【摘要】：連翹為木犀科植物連翹Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實,是一種傳統(tǒng)中藥。秋季果實初熟尚帶綠色時采收,除去雜質,蒸熟,曬干,習稱“青翹”;果實熟透時采收,曬干,除去雜質,習稱“老翹”。連翹主要活性成分是連翹酯苷A和連翹苷且連翹酯苷A在連翹中含量很高,為了使薄層鑒別更加準確,在2015版《中國藥典》連翹薄層鑒別項下增加連翹酯苷A作為標準對照品。由于連翹的偽品和類同品較多,只依靠薄層鑒別有時無法保證連翹正品,采用中藥指紋圖譜時會出現不同產地、不同采集時間和不同制藥企業(yè)在同一個“指紋圖譜”下控制難度大,因此為了更好的控制連翹藥材品質,本文通過建立青翹和老翹HPLC特征圖譜方法指認青翹和老翹的幾個專屬性化學成分。為了優(yōu)化連翹含量測定方法,本文通過《中國藥典》含量測定方法對各種連翹供試品的制備方法進行了評價,優(yōu)選出了供試品的制備方法,該方法可滿足同時提取連翹酯苷A和連翹苷的要求,并能達到最佳效果。同時發(fā)現連翹酯苷A和連翹苷的含量在青翹和老翹中具有顯著性差異,因此,建議兩者指標成分的限量值應分別制訂。連翹作為一種市售商品,其品質的優(yōu)劣對中成藥及臨床上都具有很大影響,為了進一步對連翹質量進行控制,本文將結合HPLC特征圖譜、含量測定對連翹進行分級標準研究即分為青翹統(tǒng)貨、青翹選貨和老翹統(tǒng)貨。本文研究內容如下:1.連翹薄層鑒別研究在2015版《中國藥典》連翹鑒別項下增加連翹酯苷A作為標準對照品,對一系列不同展開劑進行篩選,最后采用氯仿-甲醇(8:2)、乙酸乙酯-甲酸-水(9:1.5:0.5)為二次展開條件,10%硫酸乙醇溶液為顯色劑對3批青翹和2批老翹中連翹酯苷A和連翹苷進行同時鑒定。完成對該方法的重現性和耐用性研究。2.連翹HPLC特征圖譜研究從制備方法簡便、快速、分離度的角度對7種供試品制備方法進行篩選,優(yōu)選出70%甲醇超聲30min為青翹、老翹的供試品制備方法。由于青翹、老翹化學成分的差異性,對不同色譜條件進行考察后發(fā)現,共用一個色譜條件無法準確進行兩者特征圖譜研究,因此采用甲醇-0.3%冰乙酸水溶液梯度洗脫程序作為青翹色譜條件,乙腈-0.4%冰乙酸溶液梯度洗脫程序作為老翹色譜條件。根據特征圖譜指導原則即特征成分專屬性和有效成分選擇了連翹酯苷I、連翹酯苷A、(+)-松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷、蘆丁、連翹苷、連翹酯素作為青翹的特征峰;RS-連翹h灸拒占諄選⒙�、连菞lボ誂、連翹苷和連翹酯素作為老翹的特征峰。通過對17批青翹統(tǒng)貨、15批青翹選貨和15批老翹的HPLC特征圖譜研究發(fā)現各特征峰的相對保留時間在5%以內,均符合要求。青翹統(tǒng)貨和選貨在化學成分上無明顯差異但各特征峰的峰面積存在較大差異,青翹和老翹在化學成分及峰面積均存在明顯差異。該研究為連翹商品規(guī)格等級標準提供較好的科學依據。3.連翹有效成分含量測定研究3.1供試品制備方法改進為了快速、簡便、高效的測定連翹中連翹酯苷A和連翹苷的含量,對藥典分開制備連翹酯苷A和連翹苷供試品溶液方法提出改進,即同時制備連翹酯苷A和連翹苷供試品溶液,連翹苷供試品溶液無前處理。通過對8種包括藥典供試品提取方法的比較,優(yōu)選出70%甲醇超聲處理30min的提取方法較好。對連翹苷提取液是否經中性氧化鋁柱處理也做了進一步研究,比較青翹和老翹以及經不同廠家中性氧化鋁柱處理后的結果表明經中性氧化鋁處理前后青翹和老翹中的連翹苷峰面積差異較小,且不經中性氧化鋁柱處理的峰純度及分離度都達到藥典規(guī)定值。因此對藥典供試品制備方法的改進是可行的。3.2含量測定方法考察在藥典含量分開測定的情況下,為了快速進行測定,本文嘗試各種簡便的測定方法后將采用兩種測定方法對青翹、老翹含量進行研究。我們將采用HPLC同時測定青翹中連翹酯苷A和連翹苷的方法。在許佳等人對不同色譜條件考察的基礎上進一步驗證及篩選,建立了以下方法:乙腈(A)-0.4%冰醋酸溶液(B)梯度洗脫,0~33 min,A-B(15:85),33~43 min,A-B(15:85)→A-B(25:75),43~60 min,A-B(25:75);檢測波長為277和330 nm。該方法在測定青翹(統(tǒng)貨、選貨)中連翹酯苷A和連翹苷含量時紫外吸收強度高,分離度及純度較好,因此該方法用于青翹(統(tǒng)貨、選貨)測定是可行的。老翹依舊采用藥典方法進行測定。利用本文方法和藥典方法對40批青翹統(tǒng)貨、30批青翹選貨和30批老翹統(tǒng)貨中連翹酯苷A和連翹苷含量進行測定,研究發(fā)現兩個指標性成分在青翹統(tǒng)貨、青翹選貨和老翹統(tǒng)貨中存在差異,尤其是青翹與老翹存在顯著性差異,應分別規(guī)定含量限定值,暫定青翹統(tǒng)貨中連翹酯苷A的含量不得少于4.50%,連翹苷含量不得少于0.50%;暫定青翹選貨中連翹酯苷A的含量不得少于6.00%,連翹苷的含量不得少于0.60%;暫定老翹中連翹酯苷A的含量不得少于0.35%,連翹苷的含量不得少于0.15%。這為建立連翹商品規(guī)格等級標準進一步提供科學依據。4.老翹采收期的初步研究目前大部分老翹中連翹酯苷A含量較低,連翹苷含量不達標。老翹不合格的原因可能受采收期的影響。本文按藥典測定方法對平順不同采收期的老翹凈殼共5批進行含量測定研究。結果發(fā)現在2017年10月中旬至11月份老翹中兩個指標性成分含量較高,隨著時間的推移老翹各化學成分含量逐漸降低,我們將初步確定老翹采收期為10月中旬至11月份。
【圖文】：

圖 2.1 不同展開劑薄層色譜圖Fig2.1 Thin layer chromatograms of different developing agents 氯仿-甲醇（7：2）B 乙酸乙酯-甲酸-水（9：2：1）C 乙酸乙酯-甲酸-水（9：1.5：0.5） 氯仿-甲醇（8：2）和乙酸乙酯-甲酸-水（9：1.5：0.5）E 氯仿-甲醇-甲酸（7：2：1） 氯仿-甲醇（8：2）.2.2.3 顯色劑篩選

圖 2.2 不同廠家薄層色譜圖Fig2.2 Thin layer chromatagrams from different manufacturers注：A. Mark 公司 B. 海洋化工（青島）結果顯示：不同廠家的薄層板及不同溫度進行薄層鑒別后斑點位置及異，因此耐用性較好。
【學位授予單位】：山西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1

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本文編號：2638313