【摘要】：墊狀卷柏是民間傳統(tǒng)用藥,現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明墊狀卷柏具有抗腫瘤、降血糖、抗菌抗病毒等多種藥理活性,15版《藥典》收載卷柏或墊狀卷柏為藥用品種。雙黃酮類化合物被認(rèn)為是卷柏屬植物的主要藥效成分,其中穗花杉雙黃酮為墊狀卷柏提取物中含量較高的雙黃酮,具有降血糖、抗氧化、抗炎等多種生物學(xué)活性作用。本課題將以穗花杉雙黃酮含量為考察指標(biāo),對提取方法、富集工藝進(jìn)行優(yōu)化,并對富集后的墊狀卷柏提取物進(jìn)行定性分析及活性評價(jià),同時(shí)構(gòu)建卷柏藥材指紋圖譜,主要內(nèi)容如下:(1)在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上以乙醇濃度、加醇倍量、提取時(shí)間、提取次數(shù)設(shè)計(jì)響應(yīng)面,優(yōu)化醇提工藝。得到最優(yōu)提取條件:乙醇濃度71%、提取時(shí)間60 min、提取次數(shù)3次、加醇倍量12倍,在此條件下,穗花杉雙黃酮提出量為17.28 mg/g。以穗花杉雙黃酮含量為主要指標(biāo),采用大孔樹脂和二次沉淀兩種簡單的方法富集墊狀卷柏粗提物,并優(yōu)化工藝參數(shù)。大孔樹脂最優(yōu)參數(shù):提取物濃度100 mg/mL,上樣流速1.0 mL/min,80%乙醇洗脫,洗脫流速1.0 mL/min,洗脫溶劑用量4倍柱體積,在此條件下提取物中穗花杉雙黃酮含量由原來的13.79%提高至52.46%;二次沉淀最優(yōu)參數(shù):乙醇濃度30%,水沉溫度5℃,攪拌速度400 rpm,加水速度3 mL/min,該條件下提取物中穗花杉雙黃酮含量提高至47.92%。大孔樹脂富集工藝更適用于墊狀卷柏提取物中穗花杉雙黃酮的富集。(2)利用HPLC-MS~n技術(shù)結(jié)合化合物碎片信息及文獻(xiàn)資料,對富集后墊狀卷柏提取物進(jìn)行定性鑒別,共鑒定27個(gè)化合物,其中13個(gè)黃酮類成分、10個(gè)炔酚類成分以及4個(gè)其他類型的化合物,為有效地闡明墊狀卷柏提取物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考價(jià)值。(3)對富集后的墊狀卷柏提取物進(jìn)行體外降糖活性和抗氧化活性試驗(yàn)。結(jié)果表明墊狀卷柏提取物對α-葡萄糖苷酶具有較好的抑制作用,其IC50值分別為0.1978 mg/mL(阿卡波糖的IC50值為2.6996mg/mL)。DPPH實(shí)驗(yàn)表明墊狀卷柏提取物是一種慢速抗氧化劑,其IC50為184.8μg/mL(VC的IC50值為12.84μg/mL)。(4)對14批卷柏屬藥材進(jìn)行含量測定并建立卷柏藥材指紋圖譜的共有模式,指定7個(gè)共有峰,其中卷柏藥材相似度均大于0.8,聚類分析和主成分分析均將樣品分為4類,其中2號峰(穗花杉雙黃酮)是卷柏藥材分類歸屬的關(guān)鍵成分,從產(chǎn)地分類歸屬看指紋圖譜技術(shù)結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)可為卷柏藥材的整體質(zhì)量評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。本課題對墊狀卷柏提取物做了較為系統(tǒng)的研究,為其在工業(yè)生產(chǎn)、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、藥品開發(fā)研究等方面提供一定的科學(xué)依據(jù)。
【圖文】：

配成 0.515 mg/mL 的對照品溶液，備用。2.2 供試品溶液的制備精密稱取經(jīng)粉碎過 3 號篩的墊狀卷柏藥材 2.0 g，加入無水乙醇溶液 25 m熱回流提取 60 min，過濾，取濾液定容至 100 mL 容量瓶中，0.45 μm 微孔過濾得供試品溶液，備用。2.3 液相檢測條件的建立檢測波長的選擇15 版《藥典》中穗花杉雙黃酮檢測波長為 330 nm，經(jīng) DAD 全波長掃描的紫外吸收光譜如圖 2-1 所示，穗花杉雙黃酮在 330 nm 處具有較強(qiáng)吸收，測波長選擇 330 nm。

以穗花杉雙黃酮的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2-3 所示。穗花杉雙黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：Y=5×107X+790122（R2=0.9935），其中 X 為穗花杉雙黃酮的濃度（單位：mg/mL），Y 為穗花杉雙黃酮峰面積，表明該回歸方程在穗花杉雙黃酮濃度為 0.0161-0.2575 mg/mL 范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。圖 2-3 穗花杉雙黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 2-3 The standard curve of amentoflavone2.2.5 精密度通過觀測標(biāo)準(zhǔn)品溶液的日內(nèi)精密度來測定該方法的精密度，溶液濃度選取線性范圍的中間濃度。日間精密度：一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣 6 次。考察指標(biāo)成分的保留時(shí)間和峰面積的 RSD 值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 2-2。
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭興,廖端芳,朱炳陽,庹勤慧,許云龍;墊狀卷柏化學(xué)成分研究[J];中草藥;2001年01期

2 郭建雄,顏興煥;卷柏和墊狀卷柏的鑒別[J];海峽藥學(xué);1999年04期

3 陳剛;徐漢成;劉端方;;卷柏的考證和調(diào)查[J];中藥材;1990年06期

4 金旭東;鐘佳美;盧軒;史麗穎;馮寶民;于大永;;兩種卷柏屬植物對人單核細(xì)胞白血病U937細(xì)胞的增殖和凋亡影響[J];中藥藥理與臨床;2018年05期

5 朱田密;陳科力;黎莉;范曉磊;;墊狀卷柏中雙黃酮抑制黃嘌呤氧化酶的活性研究[J];中藥藥理與臨床;2007年04期

6 晁志,程彰華,潘德濟(jì),戴克敏;卷柏的止血作用[J];中草藥;1997年06期

7 張紅偉;張琳;孫曉飛;田景奎;楊世林;;墊狀卷柏化學(xué)成分研究[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2008年06期

8 晁志,戴克敏;中藥卷柏的鑒別與商品調(diào)查[J];上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1997年02期

9 譚桂山,陳立章,徐康平,鄭其昌,徐智,黃朝輝,束儉輝,鄧濤;墊狀卷柏的化學(xué)成分研究[J];有機(jī)化學(xué);2004年09期

10 劉強(qiáng);朱雪梅;邵繼榮;楊占彪;楊遠(yuǎn)祥;;旱生復(fù)蘇植物墊狀卷柏對鉛的超富集特性研究[J];水土保持學(xué)報(bào);2015年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 肖新月;常崇艷;周固;陳曉端;林瑞超;;4種卷柏屬植物的電鏡X-射線微區(qū)分析[A];第二屆全國掃描電子顯微學(xué)會(huì)議論文集[C];2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 譚桂山;墊狀卷柏化學(xué)成分及Selaginellin抗衰老作用與機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 羅珊;墊狀卷柏提取物的制備工藝及物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];浙江工業(yè)大學(xué);2017年

2 仲崇府;墊狀卷柏（Selaginella pulvinata Maxim）對鉛鋅的富集特性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 謝寧;墊狀卷柏和翻白草化學(xué)成分研究[D];大連理工大學(xué);2015年

4 張紅偉;墊狀卷柏化學(xué)成分研究[D];蘇州大學(xué);2008年

5 郅妙利;三種中藥活性成分的提取、分離、純化和含量測定[D];河南大學(xué);2008年

6 李長喜;中藥卷柏中兩種特征性成分及其含量測定研究[D];中南大學(xué);2010年

7 范曉磊;翠云草生藥學(xué)研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2007年

本文編號：2628014