【摘要】：胃癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一。晚期胃癌主要的治療手段仍已化療為主,然而在治療過程中往往會(huì)產(chǎn)生耐藥性。有報(bào)道指出,從中藥丹參(Salvia miltiorrhiza)中分離得到的二萜類產(chǎn)物丹參酮(Tanshinones)顯示出多種抗癌活性,尤為突出的是其在不同癌癥中能夠逆轉(zhuǎn)癌細(xì)胞耐藥性。因此,本研究旨在探究丹參植物中活性成分含量最高的丹參酮ⅡA(Tanshinone ⅡA,TAN ⅡA)是否能夠逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞對(duì)廣譜性抗癌藥物多柔比星(Doxorubicin,DOX)的耐藥性。目的:觀察TAN ⅡA是否可以逆轉(zhuǎn)對(duì)DOX耐藥的胃癌細(xì)胞耐藥性,并探究其潛在的分子機(jī)制。方法:基于DOX的IC_(50),鑒定了對(duì)DOX較為敏感的胃癌細(xì)胞SNU-719和SNU-610,以及對(duì)DOX相對(duì)耐藥的胃癌細(xì)胞SNU-638,SNU-668,SNU-216和SNU-620(內(nèi)源性耐藥);通過選擇性藥物濃度逐步增加法,挑選兩種DOX敏感性胃癌細(xì)胞SNU-719和SNU-610作為母本細(xì)胞,分別建立了對(duì)DOX耐藥胃癌細(xì)胞SNU-719R和SNU-610R(獲得性耐藥);利用DOX和DOX+TAN ⅡA兩種不同方式處理細(xì)胞,通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布、細(xì)胞凋亡情況以及藥物外排情況;結(jié)合Real-time PCR檢測(cè)相關(guān)藥物外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的mRNA表達(dá);利用Western blot法分析研究細(xì)胞中各種相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平;通過ELISA來測(cè)定凋亡相關(guān)蛋白酶的活性等。結(jié)果:(1)TAN ⅡA與DOX聯(lián)合用藥后,TAN ⅡA能夠逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞對(duì)DOX產(chǎn)生的耐藥性;(2)在由多藥耐藥相關(guān)蛋白1(Multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)過表達(dá)介導(dǎo)產(chǎn)生的DOX耐藥中,使用TAN ⅡA與DOX聯(lián)合用藥可以引起MRP1的下調(diào),從而逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞對(duì)DOX的耐藥;(3)TAN ⅡA的存在能夠引起對(duì)DOX耐藥的胃癌細(xì)胞中細(xì)胞周期G2/M期發(fā)生阻滯;(4)在使用TAN ⅡA與DOX共處理細(xì)胞后,我們通過實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到促凋亡蛋白p53和Bax的上調(diào),抗凋亡蛋白Bcl-2的下調(diào),佐以流式分析不同藥物處理后細(xì)胞的凋亡情況,證明了TAN ⅡA能夠引起胃癌耐藥細(xì)胞中細(xì)胞凋亡水平的增加;(5)當(dāng)DOX和TAN ⅡA共處理后引起了胃癌耐藥細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC3B-Ⅱ的顯著上調(diào)以及p62的下調(diào),因此表明TAN ⅡA能夠激活自噬信號(hào),誘導(dǎo)胃癌耐藥細(xì)胞的自噬性細(xì)胞死亡,最終達(dá)到逆轉(zhuǎn)耐藥的目的。結(jié)論:TAN ⅡA可以逆轉(zhuǎn)對(duì)DOX耐藥的胃癌細(xì)胞耐藥性,是一種能夠參與胃癌聯(lián)合用藥治療的潛在試劑。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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