【摘要】：目的:通過蛇菰多糖對脊髓損傷大鼠模型進(jìn)行治療,觀察并比較治療后脊髓運(yùn)動神經(jīng)元組織形態(tài)的變化,并檢測相應(yīng)的自噬相關(guān)蛋白,探討蛇菰多糖對脊髓損傷的保護(hù)作用機(jī)制是否通過激活細(xì)胞自噬而產(chǎn)生。方法:實(shí)驗(yàn)選取150只SD雄性大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、蛇菰多糖治療組。隨后,對模型組和假手術(shù)組每天給予2ml生理鹽水灌胃,蛇菰多糖治療組分別給予低、中、高三個不同劑量的蛇菰多糖溶液(分別為25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)灌胃治療。最后,采用行為學(xué)BBB評分來評價蛇菰多糖對脊髓損傷的治療效果。采用尼氏染色法觀察脊髓損傷后脊髓運(yùn)動神經(jīng)元組織形態(tài)的變化。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測相應(yīng)脊髓運(yùn)動神經(jīng)元LC3蛋白的表達(dá)情況;Western Blotting檢測相應(yīng)自噬相關(guān)蛋白Beclin 1、LC3-Ⅱ、p62蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1 BBB評分結(jié)果:假手術(shù)組在不同時間段BBB評分均趨近于正常分值;蛇菰多糖治療組與模型組相比較,其中高劑量組在術(shù)后3、7天時的評分均高于模型組(p0.05),中劑量組在術(shù)后7天時高于模型組(p0.05)。低劑量組與模型組無差異(p0.05)。2尼氏染色結(jié)果:假手術(shù)組尼氏小體顆粒數(shù)量比較多,且均勻的分布在細(xì)胞質(zhì)中,著色呈現(xiàn)為深紫色,神經(jīng)元形態(tài)較完好。與假手術(shù)組相比,模型組各個時間段的脊髓神經(jīng)元形態(tài)均不完整,而且細(xì)胞間隙增大,神經(jīng)元胞體皺縮,著色亦淺淡,神經(jīng)元數(shù)量明顯減少。與模型組相比,蛇菰多糖治療組病理改變優(yōu)于模型組中,蛇菰多糖治療組胞質(zhì)崩解相對較少,著色相對較深,神經(jīng)元形態(tài)尚可,神經(jīng)元數(shù)量相對增多。3免疫組化結(jié)果:與假手術(shù)組相比較,模型組在術(shù)后1、3、7天三個時間段脊髓運(yùn)動神經(jīng)元中LC3蛋白陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多,差異具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。蛇菰多糖治療組與模型組相比較,其中高劑量組在術(shù)后1、3、7天時脊髓運(yùn)動神經(jīng)元中LC3蛋白陽性細(xì)胞數(shù)均高于模型組(p0.05),中劑量組在術(shù)后3、7天時高于模型組(p0.05);低劑量組與模型組無差異(P0.05)。4 Western Blot結(jié)果:1天時,與假手術(shù)組比較,模型組脊髓組織中Beclin 1蛋白的表達(dá)明顯降低,p62和LC3-Ⅱ蛋白的表達(dá)明顯升高,且差異具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。蛇菰多糖治療組與模型組相比較,高劑量組脊髓組織中Beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白的表達(dá)均高于模型組(p0.05),中、高劑量組脊髓組織中p62蛋白的表達(dá)均低于模型組(p0.05);低劑量組中Beclin 1、LC3-Ⅱ、p62蛋白的表達(dá)與模型組之間均無差異(p0.05)。3天時,與假手術(shù)組比較,模型組脊髓組織中Beclin 1蛋白的表達(dá)降低,p62和LC3-Ⅱ蛋白的表達(dá)相對升高,且差異具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。蛇菰多糖治療組與模型組相比,低、中、高劑量組脊髓組織中Beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白的表達(dá)均高于模型組,其中低、中劑量組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),高劑量組具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01);蛇菰多糖中、高劑量組脊髓組織中p62蛋白的表達(dá)均低于模型組,其中中劑量與模型組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),高劑量組具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01),低劑量組與模型組無差異(p0.05)。7天時,與假手術(shù)組比較,模型組脊髓組織中Beclin 1蛋白的表達(dá)相對降低,p62和LC3-Ⅱ的表達(dá)仍然升高,且差異具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01);蛇菰多糖治療組與模型組相比,低、中、高劑量組脊髓組織中Beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白的表達(dá)均高于模型組,中劑量組與模型組相比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),高劑量組具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01),低劑量組中LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)亦具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);蛇菰多糖低、中、高三個劑量組脊髓組織中p62蛋白的表達(dá)均低于模型組,低、中劑量組與模型組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),高劑量組具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。結(jié)論:蛇菰多糖對脊髓損傷后神經(jīng)元具有保護(hù)作用,其機(jī)制可能與增強(qiáng)脊髓組織中Beclin 1和LC3-II蛋白,同時降低p62蛋白的表達(dá)而增強(qiáng)細(xì)胞自噬水平的機(jī)制有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：湖北民族學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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