【摘要】：流行性感冒(簡稱流感)的爆發(fā)流行已經(jīng)成為了對公共健康的嚴峻考驗,其頻繁變異引起的新突發(fā)人禽流感,更時常伴隨著較高的致病致死率,為人類社會帶來了沉重的負擔和危害。流感病毒感染宿主后,除了病毒的復制增殖會對機體組織帶來直接傷害,感染后往往會誘發(fā)過度的免疫炎癥反應,造成宿主機體的二次傷害,目前常用的抗流感抗炎治療藥物已經(jīng)面臨著耐藥率高、副作用大的困擾。在長期的臨床應用中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)中藥對流感起著良好的治療作用,目前從傳統(tǒng)中藥中發(fā)掘可行的新型抗病毒藥物已經(jīng)成為了當下重要的研究方向。傳統(tǒng)中藥臭靈丹,作為我國具有民族以及地方特色的民間常用中草藥,在既往的基礎或臨床研究中已被證實對時行感冒具有一定的防治作用,然而對于其中有效的活性成分尚未完全明確。在前期通過對其進行活性追蹤研究已發(fā)現(xiàn)臭靈丹中的總黃酮、倍半萜類等組分具有抑制流感病毒及其介導炎癥相關通路的激活。目的:1.通過體內(nèi)實驗明確臭靈丹總黃酮部位的抗流感和調(diào)節(jié)炎癥的效果,再逐一探索從臭靈丹總黃酮成分分離所得的單體化合物抗流感及其介導炎癥的藥效,通過研究臭靈丹黃酮類化合物對流感病毒感染宿主所引起的相關信號通路以及細胞因子、趨化因子變化的調(diào)節(jié)作用,探索臭靈丹黃酮類化合物治療流感的藥理機制。2.根據(jù)前期活性追蹤成果已證實臭靈丹倍半萜成分有著確切的抗流感效果,本研究希望通過其與不同化學藥物的聯(lián)合用藥進行抗病毒治療,尋找可以與其產(chǎn)生協(xié)同作用的化學藥物,為臭靈丹可以更精準服務于臨床治療展開了探索。方法:1.通過運用液相色譜法從臭靈丹總黃酮成分中分離出多個黃酮化合物單體并對其進行結(jié)構鑒定。2.進行體內(nèi)抗流感病毒及其介導炎癥的藥效實驗,明確總黃酮部位的抗流感抗炎效果,將總黃酮藥物,分高、低劑量組(200mg/kg·d、100mg/kg·d),和陽性藥物磷酸奧司他韋(60mg/kg·d)預防給藥1天后,繼續(xù)對流感感染小鼠給藥治療5天,分別觀察小鼠體重變化、死亡保護、肺病毒滴度、肺病理變化情況等指標明確總黃酮部位的體內(nèi)抗流感效果。3.對于分離所得黃酮類化合物,采用噻唑藍染色法(MTT法)、細胞病變抑制法(CPE,Cytopathic Effect)分別觀察各個化合物的細胞毒性以及體外對流感病毒的抑制作用。4.利用蛋白免疫印跡技術檢測黃酮化合物對流感病毒感染相關的宿主細胞信號通路影響,包括p38/MAPK,NF-κB,STAT-3等,以實時熒光定量PCR技術檢測各黃酮化合物對流感病毒誘導的細胞因子及趨化因子信使RNA表達水平的影響。5.通過聯(lián)合用藥的方法對已明確具有抗病毒藥效的臭靈丹倍半萜類成分進行應用探索,研究其聯(lián)合不同類型的抗病毒化學藥物在體外治療不同亞型的流感病毒所起的藥效作用。成果:1.從總黃酮中分離得到6個黃酮類單體化合物,并分別鑒定出其各自的結(jié)構分別為5,6-二羥基-3,7,4'-三甲氧基黃酮、蔓荊子黃素、5,4'-二羥基-6,7,-二甲氧基黃酮、5-羥基-3,6,7,3',4'-五甲氧基黃酮、5,4'-二羥基-3,6,7-三甲氧基黃酮以及5,4'-二羥基-3,5,7,4'-四甲氧基黃酮。2.臭靈丹總黃酮部位的體內(nèi)藥效結(jié)果:臭靈丹總黃酮對感染甲型流感病毒FM1株小鼠具有一定的炎癥調(diào)節(jié)作用,藥物組(200、100mg/kg·d))可有效降低流感病毒感染小鼠的肺指數(shù),與病毒組比較具有統(tǒng)計學差異;肺組織病理結(jié)果顯示臭靈丹總黃酮高劑量治療組(200mg/kg ·d)的肺組織病理炎癥性改變較病毒組有一定程度的減輕(P0.05),總黃酮治療組對流感病毒感染小鼠肺泡灌洗液中的IL-6、IP-10等炎癥因子也能起到調(diào)節(jié)作用,與病毒組比較具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。但臭靈丹總黃酮治療組并不能改善病毒感染引起的小鼠體重下降,對流感感染小鼠也沒有死亡保護作用,對肺病毒滴度測定提示該藥物無直接抑制流感病毒在小鼠體內(nèi)的復制X椫匙饔，

本文編號：2623076