【摘要】：糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一種由遺傳、肥胖、免疫功能紊亂和環(huán)境等多種因素引起的以慢性高血糖為特征的代謝綜合癥。Ⅱ型糖尿病主要由胰島素分泌不足和胰島素抵抗(IR)所造成,其中胰島素抵抗是Ⅱ型糖尿病病發(fā)的主要因素,也是人們研究的主要方向。胰島素抵抗是指胰島素作用的靶器官對(duì)胰島素作用的敏感性下降,正常劑量的胰島素所產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)低于正常生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)。因此胰島素抵抗會(huì)導(dǎo)致外周組織攝取葡萄糖的能力嚴(yán)重下降,使血糖升高。產(chǎn)生胰島素主要有肝細(xì)胞,脂肪細(xì)胞,骨骼肌細(xì)胞三種,臨床上,由于肝癌細(xì)胞(HepG2)來源于肝細(xì)胞株與肝細(xì)胞同源,有肝細(xì)胞的相似性易于培養(yǎng),因此胰島素抵抗研究常用HepG2細(xì)胞。緩解胰島素抵抗是Ⅱ型糖尿病研究的重點(diǎn),因此臨床上亟需一種新型且毒副作用小的藥物。土荊皮是松科植物金錢松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥根皮或近根樹皮,其氣微、味辛、性溫溫和,具有殺蟲止癢的功效,常用于治療癬癥。土槿乙酸(Pseudolaric acid B,PAB)是從土荊皮中提取的二萜酸化合物,分子式C_(23)H_(28)0_8。本文考察了土槿乙酸抗糖尿病活性及緩解胰島素抵抗機(jī)制研究。1.利用高濃度的胰島素構(gòu)建HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型,衣霉素(Tun)和寡霉素(Oli)分別誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和線粒體損傷模型。利用不同濃度的土槿乙酸(PAB)進(jìn)行緩解胰島素抵抗糖代謝研究,采用ELISA實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證土槿乙酸促進(jìn)胰島素β細(xì)胞胰島素釋放的效果。2.土槿乙酸緩解HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的機(jī)制研究。采用Western-Blotting方法從蛋白水平檢測(cè)不同濃度土槿乙酸作用IR-HepG2細(xì)胞,對(duì)HepG2細(xì)胞增值信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白PPARγ、IRS-1、Akt、P-akt、Grp78等蛋白表達(dá)的影響。3.土槿乙酸抗糖尿病活性的研究。利用高糖高脂和STZ構(gòu)建Ⅱ型糖尿病小鼠模型,小鼠腹腔注射不同濃度的PAB,檢測(cè)小鼠血糖、胰島素、膽固醇、甘油三酯等Ⅱ型糖尿病代謝指標(biāo)。本文通過對(duì)土槿乙酸抗糖尿病活性及緩解胰島素抵抗機(jī)制研究得到如下結(jié)果。1.10μM胰島素作用HepG2細(xì)胞36小時(shí)為胰島素抵抗的最佳模型,10μM PAB能夠顯著緩解HepG2胰島素抵抗、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,線粒體損傷,增加葡萄糖的消耗。2.不同濃度PAB作用胰島素抵抗HepG2細(xì)胞24h后,隨著PAB濃度的增加,PPARγ表達(dá)上調(diào),IRS-1表達(dá)上調(diào),P-Akt上調(diào),GRP-78表達(dá)下調(diào)。3.PAB可顯著降低糖尿病模型組小鼠血糖值,提高胰島素濃度,改善甘油三酯、總膽固醇等糖尿病代謝性問題,且隨著PAB濃度增高,顯著性增強(qiáng),某些指標(biāo)強(qiáng)于陽性藥羅格列酮。通過實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論:土槿乙酸可以緩解IR-HepG2細(xì)胞。土槿乙酸通過影響PPARγ、IRS-1作用到胰島素受體緩解IR-HepG2細(xì)胞。土槿乙酸可以抗Ⅱ型糖尿病活性通過緩解胰島素抵抗。上述研究為廣泛篩選抗糖尿病藥物提供了新的思路。
【圖文】：

型的PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮治療2型糖尿病的主要方式之一，這恰恰為土槿乙酸作為新型的抗Ⅱ型糖尿病提供了理論依據(jù)。圖0-1 土槿乙酸結(jié)構(gòu)式0.4 本課題的設(shè)計(jì)思想及研究?jī)?nèi)容1.查閱文獻(xiàn)得出，大部分的研究者只是利用單一因素構(gòu)建胰島素抵抗模型并驗(yàn)證其緩解機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)利用高濃度的胰島素構(gòu)建HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型，衣霉素（Tun）和寡霉素（Oli）分別誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和線粒體損傷模型。利用不同濃度的土槿乙酸（PAB）進(jìn)行緩解胰島素抵抗糖代謝研究，采用ELISA實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證土槿乙酸促進(jìn)胰島素β細(xì)胞胰島素釋放的效果。從而得到了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，線粒體損傷與胰島素抵抗之間相互聯(lián)系。2.大量文獻(xiàn)表明，，臨床上常用的抗胰島素抵抗類藥物都是通過PPARγ這一機(jī)

章 土槿乙酸緩解肝癌細(xì)胞（HepG2）胰島素抵抗的研究12圖1-1 不同濃度、不同作用時(shí)間胰島素對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2降糖量A：PAB 24h B：PAB 36hC：PAB 48h D：PAB 60h###p<0.001 as compared with the control group,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001 as compared with only IR groups.MTT實(shí)驗(yàn)顯示，0-50μM胰島素作用HepG2細(xì)胞60h小時(shí)后，HepG2細(xì)胞存活率無顯著性變化，細(xì)胞正常存活。（圖1-2）
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 王丹;辛彥;肖玉平;;土槿乙酸抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J];腫瘤防治研究;2013年03期

2 劉曉華;江湖;李海星;李超波;曹郁生;;胰島素誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型的建立[J];食品科學(xué);2012年19期

3 方飛;吳新榮;羅明俐;呂歡;;HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型的建立及在篩選桑葉有效部位中的應(yīng)用[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2012年06期

4 陳夢(mèng)云;江國(guó)榮;;胰島素抵抗細(xì)胞模型研究進(jìn)展[J];安徽醫(yī)藥;2012年02期

5 侯麗;崔景榮;;土槿皮乙酸抗腫瘤作用及其分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2010年23期

6 于靜華;田代真一;小野寺敏;池島喬;;土槿皮乙酸B不通過Fas途徑誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡和M期周期阻滯[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2008年11期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王昊;白藜蘆醇對(duì)失血性休克所致線粒體損傷和急性胰島素抵抗的保護(hù)作用及潛在機(jī)制探討[D];山東大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 展平;姜黃素激活Nrf2系統(tǒng)緩解線粒體損傷和胰島素抵抗作用機(jī)制研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2620265