【摘要】：肥胖在發(fā)達國家是一個主要的健康問題,近一些年來,肥胖在發(fā)展中國家和不發(fā)達的國家中也日益成為危害健康的一個危險因素。肥胖會導(dǎo)致心血管疾病、胰島素抵抗和糖尿病等肥胖相關(guān)性疾病的發(fā)生和發(fā)展,另外,肥胖被報道和某些癌癥的發(fā)生相關(guān)。因此,抗肥胖的研究變得十分重要。陳皮活性成分川陳皮素和橙皮苷常被用于抗腫瘤、抗炎和抗高血壓的研究。近年來,它們也被用于抗胰島素抵抗和抗脂肪積累的研究。為了驗證川陳皮素和橙皮苷的抗肥胖潛力,本文將對兩者在3T3-L1細(xì)胞和線蟲模型上的抗脂肪積累的功效和機制開展研究,得到的研究結(jié)果如下:(1)川陳皮素單獨作用于3T3-L1細(xì)胞時,油紅O染色結(jié)果和脂肪抽提定量實驗顯示3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量與對照組相比升高了,實時定量PCR顯示3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的脂肪生成基因CEBP表達與對照組相比上調(diào)了,暗示川陳皮素在3T3-L1細(xì)胞內(nèi)通過促進脂肪生成基因的表達來促進脂肪生成。(2)應(yīng)用PI3K/Akt特異性阻斷劑LY294002阻斷3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的Akt信號后,油紅O染色結(jié)果和脂肪抽提定量實驗顯示川陳皮素的升高細(xì)胞內(nèi)脂肪含量的作用被抑制,實時定量PCR和western blot實驗提示川陳皮素通過PI3K/Akt信號途徑促進3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的脂肪積累。(3)在“雞尾酒”誘導(dǎo)劑培養(yǎng)基中,川陳皮素抑制3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的脂肪積累。這種抑制作用得到了脂肪抽提定量實驗結(jié)果和實時定量PCR結(jié)果的支持。進一步的誘導(dǎo)劑成分的組合實驗證明,川陳皮素只能通過和含有IBMX和DEX或胰島素的誘導(dǎo)劑成分組合來抑制3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的脂肪積累,然而,隨后的阻斷IBMX通路的實驗暗示川陳皮素不通過cAMP減少3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的脂肪生成。(4)應(yīng)用AMPK特異性阻斷劑Compound C阻斷3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的AMPK后,脂肪抽提定量實驗和實時定量PCR結(jié)果顯示川陳皮素恢復(fù)了細(xì)胞內(nèi)脂肪積累的作用。進一步地,western blot實驗揭示3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的PI3K/Akt信號減弱和AMPK活化相關(guān),提示川陳皮素可能通過活化AMPK而致PI3K/Akt信號抑制導(dǎo)致3T3-L1細(xì)胞內(nèi)的脂肪生成減少。(5)橙皮苷被首次發(fā)現(xiàn)可抑制線蟲的脂肪積累,這種抑制作用可能是通過下調(diào)硬脂酰輔酶A脫羧酶FAT-6和FAT-7基因表達來實現(xiàn)的。上述的實驗結(jié)果首先促成本實驗提出了一個川陳皮素調(diào)節(jié)3T3-L1細(xì)胞內(nèi)脂肪生成的信號途徑模型,即:川陳皮素通過PI3K/Akt信號途徑調(diào)節(jié)3T3-L1細(xì)胞內(nèi)脂肪生成。該信號模型的建立不僅增加了有關(guān)川陳皮素的脂肪生成調(diào)節(jié)作用的理解,而且還為未來的抗脂肪積累研究提供了理論上的新思路。另外,橙皮苷被發(fā)現(xiàn)可減少線蟲體內(nèi)的脂肪生成,FAT-6和FAT-7基因可能在橙皮苷的抑制脂肪生成作用中扮演重要的角色。
【圖文】：

細(xì)胞具有白色脂肪細(xì)胞的特點：大的脂滴和由于被脂滴擠壓而導(dǎo)致的偏也的細(xì)胞核逡逑ＵＷｌ，本研究所拍的圖片也證實了上述特點（見圖１．７）。逡逑當(dāng)３Ｔ３－Ｌ１細(xì)胞被單層貼壁培養(yǎng)或者用甲基纖維素穩(wěn)定在培養(yǎng)皿表面懸浮培養(yǎng)逡逑時，隨著細(xì)胞進入到靜止?fàn)顟B(tài)，細(xì)胞開始在胞漿里積累脂肪而成為脂肪細(xì)胞，未積逡逑累脂肪的成纖維細(xì)胞又叫前脂肪細(xì)胞。這些自然的脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)換的效率是不高的，逡逑為了獲得高效的脂肪轉(zhuǎn)換，在細(xì)胞培養(yǎng)基里添加高濃度的血清（２０－３０％）是最初的逡逑方法，在這種培養(yǎng)條件下得到的脂肪細(xì)胞具備上述的白色脂肪細(xì)胞的特點，另外，逡逑還可在細(xì)胞培養(yǎng)皿的表面看到合成的膠原，很難確定送些膠原是否為分化的細(xì)胞逡逑所合成的，因為在培養(yǎng)皿里仍舊存在著一些貼壁的未分化細(xì)胞，這些細(xì)胞具有合成逡逑

組合被拆分為各組分單獨或兩兩配伍，其中每一種誘導(dǎo)方式都聯(lián)合ＮＯＢ。３Ｔ３－Ｌ１細(xì)逡逑胞在這些不同的細(xì)胞培養(yǎng)成分條件下被誘導(dǎo)培養(yǎng)２天后，胞漿內(nèi)的脂肪被提取并定逡逑量。結(jié)果顯示（見圖３．４邋Ａ－Ｆ）：相比空白對照組，舊ＭＸ聯(lián)合ＤＥＸ，膜島素聯(lián)合舊ＭＸ逡逑和膜島素聯(lián)合ＤＥＸ均提升了脂肪的積累（ｐ＜０．０５），，說明這些組合方式都具有促進逡逑３Ｔ３－Ｌ１細(xì)胞分化的作用，和已經(jīng)報道的結(jié)果相符；更重要的是，在上述Ｈ種兩兩組逡逑合方式中，只在含有舊ＭＸ的組合ａＳＭＸ＋ＤＥＸ和舊ＭＸ＋ｉｎｓｕｌｉｎ）中，相應(yīng)的ＮＯＢ逡逑處理組（５０＾ｌＭ）顯著下調(diào)了脂肪含量（ｐ＜０．０５），提示ＮＯＢ和曲ＭＸ的聯(lián)合可能導(dǎo)逡逑致了細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量減少。然而，有趣的是，ＮＯＢ和單獨的Ｈ種誘導(dǎo)劑成分姐合逡逑培養(yǎng)３Ｔ３－Ｌ１細(xì)胞，相比各自的對照組，ＮＯＢ都上調(diào)了細(xì)胞漿里的脂肪含量（ｐ＜０．０５），逡逑提示ＮＯＢ可能不通過舊ＭＸ的信號通路降低脂肪細(xì)胞的脂肪含量。逡逑為了進一步驗證舊ＭＸ的信號是否參與了邋ＮＯＢ的下調(diào)脂肪生成作用，舊ＭＸ信逡逑號的選擇性阻斷實驗被采用。己經(jīng)知道舊ＭＸ能夠提高細(xì)跑內(nèi)的ＣＡＭＰ水平
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Inhibition of growth and metastasis of human gastric cancer implanted in nude mice by d-limonene[J];World Journal of Gastroenterology;2004年14期

本文編號：2621142