發(fā)布時(shí)間：2020-04-09 07:48

【摘要】：[目的]茶樹油是從茶樹中提取的天然混合物,具有抗細(xì)菌、抗真菌、抗病毒、抗過敏、增強(qiáng)免疫力等作用。近年來報(bào)道茶樹油對多種腫瘤細(xì)胞的生長具有抑制作用,但其抗黑色素瘤作用及機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。本文從體外細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩個(gè)方面考察茶樹油提取物不同配方抗B16F10黑色素瘤的活性,篩選出較優(yōu)配方并初步研究其抗黑色素瘤作用機(jī)制,研究結(jié)果可為茶樹油提取物抗腫瘤作用提供依據(jù)。[方法]體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,茶樹油提取物6個(gè)配方分別以0.0125%、0.025%、0.05%、0.1%的濃度作用于B16F10黑色素瘤細(xì)胞,MTT法檢測細(xì)胞活力。以對細(xì)胞活力的抑制作用篩選出較優(yōu)配方;流式細(xì)胞術(shù)分析配方5對B16F10黑色素瘤細(xì)胞周期分布和凋亡的影響;Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9表達(dá)。體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,C57BL/6小鼠腋下皮下注射B16F10黑色素瘤細(xì)胞建立腫瘤模型,配方5或環(huán)磷酰胺瘤內(nèi)注射,連續(xù)7天,PBS作為模型對照。稱量小鼠體重、測量腫瘤長、短徑計(jì)算腫瘤體積。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)剝離腫瘤并稱重;對腫瘤組織進(jìn)行HE染色分析,Western blot和免疫組化分析腫瘤組織中凋亡蛋白cleaved caspase-3和/或cleaved caspase-9的表達(dá)。[結(jié)果]MTT檢測結(jié)果表明不同配方茶樹油在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi),均能有效抑制B16F10黑色素瘤細(xì)胞的生長,且有較明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。0.025%濃度時(shí),6個(gè)配方對細(xì)胞的抑制率約為30%～75%;配方5在0.0125%～0.05%濃度范圍,細(xì)胞活力降低近60%。配方5對B16F10黑色素瘤細(xì)胞活力抑制效果最好、配方2次之、配方4優(yōu)于其他3個(gè)配方。流式細(xì)胞術(shù)和Western blot結(jié)果表明,配方5可明顯引起腫瘤細(xì)胞周期阻滯、促進(jìn)凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表達(dá)。小鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)中,配方5和環(huán)磷酰胺處理組移植瘤的體積和重量顯著小于PBS對照組,配方5能夠抑制移植瘤生長。HE染色表明配方5和環(huán)磷酰胺處理組腫瘤細(xì)胞生長相對稀疏、核不規(guī)則;Western blot和免疫組化分析顯示其瘤組織中cleaved caspase-3和/或cleaved caspase-9表達(dá)量顯著增加。[結(jié)論]茶樹油提取物在體內(nèi)外均能有效抑制B16F10黑色素瘤細(xì)胞及其移植瘤的生長,其作用機(jī)制與通過線粒體途徑誘導(dǎo)凋亡有關(guān)。
【圖文】：

２．結(jié)果逡逑２．１不同配方茶樹油提取物對Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細(xì)胞生長的影響逡逑ＭＴＴ法測定不同配方茶樹油提取物處理后，Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細(xì)胞活力如圖１－１所示，逡逑加入０．１％的ＤＭＳＯ溶劑組與加入完全培養(yǎng)液的正常對照０Ｄ值沒有顯著性差異，表明用逡逑于藥物稀釋濃度的ＤＭＳＯ對Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細(xì)胞無明顯毒性。各配方對細(xì)胞的毒性呈劑逡逑

逡逑由圖１－１可知，配方２、５在０．０１２５％？０．０５％濃度時(shí)均優(yōu)于剩余配方。為了篩選出最逡逑佳配方，將配方２、５在０．０２５％和０．０５％濃度下的Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細(xì)胞的相對活力做差異逡逑顯著性分析。結(jié)果如表１－１所示，在表中濃度下都有不同程度的顯著差異，，配方５幾乎在逡逑兩個(gè)濃度下與其余配方都有顯著性差異。配方２在０．０２５％、０．０５％濃度下與配方４和５都逡逑有顯著性差異，而配方５在０．０２５％和０．０５％濃度下與配方１？３都有顯著差異，在０．０１２５％逡逑濃度時(shí)與配方６有極顯著差異。茶樹油提取物不同配方對Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細(xì)胞活力的抑逡逑制順序?yàn)椋号浞剑担九浞剑玻九浞剑刺帲九浞剑叮九浞剑保九浞剑�。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用配逡逑方５進(jìn)行。逡逑２．２茶樹油提取物對Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細(xì)胞周期的影響逡逑Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細(xì)胞經(jīng)過０、０．００６２５％、０．０１２５％、０．０２５％、０．０５％茶樹油提取物孵逡逑育２４ｈ后，用流式細(xì)胞儀檢測Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤細(xì)胞經(jīng)茶樹油提取物作用后的細(xì)胞周期狀逡逑況，結(jié)果如圖１－２所示。逡逑由圖１－２中數(shù)據(jù)可知，茶樹油提取物對瘤細(xì)胞的作用隨著濃度的變化使其被阻滯在不逡逑同的細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2620495