【摘要】：研究背景:前列腺癌是常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤,近年來我國前列腺癌發(fā)病率明顯升高。因前列腺癌發(fā)病隱匿,大部分病人發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)處于晚期,治療效果不理想,所以急需找到一種有效的藥物。中醫(yī)中藥對前列腺癌的認識和治療有獨到之處,中藥補骨脂素被發(fā)現(xiàn)可以抑制多種腫瘤細胞的增長,有望應用于治療前列腺癌。我們應用基因芯片技術對補骨脂素處理前后的PC3細胞進行l(wèi)ncRNA和mRNA表達譜進行分析,然后應用GO數(shù)據(jù)庫和KEGG數(shù)據(jù)庫對差異表達的lncRNA和mRNA進行分析,為闡明補骨脂素發(fā)揮抗腫瘤作用的分子機制奠定基礎。目的:1、明確補骨脂素對PC3細胞增殖的抑制作用。2、研究補骨脂素是否引起PC3細胞周期發(fā)生改變。3、應用基因芯片對補骨脂素處理前后的兩組PC3細胞進行對比,明確是否存在差異表達的基因。4、對差異表達的基因進行分析,初步明確補骨脂素發(fā)揮作用相關的信號通路和靶分子。5、對基因芯片的結果進行驗證,明確基因芯片結果的可信度。方法:1、CCK8檢測補骨脂素對PC3細胞增殖能力的影響。2、流式細胞術檢測PC3細胞周期的變化。3、基因芯片分析補骨脂素處理前后PC3細胞的lncRNA和mRNA表達譜的變化。4、對差異表達的lncRNA和mRNA進行生物信息學分析。5、應用RT-qPCR對基因芯片的結果進行驗證。結果:1、不同濃度的補骨脂素處理后,PC3細胞的增殖明顯受到不同程度的抑制。2、補骨脂素處理后的PC3細胞G0/G1期和G2/M期的細胞較對照組增多。3、基因芯片結果顯示:有差異表達(P0.05)的LncRNA有16426條。差異在2倍以上,p值0.05的lncRNA有4985條,其中顯著升高1716條,顯著降低3269條。差異在2倍以上,p值0.05的mRNA有4423條,其中顯著升高1160條,顯著降低3263條。4、對差異表達的基因進行分子生物學分析如下:GO分析結果表明,共計663條GO條目與本次實驗結果中的差異表達mRNA相關。對差異表達的mRNA進行KEGG pathway富集分析表明,顯著相關的通路有22條。應用GO數(shù)據(jù)庫對差異表達的lncRNA進行cis靶基因預測,共發(fā)現(xiàn)705條GO條目與本次實驗結果中的差異表達lncRNA相關,進行trans靶基因預測,共發(fā)現(xiàn)181條GO相關條目。應用KEGG數(shù)據(jù)庫對差異表達的lncRNA進行cis靶通路預測,發(fā)現(xiàn)18條通路與本次實驗結果中的差異表達lncRNA相關,進行trans靶通路預測,發(fā)現(xiàn)15條通路。5、基因芯片的RT-qPCR驗證結果與基因芯片結果一致。結論:1、補骨脂素可以顯著抑制PC3細胞的增殖,這種抑制作用呈現(xiàn)時間和濃度依賴性。2、補骨脂素可以通過引起PC3細胞G0/G1期和G2/M期阻滯的方式發(fā)揮抗腫瘤作用。3、lncRNA和mRNA在補骨脂素處理前后的PC3細胞組中存在差異。4、補骨脂素發(fā)揮作用的機制較為復雜,可能通過引起多基因、多通路的改變發(fā)揮作用。
【圖文】：

表 1 不同培養(yǎng)時間，不同濃度補骨脂素對 PC3 細胞生存率的影響（ x±s）用時間 實驗孔數(shù) 24h 48h 72h 96h F 值 P對照組 15 1±0 1±0 1±0 1±0 -- -0μg/ml 15 0.95±0.04 0.91±0.03 0.88±0.03 0.84±0.04 4.223 0.00μg/ml 15 0.90±0.07 0.79±0.04 0.71±0.06 0.69±0.11 5.404 0.00μg/ml 15 0.74±0.05 0.69±0.07 0.65±0.05 0.53±0.03 9.613 0.00μg/ml 15 0.64±0.06 0.56±0.06 0.50±0.04 0.47±0.07 4.907 0.0F 值 -- 19.053 25.084 31.651 18.263 -- -P -- 0.001 ＜0.001 ＜0.001 0.001 -- -

16圖 2 補骨脂素可導致 PC3 細胞發(fā)生 G0/G1 期和 G2/M 期阻滯 2 補骨脂素作用后 PC3 細胞發(fā)生 G1 期和 G2/M 期阻滯（ x±s）G1 期 S 期 G2 期空白對照組 44.6±2.83 51.76±2.21 3.64±1.513‰DMSO 組 45.14±3.95 50.99±3.47 3.87±1.5510μg/ml 組 47.97±2.63 46.74±2.4 5.29±1.5930μg/ml 組 49.84±4.63 41.95±6.7 8.21±2.550μg/ml 組 51.68±2.38 37.31±1.75 11.01±2.78100μg/ml 組 54.99±3.18 27.13±2.81 17.88±5.97F 值 4.375 20.042 8.672P 值 0.027 ＜0.001 0.003
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2625143