發(fā)布時間：2020-04-09 04:02

【摘要】：糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一種由遺傳、肥胖、免疫功能紊亂和環(huán)境等多種因素引起的以慢性高血糖為特征的代謝綜合癥。Ⅱ型糖尿病主要由胰島素分泌不足和胰島素抵抗(IR)所造成,其中胰島素抵抗是Ⅱ型糖尿病病發(fā)的主要因素,也是人們研究的主要方向。胰島素抵抗是指胰島素作用的靶器官對胰島素作用的敏感性下降,正常劑量的胰島素所產生的生物學效應低于正常生物學效應的一種狀態(tài)。因此胰島素抵抗會導致外周組織攝取葡萄糖的能力嚴重下降,使血糖升高。產生胰島素主要有肝細胞,脂肪細胞,骨骼肌細胞三種,臨床上,由于肝癌細胞(HepG2)來源于肝細胞株與肝細胞同源,有肝細胞的相似性易于培養(yǎng),因此胰島素抵抗研究常用HepG2細胞。緩解胰島素抵抗是Ⅱ型糖尿病研究的重點,因此臨床上亟需一種新型且毒副作用小的藥物。土荊皮是松科植物金錢松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥根皮或近根樹皮,其氣微、味辛、性溫溫和,具有殺蟲止癢的功效,常用于治療癬癥。土槿乙酸(Pseudolaric acid B,PAB)是從土荊皮中提取的二萜酸化合物,分子式C_(23)H_(28)0_8。本文考察了土槿乙酸抗糖尿病活性及緩解胰島素抵抗機制研究。1.利用高濃度的胰島素構建HepG2細胞胰島素抵抗模型,衣霉素(Tun)和寡霉素(Oli)分別誘導內質網應激和線粒體損傷模型。利用不同濃度的土槿乙酸(PAB)進行緩解胰島素抵抗糖代謝研究,采用ELISA實驗驗證土槿乙酸促進胰島素β細胞胰島素釋放的效果。2.土槿乙酸緩解HepG2細胞胰島素抵抗的機制研究。采用Western-Blotting方法從蛋白水平檢測不同濃度土槿乙酸作用IR-HepG2細胞,對HepG2細胞增值信號通路關鍵蛋白PPARγ、IRS-1、Akt、P-akt、Grp78等蛋白表達的影響。3.土槿乙酸抗糖尿病活性的研究。利用高糖高脂和STZ構建Ⅱ型糖尿病小鼠模型,小鼠腹腔注射不同濃度的PAB,檢測小鼠血糖、胰島素、膽固醇、甘油三酯等Ⅱ型糖尿病代謝指標。本文通過對土槿乙酸抗糖尿病活性及緩解胰島素抵抗機制研究得到如下結果。1.10μM胰島素作用HepG2細胞36小時為胰島素抵抗的最佳模型,10μM PAB能夠顯著緩解HepG2胰島素抵抗、內質網應激,線粒體損傷,增加葡萄糖的消耗。2.不同濃度PAB作用胰島素抵抗HepG2細胞24h后,隨著PAB濃度的增加,PPARγ表達上調,IRS-1表達上調,P-Akt上調,GRP-78表達下調。3.PAB可顯著降低糖尿病模型組小鼠血糖值,提高胰島素濃度,改善甘油三酯、總膽固醇等糖尿病代謝性問題,且隨著PAB濃度增高,顯著性增強,某些指標強于陽性藥羅格列酮。通過實驗得出以下結論:土槿乙酸可以緩解IR-HepG2細胞。土槿乙酸通過影響PPARγ、IRS-1作用到胰島素受體緩解IR-HepG2細胞。土槿乙酸可以抗Ⅱ型糖尿病活性通過緩解胰島素抵抗。上述研究為廣泛篩選抗糖尿病藥物提供了新的思路。
【圖文】：

型的PPARγ激動劑羅格列酮治療2型糖尿病的主要方式之一，這恰恰為土槿乙酸作為新型的抗Ⅱ型糖尿病提供了理論依據。圖0-1 土槿乙酸結構式0.4 本課題的設計思想及研究內容1.查閱文獻得出，大部分的研究者只是利用單一因素構建胰島素抵抗模型并驗證其緩解機制。本實驗利用高濃度的胰島素構建HepG2細胞胰島素抵抗模型，衣霉素（Tun）和寡霉素（Oli）分別誘導內質網應激和線粒體損傷模型。利用不同濃度的土槿乙酸（PAB）進行緩解胰島素抵抗糖代謝研究，采用ELISA實驗驗證土槿乙酸促進胰島素β細胞胰島素釋放的效果。從而得到了內質網應激，線粒體損傷與胰島素抵抗之間相互聯(lián)系。2.大量文獻表明，，臨床上常用的抗胰島素抵抗類藥物都是通過PPARγ這一機

章 土槿乙酸緩解肝癌細胞（HepG2）胰島素抵抗的研究12圖1-1 不同濃度、不同作用時間胰島素對肝癌細胞HepG2降糖量A：PAB 24h B：PAB 36hC：PAB 48h D：PAB 60h###p<0.001 as compared with the control group,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001 as compared with only IR groups.MTT實驗顯示，0-50μM胰島素作用HepG2細胞60h小時后，HepG2細胞存活率無顯著性變化，細胞正常存活。（圖1-2）
【學位授予單位】：遼寧大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2620265