【摘要】：目的評(píng)估丹參酮ⅡA對(duì)大鼠胚胎心肌H9c2細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響,探討丹參酮ⅡA在心肌再生中的作用及其相關(guān)機(jī)制。方法1、用不同濃度的丹參酮ⅡA(0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、4、6、8、10、20 mg/L)處理H9c2細(xì)胞,4天后,MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,Western-blot法檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白(CDK4、CDK6、CyclinD1)、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原(Ki67、PCNA)以及凋亡調(diào)控蛋白(Cleaved Caspase-3)的表達(dá)情況,綜合上述指標(biāo)選擇合適濃度的丹參酮ⅡA用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2、用丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡA+β-catenin激動(dòng)劑WAY-262611處理H9c2細(xì)胞7天,對(duì)照組不加藥物,進(jìn)行以下相關(guān)檢測(cè)∶(1)Western-blot法檢測(cè)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白(GSK-3β、APC、β-catenin)和非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白(Wnt11、Wnt5a)的表達(dá)情況;(2)Western-blot法檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白(CDK4、CDK6、CyclinD1)和細(xì)胞增殖相關(guān)抗原(Ki67、PCNA)的表達(dá)情況;(3)免疫組化法及Western-blot法檢測(cè)心肌特征性蛋白心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和心肌肌鈣蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表達(dá)情況。結(jié)果1、當(dāng)?shù)⑼駻增大到0.4 mg/L時(shí),H9c2細(xì)胞的增殖速度明顯下降,至0.6 mg/L~2 mg/L時(shí),細(xì)胞增殖速度雖然減慢,但保持在一個(gè)增殖平臺(tái)期,選用此區(qū)間濃度中0.6 mg/L處理細(xì)胞,其細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白(CDK4、CDK6、CyclinD1)及細(xì)胞增殖相關(guān)抗原(Ki67、PCNA)的表達(dá)均明顯減少(P0.05),但凋亡調(diào)控蛋白(Cleaved Caspase-3)的表達(dá)沒(méi)有明顯變化(P0.05),鑒于增殖平臺(tái)期細(xì)胞增殖受到抑制但不伴隨凋亡的變化,我們選用此區(qū)間0.6 mg/L的丹參酮ⅡA用于本研究。2、與對(duì)照組相比,用丹參酮ⅡA處理的H9c2細(xì)胞中cTnI和cTnT的表達(dá)明顯增加(P0.05),經(jīng)典Wnt信號(hào)通路中GSK-3β和APC的表達(dá)明顯增加(P0.05),β-catenin表達(dá)明顯減少(P0.05),非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路中Wnt11和Wnt5a的表達(dá)均明顯增加(P0.05)。3、與丹參酮ⅡA處理組相比較,丹參酮ⅡA+β-catenin激動(dòng)劑WAY-262611處理組細(xì)胞中β-catenin表達(dá)明顯增加(P0.05),且CDK4、CDK6、CyclinD1、Ki67和PCNA表達(dá)明顯增加(P0.05),而cTnI和cTnT表達(dá)明顯減少(P0.05)。結(jié)論丹參酮ⅡA能夠促進(jìn)H9c2細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞,其機(jī)制與其能夠調(diào)控Wnt信號(hào)通路有關(guān);丹參酮ⅡA治療缺血性心臟病在一定程度上與其能夠促進(jìn)CPCs分化為心肌細(xì)胞再生心肌有關(guān)。
【圖文】：

14減少（P＜0.05）（見(jiàn)圖1Ba和Bb），但凋亡調(diào)控蛋白（Cleaved Caspase-3）表達(dá)沒(méi)有明顯變化（P＞0.05）（見(jiàn)圖1Bc）。以上結(jié)果提示，0.6 mg/L的丹參酮ⅡA處理的H9c2細(xì)胞增殖抑制不伴有凋亡的發(fā)生，因此，我們選用0.6 mg/L的丹參酮ⅡA用于本研究。圖 1 丹參酮ⅡA 對(duì) H9c2 細(xì)胞增殖率的影響注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05二、丹參酮ⅡA干預(yù)前后H9c2細(xì)胞心肌特征性蛋白cTnI和cTnT的表達(dá)情況如圖2A所示，免疫組化結(jié)果顯示：經(jīng)丹參酮ⅡA干預(yù)H9c2細(xì)胞后，心肌特征性蛋白cTnI和cTnT表達(dá)均明顯增加。此外，如圖2B所示

15圖2 丹參酮ⅡA干預(yù)前后H9c2細(xì)胞心肌特征性蛋白cTnI和cTnT的表達(dá)情況（放大倍數(shù)，×200）注：與對(duì)照組相比，，*P＜0.05三、丹參酮ⅡA干預(yù)前后H9c2細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況如圖3A所示，經(jīng)丹參酮ⅡA干預(yù)H9c2細(xì)胞后，經(jīng)典Wnt/β-catenin通路中的GSK-3β和APC表達(dá)明顯增加（P＜0.05），β-catenin的表達(dá)明顯減少（P＜0.05）；如圖3B所示，非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路中的Wnt11和Wnt5a表達(dá)明顯增加（P＜0.05）。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王衛(wèi)衛(wèi);胡福莉;;縫隙連接蛋白40與心房顫動(dòng)關(guān)系的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2014年21期

本文編號(hào)：2624230