【摘要】：前期臨床研究表明,開(kāi)心解郁方能有效改善血管性抑郁癥患者情緒低落、興趣減退的癥狀,對(duì)胸悶、善太息、乏力、失眠、不思飲食等軀體癥狀的療效優(yōu)于氫溴酸西酞普蘭、鹽酸氟西汀,體現(xiàn)了開(kāi)心解郁方治療血管性抑郁癥的優(yōu)勢(shì)。在應(yīng)用中發(fā)現(xiàn),開(kāi)心解郁方不只對(duì)老年血管性抑郁患者有效,對(duì)青中年的抑郁狀態(tài)、抑郁癥、焦慮癥、慢性疲勞綜合征等均有良好的作用,這些心身疾病的主訴癥狀往往恰是開(kāi)心解郁方在血管性抑郁癥中的優(yōu)勢(shì)治療作用。為了充分發(fā)揮中醫(yī)藥改善抑郁癥狀副作用小、易于患者接受的優(yōu)勢(shì),發(fā)揮有效方劑的應(yīng)用價(jià)值,多方面滿足抑郁癥患者的臨床需求,基于前期血管性抑郁癥的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),進(jìn)一步研究開(kāi)心解郁方對(duì)抑郁癥模型動(dòng)物的抗抑郁效應(yīng)與抗抑郁作用機(jī)理。研究目的通過(guò)對(duì)抑郁癥模型大鼠給藥后的行為學(xué)評(píng)價(jià),評(píng)估開(kāi)心解郁方抗抑郁的直接療效;通過(guò)觀察腦組織超微結(jié)構(gòu)、病理形態(tài)和檢測(cè)神經(jīng)再生標(biāo)志蛋白,探討開(kāi)心解郁方對(duì)抑郁癥關(guān)鍵腦區(qū)海馬的神經(jīng)元保護(hù)作用和對(duì)成年神經(jīng)再生的作用,初步探討其對(duì)大腦結(jié)構(gòu)和功能可塑性的影響。為擴(kuò)大開(kāi)心解郁方的適應(yīng)癥,促進(jìn)該方的二次開(kāi)發(fā),更高效應(yīng)用以滿足抑郁癥患者的用藥需求,進(jìn)一步提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)支持。研究方法1采用清潔級(jí)、SD、雄性大鼠,根據(jù)基礎(chǔ)糖水偏好水平將大鼠分為正常組、模型組,模型組通過(guò)慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激方式造模4周,以模擬抑郁癥患者的快感缺失狀態(tài),根據(jù)糖水偏好水平,將模型組進(jìn)一步分層隨機(jī)分為模型組、氟西汀組、開(kāi)心解郁方組,各給藥組連續(xù)給藥4周,正常組、模型組給與等體積的純凈水。每周進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn),記錄體重變化,給藥2周與4周后分別測(cè)試強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間。2給藥4周后,各組取海馬齒狀回(dentategyrus,DG)區(qū)域放入戊二醛固定,應(yīng)用透射電子顯微鏡,觀察DG區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)改變;各組取整個(gè)腦組織,進(jìn)行固定、包埋,切取腦片進(jìn)行蘇木精-伊紅染色,顯微鏡下觀察海馬安蒙角(Cornu ammonis,CA)1、CA2、CA3、CA4、DG 區(qū)細(xì)胞層次、細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞排列分布、細(xì)胞形態(tài),分別拍照做描述分析。3給藥4周后,大鼠心臟灌流取腦,取包含海馬組織的冠狀位冰凍切片,進(jìn)行海馬齒狀回未成熟神經(jīng)元標(biāo)志物微管相關(guān)蛋白Doublecortin(microtubule-associated protein Doublecortin,DCX)的免疫熒光染色,熒光顯微鏡拍照,計(jì)數(shù)海馬齒狀回顆粒下區(qū)(subgranularzone,SGZ)DCX+細(xì)胞數(shù)目。研究結(jié)果1糖水偏好實(shí)驗(yàn)結(jié)果:造模過(guò)程中,模型組較正常組比較,糖水偏好水平下降明顯,模型組糖水偏好在造模5周達(dá)到最低水平。與模型組相比,開(kāi)心解郁方組給藥一周后糖水偏好水平回升,至給藥3周持續(xù)升高。與模型組比,氟西汀組給藥兩周后糖水偏好水平開(kāi)始升高,至給藥4周持續(xù)升高。給藥四周后,各組糖水偏好水平無(wú)差異(P0.05)。強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間結(jié)果:給藥2周、4周后,與正常組比較,模型組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間增加;與模型組比較,開(kāi)心解郁方組、氟西汀組不動(dòng)時(shí)間均降低,開(kāi)心解郁方組給藥2周、4周不動(dòng)時(shí)間與模型組有顯著差異(P0.01),氟西汀組給藥4周與模型組有顯著差異(P0.01)。2光鏡下分析海馬各區(qū)神經(jīng)元形態(tài)變化:CA2、CA3、DG區(qū)細(xì)胞存在較明顯異常,CA1和CA4區(qū)未見(jiàn)明顯異常。正常組CA2、CA3區(qū)細(xì)胞層次清晰,排列較為緊密整齊,細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰。在CA2區(qū),模型組細(xì)胞層次變少,細(xì)胞數(shù)目明顯減少,細(xì)胞間隙變大,排列混亂、疏松,細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊,氟西汀組、開(kāi)心解郁方組與正常組接近。在CA3區(qū),與正常組比較,模型組細(xì)胞數(shù)目減少,細(xì)胞間隙變大,排列較疏松,氟西汀組、開(kāi)心解郁方組與正常組接近,開(kāi)心解郁方組細(xì)胞有所缺失。在DG區(qū),從細(xì)胞層次、數(shù)目上看,正常組DG區(qū)細(xì)胞層厚,排列緊密整齊,模型組細(xì)胞層變薄,細(xì)胞數(shù)目明顯減少,細(xì)胞間隙變大,氟西汀組與正常組接近,開(kāi)心解郁方組較正常組細(xì)胞排列稍有疏松;從細(xì)胞形態(tài)上看,各組細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰,但各給藥組與正常組比較均存在不同程度的神經(jīng)元細(xì)胞水腫,氟西汀組水腫細(xì)胞最多。電子顯微鏡下,給藥4周后,正常組,細(xì)胞輪廓清晰,細(xì)胞結(jié)構(gòu)無(wú)異常,線粒體未見(jiàn)變化,核膜光滑,染色質(zhì)均勻分布。模型組,無(wú)細(xì)胞輪廓,細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散,大部分線粒體腫大、崤減少甚至消失呈空泡變,細(xì)胞核碎裂。氟西汀組,細(xì)胞輪廓尚在,細(xì)胞結(jié)構(gòu)致密,細(xì)胞膜溶解,細(xì)胞質(zhì)凝結(jié),大部分線粒體腫大、嵴減少,核膜成波浪形,核皺縮、失去原本形態(tài)。開(kāi)心解郁方組,細(xì)胞輪廓清晰,細(xì)胞結(jié)構(gòu)無(wú)異常,較多的線粒體腫大、嵴變減少甚至消失呈空泡變,核膜光滑,染色質(zhì)分布較均勻。3從DCX的免疫熒光染色結(jié)果分析,各組DCX+數(shù)目無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。從標(biāo)準(zhǔn)差可看出,各組SGZDCX+數(shù)目組內(nèi)差異較大,氟西汀組、開(kāi)心解郁方組DCX+細(xì)胞數(shù)目差異過(guò)大。各組雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但模型組DCX+細(xì)胞有減少,氟西汀組、開(kāi)心解郁方組DCX+細(xì)胞數(shù)目有增加的趨勢(shì)。研究結(jié)論開(kāi)心解郁方在抑郁癥模型大鼠上顯示出了良好的抗抑郁效果,且起效時(shí)間可能早于氟西汀。開(kāi)心解郁方的抗抑郁作用可能與其保護(hù)海馬神經(jīng)元,促進(jìn)神經(jīng)再生,重塑海馬結(jié)構(gòu)和功能有關(guān)。抑郁模型大鼠海馬SGZ神經(jīng)再生作用可能受實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的個(gè)體差異影響較大。
【圖文】：
圖２每周各組糖水偏好趨勢(shì)圖逡逑３．２強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑給藥２周、４周后，與正常組比較，模型組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間增加；與模型逡逑組比較，開(kāi)心解郁方組、氟西汀組不動(dòng)時(shí)間均降低。開(kāi)心解郁方組給藥兩周、４逡逑周與模型組比較，，不動(dòng)時(shí)間有顯著差異（Ｐ＜０．０１），氟西汀組給藥４周與模型組逡逑不動(dòng)時(shí)間有顯著差異（ｐ＜0．０１）。逡逑表２給藥２周、４周后各組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間（Ｉ土ｓ，Ｓ）逡逑組別（ｎ）邐給藥２周邐給藥４周逡逑正常組（１５）邐２０３．０±３２．０邐２１３．７±２６．１逡逑模型組（１５）邐２４２．５±２３．８ａ邐２５０．９土２３．４Ａ逡逑氟西汀組（１５）邐２１３．２±３９．４邐２０３．３±５２．４＃＃逡逑開(kāi)心解郁方組（１５）邐１９１．２士３６．６＃＃邐１９５．０±３６．６＃＃邐逡逑
邐｜邐Ｉ逡逑圖２每周各組糖水偏好趨勢(shì)圖逡逑３．２強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑給藥２周、４周后，與正常組比較，模型組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間增加；與模型逡逑組比較，開(kāi)心解郁方組、氟西汀組不動(dòng)時(shí)間均降低。開(kāi)心解郁方組給藥兩周、４逡逑周與模型組比較，不動(dòng)時(shí)間有顯著差異（Ｐ＜０．０１），氟西汀組給藥４周與模型組逡逑不動(dòng)時(shí)間有顯著差異（ｐ＜0．０１）。逡逑表２給藥２周、４周后各組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間（Ｉ土ｓ，Ｓ）逡逑組別（ｎ）邐給藥２周邐給藥４周逡逑正常組（１５）邐２０３．０±３２．０邐２１３．７±２６．１逡逑模型組（１５）邐２４２．５±２３．８ａ邐２５０．９土２３．４Ａ逡逑氟西汀組（１５）邐２１３．２±３９．４邐２０３．３±５２．４＃＃逡逑開(kāi)心解郁方組（１５）邐１９１．２士３６．６＃＃邐１９５．０±３６．６＃＃邐逡逑注：與正常組比較，ＡＰ＜０．０５，邋ＡＡＰｃＯ．Ｏｌ；與模型組比較，＃＃Ｐ＜０．０１。逡逑２９逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號(hào)：
2637862
