【摘要】：目的評估丹參酮ⅡA對大鼠胚胎心肌H9c2細胞向心肌細胞分化的影響,探討丹參酮ⅡA在心肌再生中的作用及其相關機制。方法1、用不同濃度的丹參酮ⅡA(0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、4、6、8、10、20 mg/L)處理H9c2細胞,4天后,MTS法檢測細胞增殖情況,Western-blot法檢測細胞周期調(diào)節(jié)蛋白(CDK4、CDK6、CyclinD1)、細胞增殖相關抗原(Ki67、PCNA)以及凋亡調(diào)控蛋白(Cleaved Caspase-3)的表達情況,綜合上述指標選擇合適濃度的丹參酮ⅡA用于后續(xù)實驗。2、用丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡA+β-catenin激動劑WAY-262611處理H9c2細胞7天,對照組不加藥物,進行以下相關檢測∶(1)Western-blot法檢測經(jīng)典Wnt信號通路相關蛋白(GSK-3β、APC、β-catenin)和非經(jīng)典Wnt信號通路相關蛋白(Wnt11、Wnt5a)的表達情況;(2)Western-blot法檢測細胞周期調(diào)節(jié)蛋白(CDK4、CDK6、CyclinD1)和細胞增殖相關抗原(Ki67、PCNA)的表達情況;(3)免疫組化法及Western-blot法檢測心肌特征性蛋白心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和心肌肌鈣蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表達情況。結果1、當?shù)⑼駻增大到0.4 mg/L時,H9c2細胞的增殖速度明顯下降,至0.6 mg/L~2 mg/L時,細胞增殖速度雖然減慢,但保持在一個增殖平臺期,選用此區(qū)間濃度中0.6 mg/L處理細胞,其細胞周期調(diào)節(jié)蛋白(CDK4、CDK6、CyclinD1)及細胞增殖相關抗原(Ki67、PCNA)的表達均明顯減少(P0.05),但凋亡調(diào)控蛋白(Cleaved Caspase-3)的表達沒有明顯變化(P0.05),鑒于增殖平臺期細胞增殖受到抑制但不伴隨凋亡的變化,我們選用此區(qū)間0.6 mg/L的丹參酮ⅡA用于本研究。2、與對照組相比,用丹參酮ⅡA處理的H9c2細胞中cTnI和cTnT的表達明顯增加(P0.05),經(jīng)典Wnt信號通路中GSK-3β和APC的表達明顯增加(P0.05),β-catenin表達明顯減少(P0.05),非經(jīng)典Wnt信號通路中Wnt11和Wnt5a的表達均明顯增加(P0.05)。3、與丹參酮ⅡA處理組相比較,丹參酮ⅡA+β-catenin激動劑WAY-262611處理組細胞中β-catenin表達明顯增加(P0.05),且CDK4、CDK6、CyclinD1、Ki67和PCNA表達明顯增加(P0.05),而cTnI和cTnT表達明顯減少(P0.05)。結論丹參酮ⅡA能夠促進H9c2細胞分化為心肌細胞,其機制與其能夠調(diào)控Wnt信號通路有關;丹參酮ⅡA治療缺血性心臟病在一定程度上與其能夠促進CPCs分化為心肌細胞再生心肌有關。
【圖文】：

14減少（P＜0.05）（見圖1Ba和Bb），但凋亡調(diào)控蛋白（Cleaved Caspase-3）表達沒有明顯變化（P＞0.05）（見圖1Bc）。以上結果提示，0.6 mg/L的丹參酮ⅡA處理的H9c2細胞增殖抑制不伴有凋亡的發(fā)生，因此，我們選用0.6 mg/L的丹參酮ⅡA用于本研究。圖 1 丹參酮ⅡA 對 H9c2 細胞增殖率的影響注：與對照組相比，*P＜0.05二、丹參酮ⅡA干預前后H9c2細胞心肌特征性蛋白cTnI和cTnT的表達情況如圖2A所示，免疫組化結果顯示：經(jīng)丹參酮ⅡA干預H9c2細胞后，心肌特征性蛋白cTnI和cTnT表達均明顯增加。此外，如圖2B所示

15圖2 丹參酮ⅡA干預前后H9c2細胞心肌特征性蛋白cTnI和cTnT的表達情況（放大倍數(shù)，×200）注：與對照組相比，，*P＜0.05三、丹參酮ⅡA干預前后H9c2細胞中Wnt信號通路相關蛋白的表達情況如圖3A所示，經(jīng)丹參酮ⅡA干預H9c2細胞后，經(jīng)典Wnt/β-catenin通路中的GSK-3β和APC表達明顯增加（P＜0.05），β-catenin的表達明顯減少（P＜0.05）；如圖3B所示，非經(jīng)典Wnt信號通路中的Wnt11和Wnt5a表達明顯增加（P＜0.05）。
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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1 王衛(wèi)衛(wèi);胡福莉;;縫隙連接蛋白40與心房顫動關系的研究進展[J];醫(yī)學綜述;2014年21期

本文編號：2624230