【摘要】：目的:觀(guān)察荊芥揮發(fā)油與胡薄荷酮對(duì)LPS中毒模型小鼠的保護(hù)作用,并從NLRP3炎癥小體角度,探討荊芥揮發(fā)油及胡薄荷酮抗炎效應(yīng)的NLRP3炎癥小體通路分子機(jī)制,進(jìn)一步完善荊芥揮發(fā)油的抗炎作用研究,揭示其主要物質(zhì)基礎(chǔ)。方法:(1)荊芥揮發(fā)油提取與化學(xué)成分分析:依照2015版中國(guó)藥典第四部通則2204揮發(fā)油提取中甲法提取荊芥揮發(fā)油,采用GC-MS法進(jìn)行揮發(fā)油成分分析。(2)LPS造模最佳劑量和最佳指標(biāo)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)篩選:采用小鼠腹腔注射不同劑量LPS進(jìn)行造模,通過(guò)觀(guān)察小鼠造模后不同時(shí)間點(diǎn)小鼠的呼吸頻率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、肺指數(shù),及小鼠血清IL-1β含量和肺組織內(nèi)NLRP3蛋白表達(dá)的變化,確定最佳造模劑量及指標(biāo)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)。(3)藥物對(duì)LPS中毒模型小鼠的保護(hù)作用:(1)觀(guān)察藥物對(duì)模型小鼠白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)和血小板(PLT)計(jì)數(shù)、臟器指數(shù)及肺組織病理形態(tài)學(xué)的影響。(2)ELISA法及液相蛋白芯片技術(shù)測(cè)定血清中炎癥因子IL-18、IL-1β、IL-5、TNF-α、IFN-γ、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、巨噬細(xì)胞炎性蛋白(MIP-1β)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)及IL-10的水平。(3)Griess法測(cè)定肺組織中NO含量。(4)藥物對(duì)LPS中毒模型小鼠抗炎保護(hù)效應(yīng)的NLRP3炎癥小體信號(hào)通路機(jī)制研究:(1)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定肺組織中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p65、iNOS、IL-18、STAT1、IFN-α、IFN-βmRNA的表達(dá)。(2)免疫組化法檢測(cè)肺組織中P2X7R、組織蛋白酶B(Cathepsin-B)的表達(dá)。(3)Western blot法測(cè)定肺組織中NLRP3、ASC、Pro-caspase-1、Caspase-12、COP1、POP1、Caspase-1(p20)、pro-IL-1β蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)GC-MS檢測(cè)結(jié)果顯示,荊芥揮發(fā)油中薄荷酮、胡薄荷酮的相對(duì)含量分別為46.67%、33.92%,二者含量占總揮發(fā)油的80.59%。(2)LPS以15mg/kg劑量腹腔注射,造模后12 h可見(jiàn)小鼠呼吸頻率加快、血清IL-1β含量及全血白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)增加,小鼠肺指數(shù)、脾臟指數(shù)明顯升高,且肺組織內(nèi)NLRP3蛋白表達(dá)量明顯較其他時(shí)間點(diǎn)升高,以此劑量與時(shí)間作為造模條件。(3)荊芥揮發(fā)油與胡薄荷酮對(duì)模型小鼠全血WBC的顯著增加,PLT的顯著降低,脾臟指數(shù)、肺指數(shù)的顯著升高及胸腺指數(shù)的顯著降低,有一定作用趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。地塞米松能顯著降低模型小鼠的脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)。(4)荊芥揮發(fā)油能顯著降低模型小鼠血清IL-1β、IL-5、TNF-α、MCP-1、MIP-1β、M-CSF、IFN-γ水平,0.452g/kg荊芥揮發(fā)油亦能明顯降低小鼠血清IL-18、GM-CSF水平。胡薄荷酮能明顯降低模型小鼠血清IL-18、IL-1β、IL-5、MIP-1β、M-CSF水平,0.19g/kg胡薄荷酮亦可明顯降低小鼠血清TNF-α、MCP-1、GM-CSF水平。0.226g/kg荊芥揮發(fā)油與0.19g/kg胡薄荷酮明顯減少模型小鼠肺組織內(nèi)嗜中性粒細(xì)胞數(shù)目,減輕肺臟急性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。0.452g/kg荊芥揮發(fā)油與0.19g/kg胡薄荷酮能顯著降低模型小鼠肺組織內(nèi)NO水平。(5)荊芥揮發(fā)油和胡薄荷酮能明顯下調(diào)模型小鼠肺組織NLRP3、iNOS、p65、IL-1β、STAT1mRNA的表達(dá),荊芥揮發(fā)油亦能抑制IFN-β、IFN-αmRNA的表達(dá)。荊芥揮發(fā)油和胡薄荷酮均能下調(diào)模型小鼠肺組織CathepsinB、p20蛋白表達(dá),二者均能提高COP1蛋白表達(dá)水平,荊芥揮發(fā)油能抑制P2X7R、NLRP3蛋白表達(dá),胡薄荷酮能抑制pro-IL-1β蛋白表達(dá)。結(jié)論:荊芥揮發(fā)油與胡薄荷酮對(duì)LPS中毒模型小鼠表現(xiàn)出較好的抗炎保護(hù)作用,能抑制炎癥因子釋放,減輕炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。其抗炎作用機(jī)制與干預(yù)、調(diào)控NLRP3炎癥小體的激活有關(guān),胡薄荷酮為荊芥揮發(fā)油抗炎有效活性成分之一。
【圖文】：

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01圖 1 LPS 致內(nèi)毒素中毒小鼠造模后不同時(shí)間點(diǎn)肺組織 NLRP3 蛋白表達(dá)量變化（n=4）2.3 荊芥揮發(fā)油與胡薄荷酮對(duì)內(nèi)毒素中毒模型小鼠的保護(hù)作用2.3.1 小鼠內(nèi)毒素中毒模型的建立取健康 C57BL/6J 雄性小鼠，按體重分層隨機(jī)分為空白組、模型組、地塞米松（5 mg/kg）組，荊芥揮發(fā)油 0.226g/kg 、0.452g/kg 組，胡薄荷酮 0.095g/kg 、0.19g/kg 組。除地塞米松組外，其余給藥組小鼠按 0.2mL/10g 體積灌胃給藥，空白組與模型組給予等體積 0.35%吐溫-80 溶液，連續(xù)給藥 4 d，動(dòng)物禁食不禁水12 h，第 5 d(地塞米松組 ip 給藥）給藥后 30min ，小鼠腹腔注射 LPS(15mg/kg，，0.1mL/10g)造模，造模后 12 h 小鼠取血，3500rpm/min，離心 10min，分離血清，剖取小鼠肺組織，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。2.3.2 對(duì)模型小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血小板計(jì)數(shù)的影響

取小鼠全血 20μL 至裝有 2mL 稀釋液的 EP 管中，混勻，采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定白細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表 8 和圖 2。由表8和圖2可知，與空白組比較，模型組小鼠全血WBC顯著增加（P<0.05），血小板 PLT 顯著降低（P<0.05）。各藥物組對(duì) WBC、PLT 計(jì)數(shù)影響不明顯。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 崔雯雯;金鑫;張彥芬;常麗萍;王宏濤;;連花清瘟膠囊對(duì)脂多糖致急性肺損傷小鼠IKK/IκB/NF-κB信號(hào)通路的影響[J];中成藥;2015年05期

2 姚金福;樊湘澤;楊子堯;楊波;范曉清;;葛根芩連湯對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠的保護(hù)機(jī)制[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2015年07期

3 蔣辰雪;范欣生;馬春華;李蕓;陳菲;卞雅莉;;陷胸湯對(duì)內(nèi)毒素致小鼠急性肺損傷的影響[J];中國(guó)中藥雜志;2015年07期

4 黃磊;陳建榮;;中藥治療急性呼吸窘迫綜合征的臨床研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年03期

5 常秀娟;張帥;江益平;陳春苗;陳健;劉冰潔;周軍;李威;王振中;蕭偉;;從細(xì)胞因子風(fēng)暴探討熱毒寧注射液抗大鼠急性肺損傷作用機(jī)制[J];中草藥;2015年02期

6 劉榮榮;彭敏;馬宏博;;加味清營(yíng)顆粒對(duì)脂多糖誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷模型炎性因子的影響[J];中國(guó)中醫(yī)急癥;2014年11期

7 張?zhí)熘?楊世海;張景龍;;桑菊飲對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用[J];中藥藥理與臨床;2014年05期

8 阮瓊;張海英;楊?lèi)?ài)東;王利霞;吳中華;符勝光;龐慧芳;;宣肺通腑方對(duì)脂多糖致急性肺損傷大鼠肺組織髓樣分化蛋白-2、核因子-κB表達(dá)的影響[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2014年06期

9 喻良文;黃曉其;鐘燕珠;;銀翹散對(duì)LPS致急性肺損傷小鼠的保護(hù)作用[J];四川中醫(yī);2014年05期

10 王利霞;楊?lèi)?ài)東;蘇中昊;吳中華;付勝光;龐慧芳;;宣肺通腑方對(duì)內(nèi)毒素致急性肺損傷大鼠肺組織CD 14、MyD 88蛋白及其mRNA表達(dá)的影響[J];中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2013年12期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 張勇;褪黑素通過(guò)抑制NLRP3炎性小體減輕小鼠急性肺損傷[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 劉彥琴;加味桃仁承氣湯對(duì)內(nèi)毒素性大鼠DIC及肺損傷的研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2007年

3 張海英;sRAGE對(duì)脂多糖介導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的作用[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 蘇燕娟;涼膈散加減干預(yù)實(shí)證急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征的臨床觀(guān)察[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

2 胡孔友;涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用及其炎癥調(diào)控機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

3 楊旋;荊芥揮發(fā)油抗炎作用的機(jī)理研究Ⅱ[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2632556