【摘要】：論文一木犀草苷對3T3-L1前脂肪細胞分化的抑制作用目的:研究木犀草苷對3T3-L1前脂肪細胞增殖和分化的影響,并探討它可能的作用機制。方法:1.選取3T3-L1前脂肪細胞作為研究對象,分別設(shè)置對照組(0μmol/L)以及5、10、20、40、80、160、320μmol/L濃度的木犀草苷給藥組,采用噻唑藍(MTT)法在24、48、72、96h時檢測木犀草苷對前脂肪細胞增殖活性的影響。2.采用“雞尾酒法”誘導(dǎo)前脂肪細胞分化為成熟的脂肪細胞,利用油紅O染色觀察3T3-L1前脂肪細胞成脂分化過程中的脂滴形成情況,鑒定其分化程度。3.選用不同濃度的木犀草苷(5, 20,80μmol/L)干預(yù)3T3-L1前脂肪細胞,誘導(dǎo)分化至第8d,采用異丙醇萃取法、甘油三酯(TG)含量測定分析不同濃度木犀草苷對3T3-L1前脂肪細胞誘導(dǎo)分化過程中脂質(zhì)合成的影響。4.采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)法檢測木犀草苷對3T3-L1前脂肪細胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細胞過程中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子CCAAT增強子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)、過氧化物酶體增殖物活化受體γ (PPARγ) mRNA表達水平。5.采用Western blot法檢測木犀草苷對3T3-L1前脂肪細胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細胞過程中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα、PPARγ蛋白表達水平。結(jié)果:1.根據(jù)時效量效實驗結(jié)果顯示,與對照組(Oμmol/L)相比,5、10、20、40、80μmol/L濃度的木犀草苷給藥組對3T3-L1前脂肪細胞的增殖不存在差異顯著性(P＞0.05)。160、320μmol/L濃度的木犀草苷給藥組顯著抑制了細胞的增殖(P＜005)P進而減少脂肪細胞數(shù)量。2.與對照組(0μmol/L)相比,5、20、80μmol/L濃度的木犀草苷給藥組呈劑量依賴性抑制3T3-L1前脂肪細胞的分化,通過降低脂滴中TG含量顯著性抑制脂質(zhì)合成(P＜0.01)。3.在誘導(dǎo)分化第8d,5、20、80μ/L濃度的木犀草苷給藥組中C/EBPα和PPARγ mRNA和蛋白表達水平顯著性降低,與對照組(Oμmol/L)比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1.木犀草苷可顯著性抑制3T3-L1前脂肪細胞成脂分化,減少脂質(zhì)積聚。2.木犀草苷抑制3T3-L1前脂肪細胞成脂分化的機制,可能是通過下調(diào)PPARγ、C/EBPα的表達來實現(xiàn)的。論文二豆茶決明含藥血清對3T3-L1前脂肪細胞分化的抑制作用目的:考察豆茶決明含藥血清對前脂肪細胞增殖過程的影響;研究豆茶決明含藥血清對前脂肪細胞分化過程的影響;通過上述研究,探討豆茶決明含藥血清對脂肪細胞的作用,以期明確豆茶決明含藥血清對前脂肪細胞增殖和分化過程的干預(yù)是否為豆茶決明減輕體重的機制之一,從而為肥胖的預(yù)防和治療尋找新的理論依據(jù)。方法:1.制備豆茶決明含藥血清,擴大培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細胞,采用噻唑藍(MTT)比色法檢測豆茶決明含藥血清(5%、10%、20%)對3T3-L1前脂肪細胞增殖過程的影響。2.采用高效液相色譜法(HPLC)對豆茶決明含藥血清中木犀草苷含量進行測定。3.采用不同濃度的豆茶決明含藥血清分化培養(yǎng)基干預(yù)3T3-L1前脂肪細胞,誘導(dǎo)分化至第6d,油紅O脂肪染色觀察及評價細胞分化情況,異丙醇萃取法測定其對細胞脂肪積聚的影響。4.采用甘油三酯(TG)試劑盒檢測不同濃度豆茶決明含藥血清對3T3-L1前脂肪細胞分化過程中脂質(zhì)合成的影響。5.采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)法檢測豆茶決明含藥血清對3T3-L1前脂肪細胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細胞過程中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子CCAAT增強子結(jié)合蛋白(C/EBPβ、C/EBPα)、過氧化物酶體增殖物活化受體γ (PPARγ) mRNA表達水平。6.采用Western blot法檢測豆茶決明含藥血清對3T3-L1前脂肪細胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細胞過程中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ蛋白表達水平。結(jié)果:1.豆茶決明含藥血清中含有0.16%的木犀草苷成分。2.與對照組(Control)相比,豆茶決明含藥血清(5%、10%、20%)對3T3-L1前脂肪細胞增殖無顯著性影響(P＞0.05)。3.采用“雞尾酒法”成功誘導(dǎo)前脂肪細胞成脂分化為成熟脂肪細胞,采用油紅O染色進行鑒定。豆茶決明含藥血清(5%、10%、20%)干預(yù)前脂肪細胞,分化后胞漿中脂滴數(shù)量顯著性降低。脂滴中TG含量顯著性下降(P＜0.05)。4.與對照組(Control)相比,豆茶決明含藥血清(5%、10%、20%)干預(yù)前脂肪細胞,分化后C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ mRNA和蛋白表達顯著性降低(P＜005)。結(jié)論:1.豆茶決明含藥血清能夠減少脂肪細胞分化過程中脂質(zhì)的積聚,抑制脂肪細胞的分化。2.豆茶決明含藥血清對3T3-L1前脂肪細胞分化的抑制作用,可能與其降低C/EBPβ、C/EBPα和PPARγ mRNA和蛋白表達有關(guān)。3.豆茶決明含藥血清對3T3-L1前脂肪細胞分化的抑制作用的主要成分之一來源于木犀草苷。
【圖文】：

豆茶 決 明及 其 有效 組 分木 犀 草苷 對 前 脂肪 細 胞分 化 的影 響 實 驗 結(jié) 果1．3T 3 - L1 前 脂肪 細胞 分 化 應(yīng)用 CK X 4 1 倒置 生物 顯 微 鏡 觀察 ， 前 體脂 肪 細胞 具有 成 纖 維 細胞 樣 形 態(tài) ，呈 多 角 形或 梭 形 (圖 1- 1A ) 。當(dāng) 細胞 達到 1 00 % 融匯 度時 ， 細胞 進 入 到 生長 抑 制期 ，細 胞 之 間 緊密 連 接， 這時 達 到成 脂分 化 的前 提 條件 ( 圖 1 - 1B 和 1- 1C ) 。 誘 導(dǎo)分 化 開始 后， 細 胞 間 隙逐 漸變 大 ，細 胞 形 態(tài) 改變 呈 圓形 或橢 圓 形 ， 細 胞 內(nèi) 開始 出現(xiàn) 脂 滴積 聚( 圖 1- 1 D) ；隨 著 脂滴 變 大， 成 熟的 脂 肪細 胞數(shù) 目 增多 ( 圖 1- 1E ) ； 形成 “戒 環(huán) ” 經(jīng)典 脂肪 細 胞表 型 ( 圖 1 - 1F ) 。A B C

與 Co nt r o l 組比 較， * P< 0 . 05 * *P < 0 .0 1 圖 1- 2 木犀 草苷 對 3T 3 - L1 前 脂肪 細 胞增 殖 的影 響 Fi g. 1- 2 Ef f e c t s of l ut eo l os id e on t he p r ol i fe r a ti on o f 3T 3 - L1 p r e a d ip o c yt es 3． 木犀 草苷 對 脂質(zhì) 形 成 的影 響 OR O 實驗 結(jié)果 顯 示， 與 對照 組 ( Co nt r ol ) 相比 ，DM SO 組 顯著 性下 降 ，說明 造模 成 功 ， 3T 3 - L1 前脂 肪 細胞 已 分化 為 成熟 脂 肪細 胞 。 木 犀草 苷 給藥 組 ( 5、 20 、 80 μ m o l /L ) 所含 紅 色“ 戒 環(huán)” 樣 脂滴 數(shù) 目較 對 照組 ( Co n t ro l， 0 μm o l /L 木 犀草 苷 ) 明顯 減少 ( 圖 1- 3) 。 對脂 質(zhì) 含量 的 定量 結(jié)果 表 明木 犀 草苷 給 藥組 ( 5、 20 、8 0 μm o l /L ) 脂 質(zhì)含 量 較對 照 組顯 著 降 低 ( 86 . 0% v s 10 0 %； 7 9. 3 % vs 1 00 % ；6 9 . 8% vs 10 0 % ) (圖 1 - 4) ， 與 OR O 結(jié)果 一致 ， T G 含量 分別 降 低 25 .7 % 、 2 6 .7 % 和 32 .2 % ( 圖 1- 5) 。脂 質(zhì)含 量 和 TG 含量 的 減少 均 表明 木 犀草 苷 可顯 著 性抑 制 前 脂肪 細 胞 分化 。
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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1 楊楚楓;楊洋;張s，

本文編號：2635317