【摘要】：研究目的:探討疏肝健脾法治療肝郁脾虛型慢性乙型肝炎的優(yōu)越性,并通過蛋白酪氨酸激酶(Janus Kinase,JAK)-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,進(jìn)一步闡明其可能作用機(jī)制,為推廣臨床應(yīng)用疏肝健脾法治療慢性乙型肝炎提供理論依據(jù)與數(shù)據(jù)支持。研究方法:1、制備人體血清:選取40名健康志愿者以及80名符合納入標(biāo)準(zhǔn)的肝郁脾虛型慢性乙型肝炎患者。將患者隨機(jī)分成中藥組和西藥組,每組各40名,分別給予疏肝健脾法中藥復(fù)方和恩替卡韋治療,連續(xù)用藥14天。靜脈采血10ml,低溫高速離心10min,制成人體含藥血清及正常血清,-20℃凍存待用。2、細(xì)胞體外培養(yǎng):HepG2.2.15細(xì)胞株用完全培養(yǎng)基,置于37℃,5%CO2細(xì)胞孵育箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)。分組后給予相應(yīng)實(shí)驗(yàn)血清培養(yǎng)。3、采用噻唑藍(lán)(methyl thiazolylium,MTT)比色法檢測(cè)各組血清干預(yù)HepG2.2.15細(xì)胞48h、96h、144h后的生長(zhǎng)情況。4、采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)各組血清干預(yù)HepG2.2.15細(xì)胞48h、96h、144h后HBsAg分泌情況。5、采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)檢測(cè)各組血清干預(yù) HepG2.2.15 細(xì)胞 48h、96h、144h 后 JAK2 mRNA、STAT3 mRNA 的相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果:1、用MTT法檢測(cè)各組血清干預(yù)HepG2.2.15細(xì)胞不同時(shí)間后細(xì)胞生長(zhǎng)情況,結(jié)果顯示:與細(xì)胞對(duì)照組相比,各實(shí)驗(yàn)血清組均能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖(P0.01),西藥血清組與10%、20%中藥血清組兩兩相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、用ELISA法檢測(cè)各組血清干預(yù)HepG2.2.15細(xì)胞不同時(shí)間后細(xì)胞分泌HBsAg情況,結(jié)果顯示:在48h、96h、144h時(shí),西藥血清組與中藥血清組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);但144h時(shí),10%中藥血清組與20%中藥血清組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、用qPCR法檢測(cè)各組血清干預(yù)HepG2.2.15細(xì)胞不同時(shí)間后JAK2mRNA的相對(duì)表達(dá)水平,結(jié)果顯示:與細(xì)胞對(duì)照組相比,健康血清組上調(diào)JAK2mRNA表達(dá)水平(P0.05),其余各組含藥血清隨著干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng),均抑制JAK2mRNA相對(duì)表達(dá),20%中藥血清組更能明顯下調(diào)JAK2mRNA表達(dá)水平(P0.01)。4、用qPCR法檢測(cè)各組血清干預(yù)HepG2.2.15細(xì)胞不同時(shí)間后STAT3 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平,結(jié)果顯示:與細(xì)胞對(duì)照組相比較,健康血清組調(diào)控STAT3 mRNA表達(dá)作用無明顯差異(P0.05),而西藥血清組、10%中藥血清及20%中藥血清組均不同程度下調(diào)STAT3mRNA表達(dá)(P0.05),尤其20%中藥血清組下調(diào)STAT3mRNA作用最明顯(P0.01)。結(jié)論:1、疏肝健脾法含藥血清能夠相對(duì)抑制HepG2.2.15細(xì)胞增殖,并與時(shí)間正相關(guān)。2、疏肝健脾法含藥血清能持續(xù)、穩(wěn)定抑制HepG2.2.15細(xì)胞分泌HBsAg,具有一定抗HBV作用,其效果較西藥恩替卡韋明顯。3、疏肝健脾法含藥血清明顯降低HepG2.2.15細(xì)胞內(nèi)JAK2,STAT3mRNA相對(duì)表達(dá)水平。4、疏肝健脾法含藥血清抗HBV作用機(jī)制可能與下調(diào)細(xì)胞內(nèi)JAK2,STAT3mRNA的表達(dá),阻斷JAK2-STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。
【圖文】：

圖２－１邋ＨｅｐＧ２．２．１５細(xì)胞生長(zhǎng)曲線逡逑４．２邋ＥＬＩＳＡ法檢測(cè)ＨｅｐＧ２．２．１５細(xì)胞分化ＨＢｓＡｇ的情況逡逑結(jié)果顯示（見表２－３、圖２－２）：在４}、９化時(shí)，四組人體化清分別與細(xì)胞對(duì)照組兩逡逑兩分析對(duì)比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（尸＜０．０５）；西藥血清組與１０％、２０％中藥血清組相比有逡逑顯著差異（尸＜０．０１），同時(shí)，西藥血清組抑制率明顯高于健康血清組（尸＜０．０５）邋；邋２０％逡逑中藥血清組對(duì)ＨＢｓＡｇ的抑制率高于１０％中藥血清組，二者對(duì)比具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（尸逡逑＜０．０１）。１４他時(shí)，西藥血清組分別與其他血清組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（；＾＜０．０５）；逡逑但１０％中藥血清組與２０％中藥血清組相比，，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）。在不同時(shí)逡逑間節(jié)點(diǎn)，各組實(shí)驗(yàn)血清均能抑制ＨｅｐＧ２．２．１５細(xì)胞分泌ＨＢｓＡｇ，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（尸逡逑＜０．０５）。由此表明，疏肝健脾法含藥血清與恩替卡韋均能抑制ＨｅｐＧ２．２．１５細(xì)胞表達(dá)逡逑ＨＢｓＡｇ

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本文編號(hào)：2638017