【摘要】：研究背景:前列腺癌是常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤,近年來我國前列腺癌發(fā)病率明顯升高。因前列腺癌發(fā)病隱匿,大部分病人發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)處于晚期,治療效果不理想,所以急需找到一種有效的藥物。中醫(yī)中藥對(duì)前列腺癌的認(rèn)識(shí)和治療有獨(dú)到之處,中藥補(bǔ)骨脂素被發(fā)現(xiàn)可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的增長,有望應(yīng)用于治療前列腺癌。我們應(yīng)用基因芯片技術(shù)對(duì)補(bǔ)骨脂素處理前后的PC3細(xì)胞進(jìn)行l(wèi)ncRNA和mRNA表達(dá)譜進(jìn)行分析,然后應(yīng)用GO數(shù)據(jù)庫和KEGG數(shù)據(jù)庫對(duì)差異表達(dá)的lncRNA和mRNA進(jìn)行分析,為闡明補(bǔ)骨脂素發(fā)揮抗腫瘤作用的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。目的:1、明確補(bǔ)骨脂素對(duì)PC3細(xì)胞增殖的抑制作用。2、研究補(bǔ)骨脂素是否引起PC3細(xì)胞周期發(fā)生改變。3、應(yīng)用基因芯片對(duì)補(bǔ)骨脂素處理前后的兩組PC3細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比,明確是否存在差異表達(dá)的基因。4、對(duì)差異表達(dá)的基因進(jìn)行分析,初步明確補(bǔ)骨脂素發(fā)揮作用相關(guān)的信號(hào)通路和靶分子。5、對(duì)基因芯片的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,明確基因芯片結(jié)果的可信度。方法:1、CCK8檢測(cè)補(bǔ)骨脂素對(duì)PC3細(xì)胞增殖能力的影響。2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PC3細(xì)胞周期的變化。3、基因芯片分析補(bǔ)骨脂素處理前后PC3細(xì)胞的lncRNA和mRNA表達(dá)譜的變化。4、對(duì)差異表達(dá)的lncRNA和mRNA進(jìn)行生物信息學(xué)分析。5、應(yīng)用RT-qPCR對(duì)基因芯片的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:1、不同濃度的補(bǔ)骨脂素處理后,PC3細(xì)胞的增殖明顯受到不同程度的抑制。2、補(bǔ)骨脂素處理后的PC3細(xì)胞G0/G1期和G2/M期的細(xì)胞較對(duì)照組增多。3、基因芯片結(jié)果顯示:有差異表達(dá)(P0.05)的LncRNA有16426條。差異在2倍以上,p值0.05的lncRNA有4985條,其中顯著升高1716條,顯著降低3269條。差異在2倍以上,p值0.05的mRNA有4423條,其中顯著升高1160條,顯著降低3263條。4、對(duì)差異表達(dá)的基因進(jìn)行分子生物學(xué)分析如下:GO分析結(jié)果表明,共計(jì)663條GO條目與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的差異表達(dá)mRNA相關(guān)。對(duì)差異表達(dá)的mRNA進(jìn)行KEGG pathway富集分析表明,顯著相關(guān)的通路有22條。應(yīng)用GO數(shù)據(jù)庫對(duì)差異表達(dá)的lncRNA進(jìn)行cis靶基因預(yù)測(cè),共發(fā)現(xiàn)705條GO條目與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的差異表達(dá)lncRNA相關(guān),進(jìn)行trans靶基因預(yù)測(cè),共發(fā)現(xiàn)181條GO相關(guān)條目。應(yīng)用KEGG數(shù)據(jù)庫對(duì)差異表達(dá)的lncRNA進(jìn)行cis靶通路預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)18條通路與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的差異表達(dá)lncRNA相關(guān),進(jìn)行trans靶通路預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)15條通路。5、基因芯片的RT-qPCR驗(yàn)證結(jié)果與基因芯片結(jié)果一致。結(jié)論:1、補(bǔ)骨脂素可以顯著抑制PC3細(xì)胞的增殖,這種抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間和濃度依賴性。2、補(bǔ)骨脂素可以通過引起PC3細(xì)胞G0/G1期和G2/M期阻滯的方式發(fā)揮抗腫瘤作用。3、lncRNA和mRNA在補(bǔ)骨脂素處理前后的PC3細(xì)胞組中存在差異。4、補(bǔ)骨脂素發(fā)揮作用的機(jī)制較為復(fù)雜,可能通過引起多基因、多通路的改變發(fā)揮作用。
【圖文】：

表 1 不同培養(yǎng)時(shí)間，不同濃度補(bǔ)骨脂素對(duì) PC3 細(xì)胞生存率的影響（ x±s）用時(shí)間 實(shí)驗(yàn)孔數(shù) 24h 48h 72h 96h F 值 P對(duì)照組 15 1±0 1±0 1±0 1±0 -- -0μg/ml 15 0.95±0.04 0.91±0.03 0.88±0.03 0.84±0.04 4.223 0.00μg/ml 15 0.90±0.07 0.79±0.04 0.71±0.06 0.69±0.11 5.404 0.00μg/ml 15 0.74±0.05 0.69±0.07 0.65±0.05 0.53±0.03 9.613 0.00μg/ml 15 0.64±0.06 0.56±0.06 0.50±0.04 0.47±0.07 4.907 0.0F 值 -- 19.053 25.084 31.651 18.263 -- -P -- 0.001 ＜0.001 ＜0.001 0.001 -- -

16圖 2 補(bǔ)骨脂素可導(dǎo)致 PC3 細(xì)胞發(fā)生 G0/G1 期和 G2/M 期阻滯 2 補(bǔ)骨脂素作用后 PC3 細(xì)胞發(fā)生 G1 期和 G2/M 期阻滯（ x±s）G1 期 S 期 G2 期空白對(duì)照組 44.6±2.83 51.76±2.21 3.64±1.513‰DMSO 組 45.14±3.95 50.99±3.47 3.87±1.5510μg/ml 組 47.97±2.63 46.74±2.4 5.29±1.5930μg/ml 組 49.84±4.63 41.95±6.7 8.21±2.550μg/ml 組 51.68±2.38 37.31±1.75 11.01±2.78100μg/ml 組 54.99±3.18 27.13±2.81 17.88±5.97F 值 4.375 20.042 8.672P 值 0.027 ＜0.001 0.003
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2625143