發(fā)布時(shí)間：2020-04-23 20:31

【摘要】：雷公藤(Tripterygium wilforiiHook.f.,TWHF)為衛(wèi)矛科植物,其根、葉、花、芽及果均有毒性。體內(nèi)外試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)均已發(fā)現(xiàn),雷公藤提取物具有明顯的抗炎抗感染、免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)以及抗腫瘤等功效,被廣泛應(yīng)用于治療炎癥性疾病、免疫系統(tǒng)性疾病以及腫瘤等。由于造成雷公藤毒副作用的主要化學(xué)成分往往也是造成其生物活性的主要成分,且該藥材的毒性與活性均與其所含主要化學(xué)成分含量具有密切關(guān)聯(lián)性;同時(shí),市售雷公藤制劑由于生產(chǎn)廠家、制劑配方和生產(chǎn)工藝不同,造成各制劑所含活性成分含量、活性以及毒性均存在較大差異,因此局限了雷公藤的臨床應(yīng)用。為了優(yōu)化雷公藤藥材的入藥部位和生長(zhǎng)年限,達(dá)到減毒增效的目的,本文構(gòu)建針對(duì)慢性腎炎的體外細(xì)胞模型并采納中藥材有效部位概念,綜合提取工藝和所含代表性化合物的含量檢測(cè)分析,篩選泰寧地區(qū)雷公藤藥材,獲得更為合理和經(jīng)濟(jì)的藥材提取物和有效部位提取物;研究雷公藤甲素和所選雷公藤有效部位對(duì)LPS刺激后的小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7的抗炎作用及其可能涉及的作用機(jī)理、對(duì)小鼠的急性毒性以及對(duì)C-BSA腎炎小鼠的藥效,初步分析所選雷公藤有效部位提取物所含代表性活性成分之間是否存在藥物相互作用。主要研究工作如下:(1)為了優(yōu)化雷公藤藥材的入藥部位和生長(zhǎng)年限,以人正常肝細(xì)胞HL-7702、小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7以及大鼠腎小球系膜細(xì)胞HBZY-1為研究對(duì)象,對(duì)2-7年限的雷公藤含皮根莖以及去皮根莖乙醇提取物的生物活性進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),通過(guò)比較IC50/EC50比值,建議雷公藤入藥不一定選擇生長(zhǎng)年限更長(zhǎng)的藥材,且選擇含皮根莖可能更加合理和經(jīng)濟(jì)。同時(shí),采納中藥材有效部位概念,綜合提取工藝和所含代表性活性化合物含量檢測(cè)分析,通過(guò)比較IC50/EC50比值,初步篩選出雷公藤二萜+生物堿部位(簡(jiǎn)稱為二加生有效部位,下同)作為雷公藤治療腎炎有效部位提取物。(2)研究了雷公藤甲素對(duì)LPS刺激的RAW 264.7的抗炎效應(yīng)及其作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),雷公藤甲素可以時(shí)間和濃度依賴性的抑制RAW 264.7的細(xì)胞活力;下調(diào)NO和TNF-αα的生成水平,降低iNOS、COX-2、TLR4、p-ERK和p-p38的蛋白表達(dá)水平,下調(diào)NF-κBp65和IκB-α的活性,且具有濃度依賴性。這說(shuō)明,雷公藤甲素通過(guò)參與調(diào)控MAPK信號(hào)通路以及NF-κB信號(hào)通路,從而可以濃度依賴性的抑制TLR4蛋白水平以及降低促炎因子的表達(dá)水平,進(jìn)而發(fā)揮其抗炎作用。(3)研究了雷公藤二加生有效部位提取物對(duì)LPS刺激的RAW 264.7的抗炎效應(yīng)及其作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與雷公藤甲素的抗炎作用機(jī)理略有不同,雷公藤二加生有效部位提取物可以濃度依賴性的抑制LPS誘導(dǎo)的TAK1和TLR4的蛋白高表達(dá)水平,干擾MAPK信號(hào)通路和NF-kB信號(hào)通路,進(jìn)而抑制LPS誘導(dǎo)的促炎因子高表達(dá)水平,發(fā)揮其抗炎作用。另外,含有相同質(zhì)量雷公藤甲素的雷公藤二加生有效部位對(duì)RAW 264.7的生物活性和用藥安全性方面要優(yōu)于雷公藤甲素單獨(dú)用藥,這表明雷公藤二加生有效部位中含有的三種活性成分(雷公藤甲素、雷公藤紅素和雷公藤次堿)和其他化學(xué)成分之間存在藥物相互作用,從而提高其抗炎作用。(4)研究了雷公藤甲素和雷公藤二加生有效部位對(duì)小鼠的口服給藥急性毒性以及分別灌胃給藥4周對(duì)C-BSA腎炎小鼠的藥效。結(jié)果發(fā)現(xiàn),雷公藤甲素的LD50為1.077mg/kg(95%置信限為0.886-1.297mg/kg),雷公藤二加生有效部位的LD50為1.211 mg/kg(95%置信限為1.099-1.323 mg/kg),雷公藤二加生有效部位的LD50高于雷公藤甲素,表明其對(duì)小鼠的急性毒性要弱于雷公藤甲素。雷公藤甲素(200 μg/kg)和雷公藤二加生有效部位(500 μg/kg)分別給藥4周都可以明顯改善C-BSA腎炎小鼠的病理變化,降低其24小時(shí)尿蛋白含量、血清BUN和Cr水平但對(duì)ALT和AST的活性水平?jīng)]有明顯影響。表明雷公藤甲素(200 μg/kg)和雷公藤二加生有效部位(500μg/kg)均可以對(duì)C-BSA腎炎小鼠發(fā)揮其抗炎作用且不會(huì)造成明顯肝毒性。綜上所述,采納中藥材有效部位概念,綜合提取工藝和所含代表性活性化合物含量檢測(cè)分析,通過(guò)比較ICso/ECso比值,初步篩選出雷公藤二加生有效部位作為雷公藤治療腎炎的有效部位提取物。含有相同質(zhì)量雷公藤甲素的雷公藤二加生有效部位提取物對(duì)RAW 264.7的生物活性及其作用機(jī)制的體外研究結(jié)果、小鼠急性毒性研究結(jié)果和對(duì)C-BSA腎炎小鼠的體內(nèi)藥效研究結(jié)果均表明其抗炎效應(yīng)強(qiáng)于雷公藤甲素單獨(dú)用藥,并對(duì)該藥材的減毒增效提供新思路。
【圖文】：

Ｋｕｐｃｈａｎ等人于１９７２年首次從雷公藤屬植物的根部中分離、純化并鑒定為雷公逡逑藤甲素［Ｗ。雷公藤甲素（Ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ，ＴＰ）又稱為雷公藤內(nèi)醋醇，屬于二萌類化合物，逡逑是雷公藤含有的一個(gè)重要代表性活性化合物。其化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖１．１所示，分子式為逡逑Ｃ２０比４0６，分子量為３６０．４，，其最大吸收波長(zhǎng)為２１８ｎｍ。逡逑如、、但邐／＂逡逑＇一邐１０邐Ｓ、逡逑Ａ邋Ｂ邋Ｔｏ逡逑圖１．１雷公藤甲素化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖ＩＩＤ］逡逑Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｃｈｅｍｉｃａｌ邋Ｓ化ｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｔｒｉｐＵ）ｌｉｄｅ逡逑Ｚｈｏｕ等人對(duì)雷公藤甲素的化學(xué)結(jié)構(gòu)、生物活性及其臨床應(yīng)用進(jìn)行總結(jié)后發(fā)現(xiàn)，逡逑雷公藤甲素在１９７８年最初被用于臨床治療白血病，后相繼用于與免疫系締有關(guān)的多逡逑種疾病的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)中。雷公藤甲素具有多種生物活性ＵＵ。如圖１．２所示，逡逑諸如抗炎抗感染、免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)、抗生育和抗腫瘤等。迄今為止，雷公藤甲逡逑素己被廣泛用于治療各種丯臟疾病，具有較好的療效。但由于雷公藤甲素的毒副作逡逑２逡逑

Ｆｉｇ．１．３邋Ｐｒｏｐｏｓｅｄ邋ｍｏｄｅｌ邋ｏｆＴｈｌ？邋ｃｅｌｌｓ邋ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ逡逑輔助性Ｔ細(xì)胞１７邋（Ｔ邋ｈｅｌｐｅｒ邋１７，邋Ｔｈｌ７）是ＣＤ４叮淋巴細(xì)胞的一個(gè)獨(dú)有亞群【４８＾。逡逑如圖１．３所示，Ｔｈｌ７細(xì)胞可特征性分泌促炎因子忙－１７邋（主要是ｍ－１７Ａ和比－１７Ｆ），逡逑其分化成熟需要轉(zhuǎn)錄因子視黃酸相關(guān)孤兒受體伸Ｒｅｔｉｎｏｉｃ邋ａｃｉｄ－ｒｅｌａｔｅｄ邋ｏｒｐｈａｎ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ逡逑１４逡逑
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2638115