【摘要】：[目的]茶樹油是從茶樹中提取的天然混合物,具有抗細菌、抗真菌、抗病毒、抗過敏、增強免疫力等作用。近年來報道茶樹油對多種腫瘤細胞的生長具有抑制作用,但其抗黑色素瘤作用及機制尚需進一步研究。本文從體外細胞培養(yǎng)和體內(nèi)動物實驗兩個方面考察茶樹油提取物不同配方抗B16F10黑色素瘤的活性,篩選出較優(yōu)配方并初步研究其抗黑色素瘤作用機制,研究結(jié)果可為茶樹油提取物抗腫瘤作用提供依據(jù)。[方法]體外細胞實驗中,茶樹油提取物6個配方分別以0.0125%、0.025%、0.05%、0.1%的濃度作用于B16F10黑色素瘤細胞,MTT法檢測細胞活力。以對細胞活力的抑制作用篩選出較優(yōu)配方;流式細胞術(shù)分析配方5對B16F10黑色素瘤細胞周期分布和凋亡的影響;Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9表達。體內(nèi)動物實驗中,C57BL/6小鼠腋下皮下注射B16F10黑色素瘤細胞建立腫瘤模型,配方5或環(huán)磷酰胺瘤內(nèi)注射,連續(xù)7天,PBS作為模型對照。稱量小鼠體重、測量腫瘤長、短徑計算腫瘤體積。試驗結(jié)束時剝離腫瘤并稱重;對腫瘤組織進行HE染色分析,Western blot和免疫組化分析腫瘤組織中凋亡蛋白cleaved caspase-3和/或cleaved caspase-9的表達。[結(jié)果]MTT檢測結(jié)果表明不同配方茶樹油在試驗濃度范圍內(nèi),均能有效抑制B16F10黑色素瘤細胞的生長,且有較明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。0.025%濃度時,6個配方對細胞的抑制率約為30%～75%;配方5在0.0125%～0.05%濃度范圍,細胞活力降低近60%。配方5對B16F10黑色素瘤細胞活力抑制效果最好、配方2次之、配方4優(yōu)于其他3個配方。流式細胞術(shù)和Western blot結(jié)果表明,配方5可明顯引起腫瘤細胞周期阻滯、促進凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表達。小鼠移植瘤實驗中,配方5和環(huán)磷酰胺處理組移植瘤的體積和重量顯著小于PBS對照組,配方5能夠抑制移植瘤生長。HE染色表明配方5和環(huán)磷酰胺處理組腫瘤細胞生長相對稀疏、核不規(guī)則;Western blot和免疫組化分析顯示其瘤組織中cleaved caspase-3和/或cleaved caspase-9表達量顯著增加。[結(jié)論]茶樹油提取物在體內(nèi)外均能有效抑制B16F10黑色素瘤細胞及其移植瘤的生長,其作用機制與通過線粒體途徑誘導(dǎo)凋亡有關(guān)。
【圖文】：

２．結(jié)果逡逑２．１不同配方茶樹油提取物對Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細胞生長的影響逡逑ＭＴＴ法測定不同配方茶樹油提取物處理后，Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細胞活力如圖１－１所示，逡逑加入０．１％的ＤＭＳＯ溶劑組與加入完全培養(yǎng)液的正常對照０Ｄ值沒有顯著性差異，表明用逡逑于藥物稀釋濃度的ＤＭＳＯ對Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細胞無明顯毒性。各配方對細胞的毒性呈劑逡逑

逡逑由圖１－１可知，配方２、５在０．０１２５％？０．０５％濃度時均優(yōu)于剩余配方。為了篩選出最逡逑佳配方，將配方２、５在０．０２５％和０．０５％濃度下的Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細胞的相對活力做差異逡逑顯著性分析。結(jié)果如表１－１所示，在表中濃度下都有不同程度的顯著差異，，配方５幾乎在逡逑兩個濃度下與其余配方都有顯著性差異。配方２在０．０２５％、０．０５％濃度下與配方４和５都逡逑有顯著性差異，而配方５在０．０２５％和０．０５％濃度下與配方１？３都有顯著差異，在０．０１２５％逡逑濃度時與配方６有極顯著差異。茶樹油提取物不同配方對Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細胞活力的抑逡逑制順序為：配方５＞配方２＞配方４處＞配方６＞配方１＞配方３。因此，后續(xù)實驗采用配逡逑方５進行。逡逑２．２茶樹油提取物對Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細胞周期的影響逡逑Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細胞經(jīng)過０、０．００６２５％、０．０１２５％、０．０２５％、０．０５％茶樹油提取物孵逡逑育２４ｈ后，用流式細胞儀檢測Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細胞經(jīng)茶樹油提取物作用后的細胞周期狀逡逑況，結(jié)果如圖１－２所示。逡逑由圖１－２中數(shù)據(jù)可知，茶樹油提取物對瘤細胞的作用隨著濃度的變化使其被阻滯在不逡逑同的細胞周期
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2620495