【摘要】：葫蘆素B是從葫蘆科植物甜瓜瓜蒂中提取得到的一種高度氧化的四環(huán)三萜類(lèi)化合物,其難溶于水,且在胃、腸道內(nèi)的吸收差,生物利用度低。為提高葫蘆素B的溶出度,改善其生物利用度,本研究應(yīng)用固體分散技術(shù),以泊洛沙姆407為載體,采用溶劑法制備固體分散體;通過(guò)掃描電鏡法、差示掃描量熱法、粉末X-射線(xiàn)衍射法、傅里葉紅外光譜法等手段進(jìn)行物相鑒別,并比較固體分散體、物理混合物和原料藥的溶出度;以大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,進(jìn)行了葫蘆素B固體分散體與原料藥的藥代動(dòng)力學(xué),探討主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)間的差異。目的:建立葫蘆素B體外溶出試驗(yàn)的方法;建立UPLC-MS/MS法測(cè)定大鼠血漿中葫蘆素B含量的分析方法;采用溶劑法制備固體分散體,并進(jìn)行物相鑒別及溶出度測(cè)定;研究葫蘆素B固體分散體的藥代動(dòng)力學(xué)。方法:1.UV法測(cè)定葫蘆素B原料藥及其在固體分散體中的含量和HPLC法測(cè)定葫蘆素B固體分散體在水中的溶出度,并進(jìn)行方法學(xué)考察;通過(guò)對(duì)溶出介質(zhì)、轉(zhuǎn)速等條件的考察,篩選葫蘆素B固體分散體的溶出試驗(yàn)條件。2.UPLC-MS/MS法測(cè)定大鼠血漿中葫蘆素B含量的分析方法:質(zhì)譜條件的優(yōu)化,生物樣品前處理方法;方法學(xué)考察:線(xiàn)性范圍,精密度與準(zhǔn)確度,回收率,基質(zhì)效應(yīng)和穩(wěn)定性。3.葫蘆素B絕對(duì)生物利用度的測(cè)定:以大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,分別注射和灌胃給予葫蘆素B,應(yīng)用UPLC-MS/MS法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠血漿中葫蘆素B含量,采用DAS 3.2.8軟件計(jì)算主要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),并計(jì)算葫蘆素B的絕對(duì)生物利用度。4.通過(guò)結(jié)晶抑制試驗(yàn)、溶解度試驗(yàn)進(jìn)行固體分散體載體的篩選;采用溶劑法制備固體分散體,單因素法篩選載藥比例和制備用溶劑。5.應(yīng)用掃描電鏡法、差示掃描量熱法、粉末X-射線(xiàn)衍射法、傅里葉紅外光譜法對(duì)葫蘆素B固體分散體進(jìn)行物相鑒別;應(yīng)用溶出度試驗(yàn)對(duì)葫蘆素B固體分散體、物理混合物與原料藥的溶出度進(jìn)行考察。6.葫蘆素B固體分散體藥代動(dòng)力學(xué)的研究:以大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,分別單次灌胃給予葫蘆素B原料藥和固體分散體,不同時(shí)間點(diǎn)眼眶取血,采用UPLC-MS/MS法測(cè)定葫蘆素B在血漿中的濃度,繪制血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn),采用DAS 3.2.8擬合主要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),計(jì)算相對(duì)生物利用度,并比較葫蘆素B固體分散體與原料藥的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的差異。結(jié)果:1.采用UV方法進(jìn)行含量測(cè)定,檢測(cè)波長(zhǎng)為228 nm,葫蘆素B的線(xiàn)性范圍是3.84~32.64μg/mL,線(xiàn)性回歸方程為A=0.0255C+0.0799,相關(guān)系數(shù)r=0.999;精密度RSD=3.59%;低、中、高三種濃度的樣品平均回收率分別為99.38%、99.21%、100.20%;樣品24 h內(nèi)穩(wěn)定。采用HPLC方法進(jìn)行溶出度的測(cè)定,葫蘆素B的線(xiàn)性范圍是0.27~3.78μg/mL,線(xiàn)性回歸方程為Y=24070.4X+710.9,相關(guān)系數(shù)r=0.9999;低、中、高三種濃度樣品的精密度RSD分別為3.78%、3.19%、2.66%;低、中、高三種溶出樣品的平均回收率分別為97.57%、100.64%、99.26%;樣品24 h內(nèi)穩(wěn)定。葫蘆素B固體分散體的溶出條件:水為溶出介質(zhì),槳法,轉(zhuǎn)速100 r/min,溫度37℃。2.采用UPLC-MS/MS法測(cè)定血漿中葫蘆素B的含量,血漿中葫蘆素B的線(xiàn)性范圍是0.05~1000 ng/mL,線(xiàn)性回歸方程為:Y=15801.4X+3365.1,相關(guān)系數(shù)r=0.9996,最低定量限為0.05 ng/mL;LLOQ樣品的平均準(zhǔn)確度為110.67%,精密度RSD=5.32%;QC樣品的平均準(zhǔn)確度分別為98.17%、104.50%、99.67%,精密度RSD分別為4.66%、5.44%、5.52%;葫蘆素B的基質(zhì)效應(yīng)為94.19~99.42%,IS的基質(zhì)效應(yīng)為100.83%;回收率均大于85%;樣品穩(wěn)定性良好。3.葫蘆素B的絕對(duì)生物利用度為1.37%。4.結(jié)晶抑制試驗(yàn)結(jié)果表明,泊洛沙姆407對(duì)葫蘆素B超飽和溶液的抑晶能力明顯優(yōu)于F68、PEG-6000、Soluplus、HPMC E_(30)、PVP K_(90),且泊洛沙姆407能稍增加葫蘆素B在水中的溶解度。選擇泊洛沙姆407為載體,分別按照1:5、1:7的載藥比例,以二氯甲烷為溶劑,采用溶劑法制備葫蘆素B固體分散體。溶出45 min時(shí),原料藥、物理混合物、1:5固體分散體和1:7固體分散體的溶出度分別為12.92%、30.61%、88.58%、98.34%。5.葫蘆素B固體分散體的外觀(guān)為白色粉末,無(wú)結(jié)塊,無(wú)粘連。SEM檢測(cè):葫蘆素B原料藥呈棱柱狀晶體,泊洛沙姆407呈不規(guī)則團(tuán)塊狀,物理混合物中有柱狀晶體和不規(guī)則的團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu),而固體分散體中葫蘆素B的晶體結(jié)構(gòu)大部分消失;X-RD檢測(cè):葫蘆素B原料藥在7.0°、13.5°、16.1°、20.5°等處有明顯的晶體衍射峰,固體分散體的圖譜中葫蘆素B的特征衍射峰大部分消失,但仍有部分特征峰存在;DSC檢測(cè):葫蘆素B和泊洛沙姆407分別在181.75℃和61.31℃處出現(xiàn)吸熱峰,物理混合物中出現(xiàn)以上2個(gè)特征吸熱峰,固體分散體中僅出現(xiàn)泊洛沙姆407的特征吸熱峰;FTIR檢測(cè):固體分散體的圖譜中有葫蘆素B的酮基特征峰(1720 cm~(-1)、1695 cm~(-1))及羥基特征峰(3504 cm~(-1)),以及泊洛沙姆的特征峰;根據(jù)以上分析推測(cè)固體分散體中藥物以無(wú)定形伴有微晶的形式存在。6.1:5、1:7固體分散體的相對(duì)生物利用度分別為268.35%、364.02%。大鼠灌胃給予葫蘆素B固體分散體的T_(max)比原料藥提前1 h;1:5、1:7固體分散體組的AUC與原料藥組比具有顯著性差異(P0.05);1:5、1:7固體分散體組C_(max)與原料藥組比具有顯著性差異(P0.05),且CL_(z/F)和V_(z/F)均比原料藥組降低。結(jié)論:采用溶劑法制備的葫蘆素B固體分散體,能明顯提高葫蘆素B的溶出度;藥代動(dòng)力學(xué)研究表明,固體分散技術(shù)能顯著提高其生物利用度。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R283.6;R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 王莉梅;王雪瑩;姚銘;;葫蘆素類(lèi)化合物新劑型的研究進(jìn)展[J];中國(guó)生化藥物雜志;2016年02期

2 王貴強(qiáng);王福生;成軍;任紅;莊輝;孫劍;李蘭娟;李杰;孟慶華;趙景民;段鐘平;侯金林;賈繼東;唐紅;盛吉芳;彭R，

本文編號(hào)：2634444