7.0mg/kg)和陽(yáng)性對(duì)照組(加巴噴丁組100 mg/kg);建模成功后第22天開(kāi)始灌胃給藥,1天1次,連續(xù)8天,以機(jī)械痛閾為指標(biāo),觀察KM對(duì)DNP大鼠的鎮(zhèn)痛作用及其特點(diǎn)。⑵行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,大鼠灌注固定,取腦,免疫組織化學(xué)法觀測(cè)大鼠前額葉皮質(zhì)和杏仁核星形膠質(zhì)細(xì)胞特征性標(biāo)記物(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫陽(yáng)性反應(yīng)情況;行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,大鼠取腦,分離出前額葉皮質(zhì)和杏仁核,蛋白質(zhì)分子印跡法測(cè)定GFAP的水平。⑶酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定大鼠前額葉皮質(zhì)和杏仁核促炎細(xì)胞因子TNF-a與IL-1β的水平;酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定大鼠前額葉皮質(zhì)和杏仁核神經(jīng)甾體別孕烯醇酮的水平。結(jié)果:⑴KM可顯著提高模型鼠機(jī)械痛閾,作用呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性,且停藥后,效應(yīng)仍可維持80 h以上,提示灌胃給予KM具有顯著抗DNP效應(yīng)。⑵熒光免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,模型組大鼠前額葉皮質(zhì)和杏仁核較對(duì)照組其GFAP熒光光密度增強(qiáng)、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增多、胞體較大,呈激活型;模型鼠經(jīng)KM處理后其前額葉皮質(zhì)和杏仁核GFAP熒光光密度減弱、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞形態(tài)趨向靜止型。蛋白分子印跡結(jié)果顯示,模型組大鼠較對(duì)照組其前額葉皮質(zhì)和杏仁核GFAP水平上升;KM可顯著對(duì)抗模型鼠前額葉皮質(zhì)和杏仁核GFAP水平上升。⑶酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組大鼠較對(duì)照組其前額葉皮質(zhì)和杏仁核TNF-a與IL-1β水平均升高;KM可顯著拮抗DNP樣大鼠前額葉皮質(zhì)和杏仁核TNF-a與IL-1β水平升高。⑷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組大鼠前額葉皮質(zhì)和杏仁核別孕烯醇酮水平較對(duì)照組未有顯著變化,而KM可顯著上調(diào)模型鼠前額葉皮質(zhì)和杏仁核的別孕烯醇酮水平。結(jié)論:1.灌胃給予鉤吻素子具有顯著的抗DNP作用。2.鉤吻素子抗DNP作用可能與其抑制模型鼠前額葉皮質(zhì)和杏仁核星形膠質(zhì)細(xì)胞活化、降低促炎細(xì)胞因子TNF-a和IL-1β水平、提高別孕烯醇酮水平有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 大鼠前額葉皮質(zhì)與杏仁核取材位置（冠狀切面）Brain sites from where the tissue samples were extractertex (A) and the amygdale tissue (B). The numbers refer base on Charles Watson and George Paxinos, 2007.�。好� 100 mg 組織加入含 PMSF 的 RIPA 裂解液 1 ml，，下 13000 rpm 離心 30 min，取上清液，-80 ℃保存待測(cè) 試劑盒和所需試劑及待測(cè)樣品需放室溫復(fù)溫后開(kāi)始測(cè)定液和洗滌緩沖液。 測(cè)定前額葉皮質(zhì)、杏仁核 TNF-α水平準(zhǔn)溶液：取400 μl樣品稀釋液加入標(biāo)準(zhǔn)品粉末中配成100。取100 μl標(biāo)準(zhǔn)品母液，加400 μl樣品稀釋液配成溶度為μl 加 400 μl 樣品稀釋液逐個(gè)倍比稀釋，獲得系列標(biāo)準(zhǔn)溶

KM對(duì)鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的DNP大鼠機(jī)械痛敏的影響
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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