【摘要】：目的:研究人工蟲草提取物和奧美沙坦對(前)腎素受體(PRR)表達(dá)的影響。方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠建立單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)模型,隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、奧美沙坦組、百令膠囊組、奧美沙坦+百令膠囊組,于造模后第3d、7d和14d進(jìn)行取材。采用PAS染色觀察腎組織損傷;Masson染色觀察腎組織纖維化程度;通過腎小管間質(zhì)評分系統(tǒng)對腎損傷進(jìn)行評分;分別提取腎組織總蛋白、胞膜蛋白和胞漿蛋白,用Western blot方法檢測PRR及P-p38MAPK蛋白的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)采用HEK-293細(xì)胞建立氧化應(yīng)激模型和AngII刺激的細(xì)胞模型。氧化應(yīng)激模型組分為:正常對照組、H_2O_2模型組、p38MAPK抑制劑(SB203580)組、人工蟲草提取物組、SB203580+人工蟲草提取物組;AngII模型組分組為:正常對照組、AngⅡ模型組、SB203580組、奧美沙坦組、SB203580+奧美沙坦組。通過CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞活性以篩選最佳刺激濃度,加藥刺激12h后收集細(xì)胞,分別提取這兩種細(xì)胞模型的總蛋白、胞膜蛋白和胞漿蛋白,用Western blot方法檢測PRR及P-p38MAPK等蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(P0.05提示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。結(jié)果:1.大鼠腎組織形態(tài)學(xué)結(jié)果(1)PAS染色結(jié)果顯示:造模第3天UUO大鼠腎組織可見腎小管輕度擴(kuò)張,間質(zhì)炎細(xì)胞少量浸潤;第7天UUO大鼠腎組織中可見腎小管明顯擴(kuò)張,上皮細(xì)胞變性壞死,間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤,腎間質(zhì)寬度增加;第14天UUO大鼠腎組織中可見腎小管進(jìn)一步擴(kuò)張,并出現(xiàn)腎小管萎縮、間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤及間質(zhì)寬度進(jìn)一步增加。(2)Masson染色結(jié)果顯示:造模第3天UUO大鼠腎組織中未見腎間質(zhì)膠原纖維;第7天UUO大鼠腎組織中可見少量腎間質(zhì)膠原纖維;第14天UUO大鼠腎組織中腎間質(zhì)膠原纖維進(jìn)一步增加。(3)腎小管間質(zhì)損傷評分結(jié)果顯示:造模時(shí)間越長,腎小管擴(kuò)張、炎細(xì)胞浸潤及間質(zhì)纖維化面積越大,腎小管損傷程度越重。造模第7天百令膠囊組、奧美沙坦組、百令膠囊+奧美沙坦組腎小管損傷評分均較模型組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);造模第14天,腎小管損傷較重,出現(xiàn)部分不可逆性小管間質(zhì)纖維化,各用藥組腎小管損傷評分較模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.Western blot結(jié)果(1)腎組織PRR蛋白的表達(dá)水平:造模第7天各組大鼠腎組織中總蛋白、膜蛋白PRR蛋白表達(dá)趨勢一致,模型組表達(dá)明顯高于假手術(shù)組(P0.05);奧美沙坦與百令膠囊兩種藥物均可減少UUO大鼠腎組織PRR蛋白的表達(dá),兩藥聯(lián)用時(shí)PRR蛋白表達(dá)最低,與模型組相較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各組大鼠腎組織胞漿蛋白中的PRR表達(dá)未見明顯差異(P0.05)。(2)腎組織P-p38MAPK蛋白的表達(dá)水平:造模第7天模型組與假手術(shù)組相比,P-p38MAPK蛋白表達(dá)量增高(P0.05),奧美沙坦和百令膠囊均可明顯降低P-p38MAPK蛋白表達(dá)量,兩種藥物聯(lián)合使用時(shí)P-p38MAPK蛋白表達(dá)量最低,與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)H_2O_2和AngII分別刺激HEK-293細(xì)胞12h,兩種細(xì)胞模型的總蛋白、膜蛋白PRR表達(dá)趨勢一致,H_2O_2模型組和AngII模型組PRR蛋白均較空白對照組增加(P0.05);SB203580組、人工蟲草提取物組、SB203580+人工蟲草提取物組PRR蛋白表達(dá)均低于H_2O_2模型組(P0.05);SB203580組、奧美沙坦組、SB203580+奧美沙坦組PRR蛋白表達(dá)低于AngII模型組(P0.05)。兩種細(xì)胞模型各組胞漿蛋白中的PRR表達(dá)未見明顯差異(P0.05)。各組P-p38MAPK蛋白與細(xì)胞總蛋白、膜蛋白中PRR的表達(dá)趨勢一致。結(jié)論:本研究表明,人工蟲草提取物和奧美沙坦可以通過抑制p38MAPK通路的激活,降低了PRR在腎小管上皮細(xì)胞胞膜的表達(dá),從而抑制腎內(nèi)RAS的活化,發(fā)揮保護(hù)腎小管作用。
【圖文】：

出現(xiàn)部分不可逆性小管間質(zhì)纖維化；奧美沙坦組、百令膠囊型組稍有減少；奧美沙坦+百令膠囊組腎間質(zhì)可見膠原纖維表達(dá)附錄 1，圖 6）組織腎小管間質(zhì)損傷評分鼠腎組織形態(tài)學(xué)改變對腎小管間質(zhì)損傷進(jìn)行評分，主要通過三管管型，小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞水腫、變性、壞死；②間質(zhì)纖維化的程度。每個(gè)參數(shù)按 0~3 分評定：0：正常；1：輕度；2：中度受損，病變范圍 15~50%；3：中度受損，病變范圍>5為每個(gè)樣品小管間質(zhì)的評分，介于 0~9 之間。

P<0.05 ；#，與模型組相比，，P<0.05； Δ，與奧美沙坦+百模第 7 天各組腎組織總蛋白、細(xì)胞漿蛋白、細(xì)胞膜蛋白各組腎組織總蛋白、細(xì)胞漿蛋白、細(xì)胞膜蛋白 P 7 天各組大鼠腎組織中總蛋白、膜蛋白 PRR 表達(dá)術(shù)組（P<0.05）；奧美沙坦與百令膠囊兩種藥物達(dá)，兩藥聯(lián)用時(shí) PRR 表達(dá)最低，與模型組相較大鼠腎組織胞漿蛋白中的 PRR 表達(dá)未見明顯差異測腎組織 P-p38MAPK 蛋白的表達(dá)水平（圖 3）手術(shù)組；UUO：模型組；UUO+Olm：奧美沙坦組；UUO+CS：UUO+Olm+CS：奧美沙坦+百令膠囊組
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2632529