【摘要】：目的:探討金釵石斛總生物堿對高脂飲食模型小鼠膽汁酸代謝的影響及其機(jī)制。方法:將C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為6組,每組10只,分別為正常對照組(CD組),高脂飲食模型對照組(HFD組),金釵石斛總生物堿低、中、高劑量組(DNLA-L,DNLA-M,DNLA-H組),辛伐他汀陽性藥物對照組。正常對照組始終使用普通維持飼料喂養(yǎng),其它組均始終使用高脂飼料喂養(yǎng)。通過檢測血清中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C和總膽固醇(TC)的水平,判斷小鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝情況。脂質(zhì)代謝出現(xiàn)紊亂后,開始灌胃給藥,持續(xù)18周,每天1次。DNLA混懸于0.45%CMC-Na溶液中,低、中、高劑量分別為15,30,60 mg/kg;CD組和HFD組小鼠給予等體積空白0.45%CMC-Na溶液;陽性藥物對照組給予辛伐他汀20 mg/kg。末次給藥12 h后,頸椎脫臼處死,收集肝臟,作HE染色和油紅O染色觀察病理改變,檢測肝臟中甘油三脂和總膽固醇的水平;采用UPLC-MS技術(shù)對肝臟膽汁酸進(jìn)行輪廓分析,并對其中48種膽汁酸進(jìn)行了歸屬;色譜柱為Hypersil Gold C_(18)柱(2.1 mm×150 mm,1.9μm),流動(dòng)相組成為含5 mmol/L乙酸銨的20%乙腈溶液和含5 mmol/L乙酸銨的80%乙腈溶液,梯度洗脫,柱溫40℃。采用HESI離子化方式,噴霧電壓3.5 KV,霧化氣體溫度300℃,離子傳輸管溫度350℃,鞘氣流速35 arb,輔助氣流速10 arb。掃描模式為負(fù)離子Full Scan和ddMS Scan。RT-PCR檢測膽汁酸代謝相關(guān)基因Cyp7a1、Cyp7b1、Cyp8b1、Cyp27a1、Fxr、Shp、Bsep、Mrp2、Mdr2、Fgfr4、Lrh-1、Cyp3a11、Baat、Bacs mRNA表達(dá)。結(jié)果:高脂飲食喂養(yǎng)18周后,小鼠體重相較于正常對照組顯著增加(P0.05),血清中LDL-C和TC水平也顯著升高(P0.05),提示小鼠脂質(zhì)代謝出現(xiàn)異常,模型建立成功,開始給藥。給藥結(jié)束后,收集肝臟,觀察組織形態(tài)學(xué)的變化。HE染色結(jié)果顯示,HFD組小鼠的肝臟有彌漫性的脂肪空泡出現(xiàn),同時(shí)細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大小不等的脂滴。在各個(gè)DNLA給藥組,肝臟中的脂肪蓄積和肝細(xì)胞脂肪變性均有不同程度的改善,其中DNLA-L組的細(xì)胞形態(tài)最為正常,脂肪蓄積最不明顯。油紅O染色結(jié)果同樣顯示,HFD組小鼠的肝臟染色明顯較CD組加深,出現(xiàn)了明顯的脂肪堆積。在各個(gè)DNLA給藥組,肝臟染色均不同程度減輕,其中DNLA-L組的脂肪含量最低。檢測肝臟中TG和TC的結(jié)果表明,HFD組肝臟TG、TC水平較之CD組均明顯升高,而DNLA-L組肝臟TG、TC水平與HFD組相比顯著下降(P0.05),且低于陽性藥物對照組(P0.05)。采用主成分分析方法比較各組肝臟膽汁酸輪廓的變化,發(fā)現(xiàn)CD組與HFD組兩組小鼠的膽汁酸總體輪廓有明顯不同,而DNLA-L組的膽汁酸輪廓更加接近CD組,并能夠和HFD組明顯區(qū)分。載荷圖顯示,CA、CDCA、LCA、DCA、TMCAs、TDCA、TUDCA、TCDCA和THDCA是對各組輪廓變化具有主要貢獻(xiàn)的膽汁酸。采用單因素方差分析發(fā)現(xiàn),與CD組相比,HFD組小鼠肝臟中膽汁酸CA、DCA、CDCA含量顯著上升(P0.05),而結(jié)合膽汁酸TCDCA含量下降(P0.05)。與HFD組相比,DNLA-L組小鼠肝臟中膽汁酸CA、DCA、CDCA、LCA的濃度降低,而結(jié)合膽汁酸TDCA、THDCA、TCDCA、TMCAs和TUDCA濃度顯著增加(P0.05)。此外,比較HFD組與DNLA-L組CA/CDCA值發(fā)現(xiàn),DNLA能顯著地抑制CA/CDCA值(P0.05)。檢測膽汁酸代謝相關(guān)基因表達(dá)的結(jié)果顯示,與CD組相比,HFD組肝臟基因Cyp27a1的表達(dá)水平顯著升高(P0.05),而Fxr和Bacs基因表達(dá)水平顯著下降(P0.05)。與CD組相比,DNLA-L組肝臟基因Cyp27a1和Shp的表達(dá)水平顯著升高(P0.05),而與HFD組相比,DNLA-L組肝臟基因Fxr和Cyp3a11基因表達(dá)水平顯著升高(P0.05)。結(jié)論:金釵石斛總生物堿可以調(diào)節(jié)高脂飲食模型小鼠的脂質(zhì)代謝,顯著改善脂質(zhì)在肝臟的蓄積,其作用機(jī)制與膽汁酸代謝通路相關(guān)。主要表現(xiàn)為促進(jìn)膽汁酸轉(zhuǎn)化成親水性高的�；撬峤Y(jié)合型膽汁酸,提升膽固醇在膽汁中的溶解和排泄水平,同時(shí)降低與膽固醇吸收正相關(guān)的CA/CDCA比值。
【圖文】：

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 黃思2 結(jié)果2.1 高脂飲食模型小鼠的建立如圖 1-A，高脂飲食喂養(yǎng) 18 周后，，與 CD 組相比，HFD 組小鼠的平均體重顯著增加（P<0.05）。如圖 1-B 和 1-C 所示，高脂飲食喂養(yǎng) 18 周后，HFD 組小鼠血清中LDL-C 和 TC 水平，均明顯高于 CD 組小鼠（P<0.05）。由結(jié)果可知，使用高脂飲食喂養(yǎng) 18 周，小鼠脂質(zhì)代謝出現(xiàn)異常。

HE染色觀察DNLA對高脂飲食模型小鼠肝臟的影響;n=5Fi目.2EffcctofDNLAonlivcrofmiccfedwithhi目h一fatdictundcrllEstaining;n=5
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2619653