【摘要】：世界范圍內(nèi),前列腺癌是男性最常見的惡性腫瘤之一,在男性所有惡性腫瘤中,前列腺癌發(fā)病率位居第二,嚴(yán)重危害了男性患者的健康。目前在我國腫瘤的預(yù)防和治療過程中,中藥在提高機(jī)體的免疫力、抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡、逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性等方面均發(fā)揮著重要的作用。棗是鼠李科棗屬植物棗樹的果實(shí)。傳統(tǒng)中醫(yī)藥認(rèn)為,棗是一種藥食同源的中藥材,具有極高的營養(yǎng)和藥用價(jià)值。我國棗的品種眾多,棗類資源豐富,金絲小棗作為我國獨(dú)有的品種,風(fēng)味和營養(yǎng)尤佳。棗有抗焦慮、抗肥胖、抗氧化、抗炎、增強(qiáng)免疫力、保肝、抗癌等多種藥理作用。研究表明,棗里面含有豐富的多糖、黃酮、酚酸、生物堿、環(huán)核苷酸、三萜類、維生素和礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分,其中有關(guān)多糖、黃酮、酚酸、環(huán)核苷酸等紅棗生物活性成分的國內(nèi)外研究居多,而有關(guān)棗中三萜的研究僅在國外有少數(shù)報(bào)道。鑒于我國紅棗產(chǎn)地和種類的不同,其三萜的成分、含量、功效和作用機(jī)制均有所差異,故而,對(duì)我國重要紅棗品種中三萜的研究,對(duì)于紅棗高端功能食品和藥品的開發(fā)至關(guān)重要。因此,本課題以樂陵金絲小棗為研究對(duì)象,摸索了樂陵金絲小棗中三萜的提取和純化工藝,對(duì)其進(jìn)行了成分分析和鑒定,并進(jìn)一步研究了其對(duì)前列腺癌細(xì)胞的活性和作用機(jī)制。樂陵金絲小棗三萜的提取和純化工藝研究包括提取和純化工藝的比較以及提取和純化工藝參數(shù)的考察,從而確定了較合適的提取和純化條件。從諸種紅棗三萜提取工藝中,我們篩選出了超聲輔助的醇提法,并考察了提取過程中溶劑、時(shí)間和料液比等關(guān)鍵參數(shù),對(duì)金絲小棗三萜的含量和收率的影響;而純化技術(shù)則選擇了堿溶酸沉法和萃取等純化工藝。樂陵金絲小棗三萜的分析和鑒定采用了紫外分光光度法、反相高效液相色譜法(HPLC-DAD)和液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS/MS)等分析和鑒定技術(shù)。所開發(fā)的HPLC-DAD和LC-MS/MS方法能同時(shí)分析和鑒定金絲小棗三萜類提取物中的7個(gè)三萜類化合物。在進(jìn)行金絲小棗三萜的含量分析前,對(duì)所開發(fā)的HPLC方法學(xué)展開了驗(yàn)證,在各目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi),線性相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.999以上,日內(nèi)精密度和日間精密度的RSD值的范圍分別是0.06～1.8%和0.14～1.5%,重復(fù)性試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD值均小于1.9%,加標(biāo)回收率的范圍在95.8%～102.6%之間,表明我們建立的分析方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。定量分析結(jié)果表明,金絲小棗三萜類提取物中含量最高的成分是熊果酮酸(202.4 mg/g)和齊墩果酮酸(153.4 mg/g),齊墩果酸(59.7 mg/g)和熊果酸(48.0 mg/g)的含量次之。金絲小棗三萜的前列腺癌細(xì)胞的活性及作用機(jī)制研究,包括前列腺癌PC-3和LNCaP細(xì)胞模型的建立,對(duì)前列腺癌細(xì)胞的抑制率和細(xì)胞凋亡通路的考察�；钚匝芯拷Y(jié)果顯示,樂陵金絲小棗三萜提取物能夠顯著抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖,且呈濃度依賴性和時(shí)間依賴性;對(duì)于PC-3細(xì)胞在48 h的抑制率為91.5%,IC50為21.2μg/mL 在LNCaP細(xì)胞上也顯現(xiàn)出類似的趨勢,在48 h的抑制率為69.6%,IC50為48.3 μg/mL。細(xì)胞周期研究表明金絲小棗三萜提取物能夠增加前列腺癌PC-3細(xì)胞在G1期細(xì)胞數(shù)量,減少S期和G2/M期細(xì)胞數(shù)量,這提示有可能通過此阻斷細(xì)胞周期進(jìn)程;另外,caspase8、caspase3和caspase9的含量均隨著金絲小棗三萜提取物的濃度增大而增加,繼而激活內(nèi)源性途徑和外源性途徑,來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。綜上所述,本課題以我國主要紅棗產(chǎn)區(qū)的樂陵金絲小棗為研究對(duì)象,首先探索了樂陵金絲小棗中三萜的提取和純化工藝技術(shù)及其關(guān)鍵參數(shù);然后對(duì)三萜成分進(jìn)行了定性和定量分析測試,其數(shù)據(jù)表明我國樂陵金絲小棗中三萜的種類和含量與其他大棗品種的有所差異;最后,研究了樂陵金絲小棗三萜提取物對(duì)前列腺癌PC-3和LNCaP細(xì)胞的抑制活性及作用機(jī)制,其結(jié)果顯示,我國樂陵金絲小棗三萜對(duì)所研究的前列腺癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用,且可以通過激活內(nèi)源性細(xì)胞凋亡途徑和外源性細(xì)胞凋亡途徑來抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖。因此,本課題的初步研究結(jié)果揭示了金絲小棗三萜類提取物具備成為前列腺癌新型治療藥物的可能性,并且其研究結(jié)果為進(jìn)一步開發(fā)紅棗三萜類化合物提供了具有較高實(shí)用價(jià)值的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法學(xué)。
【圖文】：

３．１．２標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備逡逑齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度測定結(jié)果見表２－１，以吸光度Ａ對(duì)濃度Ｃ繪制回歸逡逑曲線（見圖２－２），在０？２０邋ｐｇ／ｍＬ范圍內(nèi)呈線性相關(guān)。回歸方程為：逡逑Ｙ＝０．０３３６ｘ＋０．００８５邐Ｒ２＝０．９９９５。逡逑

３．２．１提取溶劑的影響逡逑用甲醇、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷和乙酸乙酯這幾種溶劑來提取，實(shí)驗(yàn)結(jié)逡逑果如表２－２和圖２－３所示，從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，用三氯甲烷和二氯甲烷作為提取溶逡逑劑，提取物中總?cè)频暮枯^高，分別為１１．９５±０．４５％和１５．７６±０．５１％，但是從逡逑總?cè)拼制返牡寐蕘碇v，用甲醇和乙醇作為溶劑時(shí)更高，這幾種溶劑中，其中乙逡逑醇的總?cè)拼制返寐首罡�，為３８．６�?#177;２．６５％。且乙醇更經(jīng)濟(jì)環(huán)保，，因此，選擇乙逡逑醇作為提取溶劑更合適。逡逑３０逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284;R285

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本文編號(hào)：2635873