【摘要】：選題依據(jù):近年來,我國癌癥的發(fā)病率呈現(xiàn)不斷升高的趨勢,而目前治療該病的主要手段仍然是放化療法,但是放化療在治療癌癥的同時會引起帶來一系列的不良反應(yīng),其中以白細胞減少最為明顯。當外周血白細胞數(shù)目長時間低于4×10~9時稱為白細胞減少癥,其臨床表現(xiàn)主要為乏力、免疫力低下等,如果白細胞持續(xù)降低不僅會影響癌癥患者的持續(xù)治療,甚者會危及生命。臨床觀察已發(fā)現(xiàn)驢膠補血顆�？梢栽黾臃呕熁颊甙准毎麛�(shù)目的現(xiàn)象,但未對此進行深入的現(xiàn)代藥理及作用機制研究,其升高白細胞的主要活性成分、作用靶點以及代謝通路等并不清楚,限制了其用于白細胞減少癥治療的臨床應(yīng)用。因此,本課題采用環(huán)磷酰胺(CY)誘導(dǎo)白細胞減少癥構(gòu)建實驗動物模型,觀察驢膠補血顆粒的升白作用,并采用代謝組學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)等技術(shù)手段探討其升白的藥理作用機制。目的:明確驢膠補血顆粒對白細胞減少癥的改善作用,并篩選用于主要藥效學(xué)試驗的給藥劑量;探討與驢膠補血顆粒治療白細胞減少癥療效相關(guān)的差異代謝物及其關(guān)鍵通路;預(yù)測驢膠補血顆粒發(fā)揮升白作用的活性成分及其作用靶點,并探討其可能的作用機制。方法:首先采用環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)白細胞減少癥小/大鼠實驗動物模型,通過體重、血液學(xué)常規(guī)數(shù)據(jù)、骨髓DNA含量等指標明確驢膠補血顆粒的升白作用及最佳劑量。其次對小鼠血清進行~1H NMR代謝組學(xué)分析,通過化學(xué)成分指認、圖譜處理后將歸一化的數(shù)據(jù)導(dǎo)入到SIMCA-P 14.0軟件中進行多元統(tǒng)計分析,結(jié)合VIP值和t檢驗結(jié)果,尋找與驢膠補血顆粒干預(yù)作用相關(guān)的差異代謝產(chǎn)物,并將其導(dǎo)入MetPA在線分析系統(tǒng)進行關(guān)鍵代謝通路分析,闡釋其生物學(xué)意義。最后采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,初步篩選出與驢膠補血顆粒升白作用有關(guān)的活性成分及作用靶點,并對其進行生物學(xué)功能分析。結(jié)果:1.驢膠補血顆�？梢燥@著升高環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的白細胞減少癥小鼠模型的體重(P0.05),白細胞數(shù)目(P0.05),脾臟指數(shù)(P0.01),骨髓DNA含量(P0.05),且其用于主要藥效學(xué)的有效劑量為3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg,并以6 g/kg劑量作用最佳。但其對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的大鼠模型未表現(xiàn)出顯著改善效果,尚需進一步探究其原因。2.采用~1H NMR代謝組學(xué)分析方法對驢膠補血顆粒干預(yù)白細胞減少癥小鼠血清樣本進行分析,發(fā)現(xiàn)驢膠補血顆�？梢曰卣{(diào)環(huán)磷酰胺對小鼠血清代謝產(chǎn)物的干擾,并顯著(P0.01)提高血清中各類氨基酸的含量,通過調(diào)節(jié)絲氨酸,亮氨酸和異亮氨酸合成、谷氨酸鹽代謝、丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸鹽代謝、谷胱甘肽代謝以及精氨酸和脯氨酸代謝等過程發(fā)揮升白作用。3.根據(jù)藥物的OB,DL值篩選出32個潛在的化學(xué)成分,并結(jié)合相關(guān)文獻的活性研究,共篩選出49個潛在的驢膠補血顆�；钚猿煞�,采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,根據(jù)活性成分的作用靶點與白細胞減少癥疾病靶點的匹配,預(yù)測出89個驢膠補血顆粒發(fā)揮升白作用的潛在靶點,其中可能發(fā)揮主要作用的靶點為EFGR、IL4、ALB。潛在靶點主要參與了代謝相關(guān)通路、癌癥蛋白聚糖、調(diào)節(jié)肌動蛋白細胞骨架、PI3K-Akt、Rap1、趨化因子、MAPK等多條信號通路。4.將代謝組學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果進行整合分析,發(fā)現(xiàn)代謝通路中涉及的基因與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)潛在靶點基因有8個相同基因,由此以8個靶點基因為連接點,作為通路作用基因靶點,進一步構(gòu)建代謝物-代謝通路-作用靶點-活性成分網(wǎng)絡(luò)后,發(fā)現(xiàn)作用于通路作用基因靶點的升白活性成分有29種,主要涉及谷胱甘肽代謝、丙氨酸,精氨酸和谷氨酸代謝以及精氨酸和脯氨酸三條代謝途徑,并以谷胱甘肽代謝為主,可能通過調(diào)節(jié)GSS、GSTT1、GSTP1、GSTM1、G6PD、ASS1、NOS2、OAT等作用靶點基因的表達,增強氧化應(yīng)激能力,發(fā)揮升白作用。結(jié)論:驢膠補血顆�？梢燥@著改善環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的小鼠白細胞減少癥,升高其白細胞數(shù)目,主要藥效學(xué)的劑量應(yīng)設(shè)置為3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg,其中以6 g/kg劑量效果最佳。驢膠補血顆粒主要通過29種活性成分,調(diào)節(jié)谷胱甘肽代謝通路中相關(guān)基因(GSS、GSTT1、GSTP1、GSTM1、G6PD等),增強機體氧化應(yīng)激能力,發(fā)揮升白作用。
【圖文】：

括 7 種必需氨基酸，同時白術(shù)中還含有豐富的微量元素等[30]。吳翰桂[31]等以小家兔為實驗對象，發(fā)現(xiàn)白術(shù)可以升高血紅蛋白濃度，但其機制不清楚，同時白能具有防護紫外線損傷紅細胞的作用。邱世翠[32]等則觀察了白術(shù)對小鼠骨髓細殖和白細胞介素 1（IL-1）的影響，發(fā)現(xiàn)白術(shù)可以促進小鼠骨髓細胞的增殖反應(yīng)進 IL-1 的分泌。彭新國[33]等從免疫功能方面探討了白術(shù)的作用，發(fā)現(xiàn)與對照組，用藥組小鼠胸腺和 WBC 有顯著性差異。同時白術(shù)具有健脾益氣、調(diào)節(jié)胃腸運功能，以及抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗凝血、抗衰老、利尿、降血糖等功效。當歸的主要成分包括一些揮發(fā)油類、有機酸類、多糖、氨基酸、黃酮以及部量元素等[34]。揮發(fā)油類主要包括苯酞類及其二聚體類化合物，并以藁本內(nèi)脂的最為豐富[35]。有機酸類含有丁二酸、亞油酸、煙酸、阿魏酸等多種成分，并以酸為代表。當歸多糖類成分主要由 D-葡萄糖、甘露糖、鼠李糖等基本糖單位組雜多糖或均多糖等多種多糖成分組成。黃酮類成分主要包括查爾酮衍生物、木素-7-O 蘆丁糖苷等[36]。

主要藥效學(xué)實驗的低、中、高劑量范圍以及最佳劑量。3.1CY 致小鼠白細胞減少癥模型研究3.1.1 實驗流程圖 3.1 小鼠模型研究實驗流程圖3.1.2 材料與儀器注射用 CY（規(guī)格：0.2 g，廠家：江蘇盛迪醫(yī)藥有限公司，批號：15051325）；生理鹽水；0.5 EDTA-K2抗凝管；HEMAVET 950 動物血液分析儀（美國 MASCOT）；電子天平（型號：型號：BD202，廠家：METTLER TOLEDO）；健康雄性 ICR 小鼠，SPF 級，體重為 18～22 g，，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，實驗動物質(zhì)量檢驗合格證號 SCXK（京）2014-0001。3.1.3 實驗方法與檢測指標實驗方法：小鼠在室溫（24±1）℃、濕度（60±5）%及晝夜自然節(jié)律光照環(huán)境下適應(yīng) 1周后，隨機分為空白對照組（K），模型組（M）
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2626733