發(fā)布時(shí)間：2020-04-20 07:27

【摘要】：目的研究刺蒺藜不同濃度對(duì)人黑色素瘤SK-Mel-23細(xì)胞黑素代謝的影響,并探討刺蒺藜調(diào)節(jié)色素代謝的分子機(jī)制。方法以刺蒺藜水提取物為實(shí)驗(yàn)藥物,人黑色素瘤SK-Mel-23細(xì)胞為模型,實(shí)驗(yàn)分為刺蒺藜組、H-89+刺蒺藜組、空白對(duì)照組,MTT法檢測(cè)SK-Mel-23細(xì)胞活性,NaOH裂解法測(cè)定黑素含量,多巴速率氧化法測(cè)定酪氨酸酶活性,Western Blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)。結(jié)果1.刺蒺藜組對(duì)黑素代謝的影響和作用機(jī)制1.1對(duì)細(xì)胞活性的影響不同濃度刺蒺藜作用SK-Mel-23細(xì)胞24、48、72小時(shí)后,均對(duì)細(xì)胞活性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=19.623,P0.001;F=5.49,P0.01;F=2.04,P0.01),在低濃度的時(shí)促進(jìn)細(xì)胞活性,隨著濃度增加呈抑制作用。1.2對(duì)黑素合成的影響不同濃度刺蒺藜作用SK-Mel-23細(xì)胞24、48、72小時(shí)后,均對(duì)黑素合成有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=11.927,P0.001;F=9.03,P0.001;F=16.5,P0.001),在低濃度時(shí)對(duì)黑素合成呈抑制作用,隨著濃度增加呈促進(jìn)作用。1.3對(duì)酪氨酸酶活性的影響不同濃度刺蒺藜作用SK-Mel-23細(xì)胞24、48、72小時(shí)后,對(duì)酪氨酸酶活性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.74,P0.001;F=3.97,P0.001;F=21.55,P0.001),低濃度的時(shí)對(duì)SK-Mel-23細(xì)胞酪氨酸酶活性呈抑制作用,隨著濃度增加呈促進(jìn)作用。1.4對(duì)蛋白表達(dá)的影響不同濃度刺蒺藜作用SK-Mel-23細(xì)胞48h后,與對(duì)照組比對(duì)TYR、TRP-1、MITF、p-CREB蛋白的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.97,P0.001;F=11.37,P0.001;F=1.53,P0.05;F=2.67,P0.05),低濃度的時(shí)候抑制蛋白表達(dá),隨著濃度增加促進(jìn)蛋白表達(dá)。2.H-89+刺蒺藜組對(duì)黑素代謝及蛋白表達(dá)的影響2.1對(duì)黑素合成的影響H-89處理后加入刺蒺藜培養(yǎng)48h,不同濃度組與加入H-89對(duì)照組比對(duì)黑素合成的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.683,P=0.61),不同濃度組與不加入H-89對(duì)照組比對(duì)黑素合成的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2915,P0.001)。2.2對(duì)酪氨酸酶活性的影響H-89處理后加入刺蒺藜培養(yǎng)48h,不同濃度組與加入H-89對(duì)照組比對(duì)酪氨酸酶活性的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.416,P=0.822),不同濃度組與不加入H-89對(duì)照組比對(duì)酪氨酸酶活性的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=354.9,P0.001)。2.3對(duì)蛋白表達(dá)的影響H-89處理后加入刺蒺藜培養(yǎng)48h,各濃度組與加H-89對(duì)照組對(duì)比對(duì)TYR、TRP-1、MITF、p-CREB表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.499,P=0.9;F=3.062,P=0.89;F=0.76,P=0.61;F=0.89,P=0.51),蛋白的表達(dá)不隨濃度的改變而變化,各濃度組與不加H-89對(duì)照組對(duì)比對(duì)蛋白表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.324,P0.05;F=2.927.P0.05;F=10.41,P0.01;F=7.233,P0.001)。討論本實(shí)驗(yàn)證實(shí)刺蒺藜能雙向調(diào)節(jié)色素代謝,實(shí)驗(yàn)最佳時(shí)間為48h。刺蒺藜在低濃度時(shí)對(duì)細(xì)胞活性有抑制作用,在高濃度時(shí)對(duì)細(xì)胞活性有促進(jìn)作用;對(duì)黑素合成和酪氨酸酶活性呈相反作用,其作用機(jī)制可能是在低濃度時(shí)抑制TYR、TRP-1、MITF、p-CREB蛋白的表達(dá),而在高濃度時(shí)促進(jìn)蛋白的表達(dá)。加入PKA通路抑制劑后刺蒺藜不同濃度對(duì)色素代謝基本無(wú)改變,說(shuō)明刺蒺藜是通過(guò)調(diào)控cAMP/PKA通路來(lái)調(diào)控色素代謝的。
【圖文】：

８．１８ｍｇ／ｍｌ時(shí)呈現(xiàn)促進(jìn)作用，而４８小時(shí)階段和７２小時(shí)時(shí)間階段分別在濃度為逡逑４．０９ｍｇ／ｍｌ和２．０５ｍｇ／ｍｌ時(shí)呈現(xiàn)促進(jìn)作用，三個(gè)時(shí)間階段均在濃度為１６．３７ｍｇ／ｍｌ逡逑時(shí)對(duì)細(xì)胞酪氨酸酶活性的促進(jìn)作用最強(qiáng)。由圖３可知，在促進(jìn)酪氨酸酶活性的逡逑濃度中，７２小時(shí)的促進(jìn)作用在趨勢(shì)上要優(yōu)于２４小時(shí)，兩者在１６．３７ｍｇ／ｍｌ濃度逡逑２４逡逑

２結(jié)果逡逑２．１黑素合成結(jié)果逡逑由表４和圖４可知，，Ｈ－８９＋刺蒺藜組與只加入Ｈ－８９對(duì)照組相比對(duì)黑素合成逡逑的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義ＣＦ＝０．６８３，邋ｉＭ）．６１），Ｈ－８９＋刺蒺藜組與只加入Ｈ－８９的對(duì)逡逑照組對(duì)黑素合成無(wú)明顯差異，各濃度組之間也無(wú)明顯差異。Ｈ－８９＋刺蒺藜組、只逡逑加入Ｈ－８９對(duì)照組與不加入Ｈ－８９對(duì)照組相比比對(duì)黑素合成的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義逡逑（Ｆ＝２９１５，邋Ｐ＜０．００１），與只加入培養(yǎng)基而無(wú)加入Ｈ－８９的對(duì)照組相比，Ｈ－８９＋逡逑刺蒺藜組與只加入Ｈ－８９對(duì)照組對(duì)黑素合成有顯著差異，均對(duì)黑素合成減少。在逡逑刺漠藜實(shí)驗(yàn)濃度相同時(shí)，刺漠藜組和刺蒺藜＋Ｈ－８９組及兩組的對(duì)照組之間的黑逡逑素合成對(duì)比見(jiàn)圖４，邋Ｈ－８９＋刺蒺藜組中不同濃度組的黑素合成明顯低于刺蒺藜逡逑組。逡逑表４Ｈ－８９＋刺蒺藜組對(duì)ＳＫ－Ｍｅｌ－２３細(xì)胞黑素代謝的影響Ｃ邋ｉ±ｓ，邋ｎ＝３）逡逑濃度邐黑素合成逡逑１．０２ｍｇ／ｍｌ邐９８．８４１±１．５２７＊＊＊逡逑２．０５ｍｇ／ｍｌ邐９９．４１２±２．１２１＊＊＊逡逑４．０９ｍｇ／ｍｌ邐１００．７７Ｕ１．７７９＊＊＊逡逑８．１８ｍｇ／ｍｌ邐９９．８０１ｉ０．８９４＊＊＊逡逑１６．３７ｍｇ／ｍｌ邐１００．１９３±２．９６＊＊＊逡逑對(duì)照組邐１００±０．００＊＊＊逡逑不加邋Ｈ－８９邐３３３．９１４±３．５９２逡逑注：ｎ＝３；與對(duì)照相比＊b6＜０．邋０５
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2634322