【摘要】：目的:觀察附子理中湯對(duì)脾陽虛證大鼠水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)及心房利尿鈉肽(atrial natriuretic peptide,ANP)水平的影響,探討其參與脾陽虛證大鼠水液代謝調(diào)節(jié)的機(jī)制。方法:清潔級(jí)Wistar大鼠120只,雌雄不限,并隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組和附子理中湯高、中、低劑量組共6個(gè)組,每組20只。取其中100只,采用肩胛間棕色脂肪組織(brown adipose tissue,BAT)切除術(shù)+高脂飼料喂養(yǎng)+隔日寒冷環(huán)境刺激的復(fù)合因素造模方法,建立脾陽虛證動(dòng)物模型(假手術(shù)組只找到BAT但不切除)。造模成功后,予附子理中湯灌胃進(jìn)行藥物干預(yù),高、中、低劑量各組灌胃劑量分別為40g·kg~(-1)·d、20g·kg~(-1)·d、10g·kg~(-1)·d,用藥干預(yù)時(shí)間共30天,期間每天進(jìn)行動(dòng)物行為學(xué)觀察。于給藥30天后(其中模型組于造模成功后第1天)取材,用常規(guī)生化法檢測(cè)血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、尿肌酐(urinary creatinine,UCr)含量,HE染色法觀察大鼠胃竇與回腸組織病理形態(tài)學(xué)變化;ELISA法檢測(cè)ANP含量;用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)大鼠回腸組織AQP4 mRNA表達(dá)情況;用Western blot法檢測(cè)大鼠回腸組織AQP4含量。實(shí)驗(yàn)所獲得的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±S)表示,兩組之間進(jìn)行t檢驗(yàn),兩兩比較用q檢驗(yàn),按檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:(1)一般情況觀察:模型組大鼠出現(xiàn)畏冷喜扎堆、皮毛枯槁,伴食欲不振、倦怠、消瘦、便溏、肛周污穢等脾陽虛證的臨床表現(xiàn)。與模型組相比,附子理中湯各劑量組進(jìn)行藥物干預(yù)后第2周開始,各組大鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)狀況、食量與飲水量、大便情況均有不同程度的改善。(2)HE染色光鏡下觀察:附子理中湯各劑量組大鼠胃竇與回腸組織病理改變均有不同程度的減輕,以高劑量組效果最優(yōu)。(3)RT-PCR:與模型組相比,中、高劑量組AQP4mRNA表達(dá)水平相對(duì)較高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。(4)Western blot:與模型組相比,中、高劑量組AQP4含量相對(duì)較高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。(5)ELISA:與模型組相比,中、高劑量組ANP含量相對(duì)較高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。結(jié)論:(1)附子理中湯能改善脾陽虛證大鼠回腸AQP4、ANP含量及AQP4mRNA表達(dá);可有效改善脾陽虛大鼠腹瀉癥狀。(2)改善程度與給藥劑量成正相關(guān),高、中劑量?jī)?yōu)于低劑量;(3)AQP4、ANP均可能是附子理中湯參與調(diào)節(jié)脾陽虛證大鼠水液代謝的分子生物學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)之一。
【圖文】：

各組SCr、BUN、UCr含量

未見明顯改善；高劑量組較模型組明顯改善，與正常組與假手術(shù)組基本接近，，組織結(jié)構(gòu)完整，層次分明，界限明顯清晰，局部固有層輕度水腫，間質(zhì)較為疏松，回腸粘膜皺襞完整，未見異常病變，粘膜上皮細(xì)胞與腺體分布正常，無明顯細(xì)胞變性，少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，可見淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞，以漿細(xì)胞為主。（見圖 2-圖 9）。
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

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本文編號(hào)：2637855