發(fā)布時間：2020-04-10 10:41

【摘要】：目的:衰老是普遍且復(fù)雜的過程,為全身各器官、系統(tǒng)包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的進(jìn)行性退化,后者主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)、記憶功能及嗅、味等感覺功能的障礙,而嗅味覺異�？赡軐�(dǎo)致攝食行為及能量代謝的改變進(jìn)而進(jìn)一步影響認(rèn)知能力。因此,從嗅覺層面探討認(rèn)知的改變及其機(jī)制,有可能為代謝相關(guān)的認(rèn)知障礙研究提供新的視角�；鹇槿侍崛∫�(Extract of Fructus Cannabis,EFC)具有改善學(xué)習(xí)記憶的作用,但是其對嗅覺障礙的影響尚無報(bào)道。神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor,NGF)和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain derived growth factor,BDNF)是神經(jīng)營養(yǎng)素(Neurotrophins,NTs)家族的重要成員,具有保護(hù)神經(jīng)元,維持神經(jīng)元正常功能等作用。本研究旨在探討EFC對D-半乳糖(D-galactose,D-gal)致衰老SD大鼠嗅覺功能衰退的影響,并從NGF和BDNF層面初步探索其可能的機(jī)制。方法:1.動物及分組:將60只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組,每組10只。(1)對照組(Control),同時給予等體積0.9%Na Cl注射液(Normal saline,NS)腹腔注射和灌胃,每日1次,持續(xù)3個月;(2)D-gal模型組(D-galactose,D-gal),給予劑量為400mg/kg的D-gal溶液腹腔注射,同時給予等體積NS灌胃,每日1次,持續(xù)3個月;(3)低、中、高劑量EFC干預(yù)組(D-gal+EFC-L,D-gal+EFC-M,D-gal+EFC-H),給予劑量為400mg/kg的D-gal溶液腹腔注射,同時分別給予劑量為400mg/kg、800mg/kg及1200mg/kg的EFC灌胃每日1次,持續(xù)3個月。給藥時間固定為每天3:00p.m.至5:00p.m.。2.Morris水迷宮(Morris water maze,MWM)測試:從行為學(xué)方面評估大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能。3.嗅覺辨識記憶測試:從行為學(xué)方面評估大鼠的嗅覺辨識記憶功能。4.嗅球組織形態(tài)學(xué)檢測:蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)法檢測大鼠嗅球中僧帽細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。5.免疫印跡(Western blotting,WB)法:檢測大鼠嗅球NGF和BDNF的蛋白表達(dá)量。6.免疫組織化學(xué)(Immunohistochemical,IHC)染色法:檢測大鼠嗅球中僧帽細(xì)胞NGF和BDNF的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.在定向航行測試(Place navigation test,PNT)中,各實(shí)驗(yàn)組大鼠第1天測試時的逃避潛伏期沒有明顯差異。從第2天到第5天,D-gal模型組的逃避潛伏期與正常對照組相比明顯延長(P0.05)。除1200mg/kg EFC干預(yù)組外,400mg/kg和800mg/kg EFC干預(yù)組的逃避潛伏期均較D-gal模型組明顯縮短(P0.05)。第5天測試時,D-gal模型組大鼠的游泳軌跡與正常對照組相比均雜亂且無規(guī)律,隨機(jī)分布于各個象限。除1200mg/kg EFC干預(yù)組外,400mg/kg和800mg/kg EFC干預(yù)組大鼠的游泳軌跡較D-gal模型組有明顯改善。2.在空間探索測試(Spatial probe test,SPT)中,D-gal模型組大鼠穿越隱匿平臺位置的次數(shù)較正常對照組明顯減少(P0.05)。除1200mg/kg EFC干預(yù)組外,400mg/kg和800mg/kg EFC干預(yù)組大鼠穿越隱匿平臺位置的次數(shù)較D-gal模型組明顯增加(P0.05)。3.在嗅覺辨識記憶測試中,D-gal模型組大鼠的潛伏期較正常對照組明顯延長,成功次數(shù)明顯降低(P0.05)。除1200mg/kg EFC干預(yù)組外,400mg/kg和800mg/kg EFC干預(yù)組大鼠的潛伏期較D-gal模型組明顯縮短(P0.05),成功次數(shù)明顯增加(P0.05)。4.HE染色結(jié)果表明,與正常對照組相比,D-gal模型組大鼠嗅球中的僧帽細(xì)胞變形、萎縮且數(shù)量減少(P0.05)。與D-gal模型組相比,除1200mg/kg EFC干預(yù)組外,400mg/kg和800mg/kg EFC干預(yù)組大鼠的嗅球組織中僧帽細(xì)胞的形態(tài)正常且數(shù)量明顯增加(P0.05)。5.WB檢測結(jié)果顯示,D-gal模型組NGF和BDNF的蛋白表達(dá)量明顯較正常對照組低(P0.05)。除1200mg/kg EFC干預(yù)組外,400mg/kg和800mg/kg EFC干預(yù)組大鼠嗅球組織中NGF和BDNF的蛋白表達(dá)水平均比D-gal模型組明顯增高(P0.05)。6.IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,NGF和BDNF的蛋白表達(dá)量在D-gal模型組大鼠的僧帽細(xì)胞中較正常對照組明顯降低(P0.05)。除1200mg/kg EFC干預(yù)組外,400mg/kg和800mg/kg EFC干預(yù)組大鼠僧帽細(xì)胞中NGF和BDNF的表達(dá)量較D-gal模型組明顯升高(P0.05)。結(jié)論:1.中、低劑量EFC可以改善D-gal誘導(dǎo)衰老SD大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力衰退。高劑量EFC對其改善效果不明顯。2.中、低劑量EFC可以改善D-gal誘導(dǎo)衰老SD大鼠的嗅覺辨識記憶能力衰退。高劑量EFC對其改善效果不明顯。3.中、低劑量EFC可能是通過上調(diào)嗅球組織中僧帽細(xì)胞NGF和BDNF的蛋白表達(dá)水平,從而保護(hù)神經(jīng)元,改善衰老大鼠的嗅覺辨識記憶能力衰退。
【圖文】：

本研究的假說Fig.1.Hypothesisofthecurrentstudy

is 水迷宮測試 測試是一種國內(nèi)外公認(rèn)的評估嚙齒類動物空間學(xué)習(xí)和驗(yàn)方法，因多數(shù)研究中都采用了此實(shí)驗(yàn)方法，故該實(shí)[39-41]。在造模階段結(jié)束后，我們用 MWM 測試方法學(xué)習(xí)和記憶能力減退的程度。為了減少生理和晝夜節(jié)的影響，我們將實(shí)驗(yàn)時間固定在上午 8:30 至下午 1少實(shí)驗(yàn)時大鼠的應(yīng)激反應(yīng)，，在正式 MWM 測試開始大鼠進(jìn)行為期 1 天的 MWM 預(yù)實(shí)驗(yàn)，每只大鼠游泳M 測試軟件由行為學(xué)檢測系統(tǒng)、圖像自動追蹤處理系三部分組成，其外觀如圖 2 所示：
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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