發(fā)布時(shí)間：2020-04-21 03:19

【摘要】：研究目的建立大鼠煙霧吸入性急性肺損傷模型,觀察氧化應(yīng)激在煙霧吸入性急性肺損傷中的作用;探索牡荊素對(duì)煙霧吸入性急性肺損傷大鼠的保護(hù)作用并從抗氧化、抗炎方面探索其作用機(jī)制。研究方法1、大鼠煙霧吸入性急性肺損傷模型建立與鑒定及氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測(cè)8周齡健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組和煙霧吸入組。煙霧吸入組按照煙霧吸入后生存時(shí)間節(jié)點(diǎn)隨機(jī)分為4個(gè)亞組,分別是:致傷后1h組、致傷后6h組、致傷后12h組和致傷后24h組,每組10只。利用前期自行設(shè)計(jì)的產(chǎn)煙設(shè)備,建立大鼠煙霧吸入性急性肺損傷模型。按照各自時(shí)間節(jié)點(diǎn)麻醉解剖,收集標(biāo)本。觀察各組大鼠動(dòng)脈血?dú)夥治�、肺濕干�?wet/dry weight ratio,W/D)、肺組織丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和肺組織蘇木精伊紅(hematoxylin eosin,HE)染色等指標(biāo)變化。2、牡荊素對(duì)煙霧吸入性急性肺損傷大鼠的保護(hù)作用8周齡健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、煙霧+溶劑組(二甲基亞砜)、煙霧+牡荊素組,每組12只大鼠。在煙霧+牡荊素組,于煙霧吸入前連續(xù)5天給予大鼠腹腔注射牡荊素(3 mg*kg~(-1)*d~(-1));煙霧+溶劑組大鼠給予同體積的二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)腹腔注射;空白對(duì)照組不予以任何處理。然后按照第一部分方法建立大鼠煙霧吸入性急性肺損傷模型,模型建立后1h經(jīng)大鼠腹主動(dòng)脈采集動(dòng)脈血,進(jìn)行血?dú)夥治?在煙霧吸入后12h解剖大鼠,收集肺組織及支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)標(biāo)本,檢測(cè)各組大鼠肺組織W/D、BALF中蛋白濃度和肺組織HE染色。另取18只SD大鼠,同上進(jìn)行分組與處理,模型建立后觀察各組大鼠72h存活率,每隔12h觀察一次。采用Kaplan-Meier法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3、牡荊素通過減輕氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)發(fā)揮對(duì)煙霧吸入性急性肺損傷大鼠的保護(hù)作用8周齡健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為7組,分別為對(duì)照組、煙霧組、煙霧+牡荊素組、煙霧+PKC抑制劑組、煙霧+PKC激動(dòng)劑組、煙霧+牡荊素+PKC抑制劑組、煙霧+牡荊素+PKC激動(dòng)劑組。每組6只大鼠。煙霧吸入前連續(xù)5天按照各自組別需求進(jìn)行藥物預(yù)處理(劑量:牡荊素,3mg/kg*d;PKC抑制劑,1mg/kg*d;PKC激動(dòng)劑,1mg/kg*d),按照第一部分方法建立大鼠煙霧吸入性急性肺損傷模型。煙霧吸入后12h麻醉解剖各組大鼠,收集肺組織和血漿標(biāo)本,觀察各組大鼠肺組織勻漿和血漿中MDA、脂質(zhì)過氧化物(lipid peroxides,LPO)、SOD及谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)水平;肺組織勻漿中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;肺組織PKCβ、p66Shc和磷酸化p66Shc蛋白表達(dá)情況;肺組織HE染色特點(diǎn)。研究結(jié)果1、大鼠煙霧吸入性急性肺損傷模型建立與鑒定及氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測(cè)(1)血?dú)夥治?與對(duì)照組相比,煙霧吸入組大鼠PaO_2明顯下降(P0.05),大鼠PaCO_2在致傷后1h組增高(P0.05),大鼠動(dòng)脈血p H值在煙霧致傷后1h、24h降低(P0.05);(2)W/D:與對(duì)照組相比,煙霧吸入組大鼠W/D值均明顯升高(P0.05);(3)氧化應(yīng)激指標(biāo):與對(duì)照組相比,煙霧吸入組大鼠肺組織MDA均明顯上升(P0.05),SOD明顯下降(P0.05)(4)肺組織病理:煙霧致傷后各實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織均出現(xiàn)不同程度的肺泡充血、肺泡間隔增厚以及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等肺損傷表現(xiàn)。2、牡荊素對(duì)煙霧吸入性急性肺損傷大鼠的保護(hù)作用(1)存活率:與空白對(duì)照組相比,煙霧+溶劑組大鼠存活率為33.3%,顯著降低(P0.05);煙霧+牡荊素組大鼠存活率為66.7%。(2)血?dú)夥治?與空白對(duì)照組相比,煙霧+溶劑組大鼠氧分壓、氧合指數(shù)明顯下降(P0.05);與煙霧+溶劑組相比,煙霧+牡荊素組大鼠氧分壓、氧合指數(shù)有所上升(P0.05);(3)W/D:與空白對(duì)照組相比,煙霧+溶劑組大鼠W/D明顯上升(P0.05);與煙霧+溶劑組相比,煙霧+牡荊素組大鼠W/D有所下降(P0.05);(4)BALF蛋白濃度:與空白對(duì)照組相比,煙霧+溶劑組大鼠BALF蛋白濃度明顯上升(P0.05);與煙霧+溶劑組相比,煙霧+牡荊素組大鼠BALF蛋白濃度有所下降(P0.05);(5)肺組織病理:HE染色觀察到煙霧+溶劑組大鼠出現(xiàn)較為嚴(yán)重的肺泡壁增厚,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等損傷表現(xiàn),肺損傷評(píng)分增高(P0.05);煙霧+牡荊素組大鼠肺泡壁增厚、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等損傷表現(xiàn)有所減輕,肺損傷評(píng)分降低(P0.05)。3、牡荊素通過減輕氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)發(fā)揮對(duì)煙霧吸入性急性肺損傷大鼠的保護(hù)作用(1)肺組織勻漿氧化應(yīng)激指標(biāo):與對(duì)照組相比,煙霧組、煙霧+PKC激動(dòng)劑組、煙霧+牡荊素+PKC激動(dòng)劑組肺組織勻漿MDA明顯上升(P0.05),SOD明顯降低(P0.05);煙霧吸入后各組肺組織勻漿LPO明顯上升(P0.05),GSH-PX下降(P0.05)。與煙霧組相比,煙霧+牡荊素組、煙霧+PKC抑制劑組、煙霧+牡荊素+PKC抑制劑組中肺組織勻漿MDA和LPO水平下降(P0.05),SOD升高(P0.05);煙霧+牡荊素組和煙霧+牡荊素+PKC抑制劑組肺組織勻漿GSH-PX升高(P0.05);(2)血漿氧化應(yīng)激指標(biāo):與對(duì)照組相比,煙霧組、煙霧+PKC激動(dòng)劑組、煙霧+牡荊素+PKC激動(dòng)劑組血漿中MDA明顯上升(P0.05),SOD明顯降低(P0.05);除煙霧+牡荊素+PKC抑制劑組外,煙霧吸入后各組血漿LPO明顯上升(P0.05);吸入后各組GSH-PX活力下降(P0.05)。與煙霧組相比:煙霧+牡荊素組、煙霧+PKC抑制劑組和煙霧+牡荊素+PKC抑制劑組血漿MDA和LPO水平下降(P0.05),SOD和GSH-PX活力升高(P0.05);(3)肺組織勻漿炎癥指標(biāo):與對(duì)照組相比,煙霧組、煙霧+PKC抑制劑組、煙霧+PKC激動(dòng)劑組以及煙霧+牡荊素+PKC激動(dòng)劑組肺組織勻漿IL-1β、IL-6、TNF-α水平明顯上升(P0.05);與煙霧組相比,煙霧+牡荊素組和煙霧+牡荊素+PKC抑制劑組肺組織IL-6、TNF-α水平下降(P0.05);(4)Western blot結(jié)果:與對(duì)照組相比,煙霧組、煙霧+PKC激動(dòng)劑組和煙霧+牡荊素+PKC激動(dòng)劑組肺組織中PKCβ、p66Shc和p-p66Shc蛋白表達(dá)增加;與煙霧組相比,煙霧+牡荊素組、煙霧+PKC抑制劑組和煙霧+牡荊素+PKC抑制劑組肺組織中PKCβ、p66Shc和p-p66Shc蛋白表達(dá)減少;(5)肺組織病理:與對(duì)照組相比,煙霧吸入后各組大鼠肺組織均出現(xiàn)不同程度損傷。其中煙霧組、煙霧+PKC激動(dòng)劑組肺泡間隔增厚,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和肺泡充血最為嚴(yán)重;與煙霧組相比,煙霧+PKC抑制劑組和煙霧+牡荊素+PKC抑制劑組肺泡間隔增厚炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和肺泡充血減輕。結(jié)論1、成功建立煙霧吸入性急性肺損傷大鼠模型;氧化應(yīng)激參與了煙霧吸入性急性肺損傷;2、牡荊素能通過減輕氧化應(yīng)激及抑制炎癥反應(yīng)發(fā)揮對(duì)煙霧吸入性急性肺損傷大鼠的保護(hù)作用;3、抑制PKCβ/p66Shc通路是牡荊素調(diào)控氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)的可能機(jī)制之一。
【圖文】：

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文30圖2-1 各組大鼠存活率Fig 2-1 Survival rate of rats in each group注：與對(duì)照組比較：*P＜0.05, 與 smoke+DMSO 組比較：#P＜0.05,3.2 大鼠動(dòng)脈血氧分壓及氧合指數(shù)（PaO2/FiO2）如表2-3所示，煙霧吸入后1h，smoke+DMSO組大鼠PaO2與氧合指數(shù)均迅速下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與smoke+DMSO組相比，smoke+vitexin組大鼠PaO2與氧合指數(shù)有所上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

32圖 2-2 各組大鼠肺組織病理及肺損傷評(píng)分（HE 200）Fig 2-2 Lung tissue histopathology and lung injury score of rats in each group （HE 20A, control B,smoke+DMSO C,smoke+vitexin D，lung injury score與對(duì)照組比較：*P＜0.05, 與 smoke+DMSO 組比較：#P＜0.05,4 討論減輕氧化應(yīng)激是治療SI-ALI的一個(gè)重要方面，目前大多處于臨床前的動(dòng)物胞實(shí)驗(yàn)研究階段。有研究發(fā)現(xiàn)，，大鼠在煙霧吸入后給予腹腔注射N-乙酰半胱（N-acetylcysteine, NAC）救治能提高肺組織GSH水平，減輕肺損傷[28]。而Ka等則表明NAC會(huì)加重?zé)熿F吸入患者肺炎發(fā)病率。其次，具有抗氧化活性的維類物質(zhì)也被用于SI-ALI研究，Morita[30]等發(fā)現(xiàn)維生素E能夠使綿羊體內(nèi)具有抗
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2635300