發(fā)布時(shí)間：2020-04-08 14:56

【摘要】：寬葉腹水草(Veronicastrum latifolium(Hemsl.)Yamazaki)為玄參科(Scrophulariaceae)腹水草屬(Veronicastrum Heist.ex Farbic)植物寬葉腹水草的全草,可全草入藥,主治肝硬化腹水、腎炎消腫、跌打損傷、燙傷和毒蛇咬傷。寬葉腹水草含有豐富的黃酮類化合物,黃酮類化合物具有多種生物活性如抗氧化、抑菌、抗病毒、抗炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、降血壓血脂和保護(hù)心腦血管等。因此本論文以寬葉腹水草為研究對(duì)象,采用HPLC-MS/MS對(duì)寬葉腹水草中的黃酮類化合物進(jìn)行分析鑒定;首次建立了 HPLC法對(duì)黃酮類化合物進(jìn)行定量分析;在定量分析的基礎(chǔ)上對(duì)提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)合大孔吸附樹(shù)脂對(duì)寬葉腹水草提取液中黃酮類化合物進(jìn)行富集純化;首次探討了寬葉腹水草粗提物和純化物的抗氧化活性、抑菌活性、抗炎活性。研究結(jié)果表明:1.通過(guò)LC-MS/MS和HPLC定性分析,鑒定出寬葉腹水草中的八種黃酮類化合物主要為牡荊素、木犀草素、漢黃芩苷、芹菜素、高車前素、金圣草黃素、金合歡素、柳穿魚(yú)黃素;建立的 HPLC 色譜條件:色譜柱:Diamonsil C18 column,(250 × 4.6 mm i.d..5 μm),流動(dòng)相:A為0.5%的磷酸水溶液,B為乙腈;梯度洗脫條件為:0-6 min,10-15%(B);6-7 min,15-18%(B);7-30 min,18-25%(B);30-65 min,25-40%(B);65-85 min,40-52%(B);檢測(cè)波長(zhǎng)為 350 nm;柱溫為35℃;流速為0.8mL/min;進(jìn)樣量為20μL。證實(shí)此法可成功的用于寬葉腹水草中主要黃酮類化合物的定性和定量分析。2.在單因素實(shí)驗(yàn)的接礎(chǔ)上,結(jié)合響應(yīng)曲面法實(shí)驗(yàn)考察了微波輔助提取寬葉腹水草中牡荊素、木犀草素、漢黃芩苷、芹菜素、高車前素、金圣草黃素、金合歡素、柳穿魚(yú)黃素的工藝條件,并確定了最工藝條件:70%的乙醇為溶劑,微波溫度為56℃,微波時(shí)間為14min,間液比為1:48(g/mL)。在最佳工藝條件下,寬葉腹水草中的牡荊素、木犀草素、漢黃芩苷、芹菜素、高車前素、金圣草黃素、金合歡素、柳穿魚(yú)黃素的提取率分別為0.284 mg/g、0.298 mg/g、5.59 mg/g、0.161 mg/g、0.297 mg/g、0.263 mg/g、0.285 mg/g、0.781 mg/g。證實(shí)此法對(duì)寬葉腹水草中的黃酮類化合物提取率比價(jià)高,該提取工藝完全可行。D101樹(shù)脂對(duì)寬葉腹水草中黃酮類化合物的吸附率、解吸率、純度及回收率分別為83.7%、81.2%、88.5%、41.4%,表明D101樹(shù)脂適用于寬葉腹水草黃酮類化合物的富集純化。經(jīng)D101樹(shù)脂富集純化后,寬葉腹水草純化物中黃酮類化合物的純度與粗提物相比,其純度提高了 9.36倍。3.以Vc為對(duì)照,對(duì)寬葉腹水草的粗提物和純化物進(jìn)行DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)、ABTS自由基清除實(shí)驗(yàn)、FRAP總抗氧化能力實(shí)驗(yàn),在三種抗氧化實(shí)驗(yàn)中,粗提物和純化物均具有抗氧化作用,且純化物的抗氧化能力均強(qiáng)于粗提物。選擇革蘭氏陽(yáng)性菌(金黃色葡萄球菌、白色念球菌、枯草芽孢桿菌)和革蘭氏陰性菌(大腸桿菌、綠膿桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌)進(jìn)行寬葉腹水草粗提物和純化物的抑菌活性研究,純化物和粗提物對(duì)六種供試菌株表現(xiàn)出一定的抑制作用,但對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抑制作用明顯強(qiáng)于革蘭氏陰性菌;純化物對(duì)六種供試菌株的抑菌作用強(qiáng)于粗提物,且純化物對(duì)白色念球菌的抑菌作用最強(qiáng)。采用MTT法測(cè)定25-500 μg/mL范圍內(nèi)的粗提物和純化物對(duì)RAW 264.7細(xì)胞活力的影響。研究發(fā)現(xiàn),在25-300 μg/mL濃度范圍內(nèi),粗提物和純化物對(duì)細(xì)胞活力無(wú)顯著影響;經(jīng)LPS誘導(dǎo)致炎的RAW 264.7巨噬細(xì)胞,通過(guò)Griess法檢測(cè)給藥后細(xì)胞NO的分泌量,研究發(fā)現(xiàn)寬葉腹水草粗提物和純化物均抑制了NO的分泌量,且純化物的抑制作用強(qiáng)于粗提物,驗(yàn)證了寬葉腹水草粗提物和純化物具有抗炎作用,且純化物的抗炎效果強(qiáng)于粗提物。
【圖文】：

２．３結(jié)果與分析逡逑２．３．１黃酮類成分的鑒定逡逑圖２－１為通過(guò)ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析得到的寬葉腹水草中黃酮類成分的總離子流圖，將該總離逡逑子流圖進(jìn)一步分析得到相關(guān)黃酮成分的一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜圖。通過(guò)分析ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ獲得的逡逑寬葉腹水草一級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)從而得到黃酮類成分的準(zhǔn)分子離子峰，確定可能的分子量，如表２－２逡逑所示。根據(jù)正離子模式下獲得的寬葉腹水草黃酮類成分的二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，獲得相關(guān)結(jié)構(gòu)碎片逡逑離子信息。通過(guò)分析裂解規(guī)律，參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道及標(biāo)準(zhǔn)品色譜液相色譜圖信息，從寬葉腹逡逑水草葉中鑒定出八個(gè)黃酮類成分（化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖２－２所示）。逡逑ｊｋ邋Ｓｊｒｖｓ；：邐ｔ：．邋Ｓｇ－＊ｓ；逡逑１００％邋＼逡逑ｍ邋３．００邐４１．６３逡逑＾邐３．８６逡逑２．４７邐７７．３４逡逑Ｍ邐２８．９５邐４６．３３逡逑ｃ邐Ｉ邐丨邐９１．１７逡逑ｉ邋６0％邐；邋３．６５邐１１．６６邐２0．８６邐３７．２０邐９１－５９｜邋９２１４逡逑：＞邐５０％邋＼ｌ邐ｉ邋ｉｃ邋ｉｎ１６Ｊ０邐７８．８５邐；邐？逡逑３０％邐，，，邋１０．３８邋（ｉｊｌｒＷ邋ｊｒＰ＾－７０＾ｒＴ邋ｒ＾２Ｔ邋＾Ｍ邋７４；８９邐｜邐８８．２２邋＾邐？逡逑＜邐ｖ逡逑0％邋—邋二邐邐邐邐邐＊邐邐

逑ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ逡逑圖２－６為高車前素的多級(jí)質(zhì)譜圖。在該化合物的一級(jí)質(zhì)譜圖中，負(fù)離子模式下掃描的ｍ／ｚ逡逑２９９．０５６６為［Ｍ－Ｈｒ峰，表明該化合物的相對(duì)分子質(zhì)量為３００。對(duì)ｍ／ｚ邋２９９．０５６６母離子進(jìn)行逡逑二級(jí)質(zhì)譜掃描，可獲得的主要二級(jí)質(zhì)譜碎片離子６５．０６６，１３６．９８８４，２２７．０３５，，２８３．０２５，２８４．０３３４，逡逑其中ｍ／ｚ邋２８３．０２５和ｍ／ｚ邋２８４．０３３４為母離子ｍ／ｚ邋２９９．０５６６分別丟失一分子的Ｏ和ＣＨ３獲得碎逡逑片離子［Ｍ－Ｈ－0ｒ邋和［Ｍ－Ｈ－邋ＣＨ３］＿，ｍ／ｚ邋１３６．９８８４邋由邋ｍ／ｚ邋２９９．０５６６邋母離子丟失一分子邋ＣＨ３邋后逡逑經(jīng)過(guò)１、４號(hào)鍵斷裂后產(chǎn)生碎片離子［Ｍ－Ｈ－ＣＨＭ１，４］＇根據(jù)表２－２質(zhì)譜數(shù)據(jù)、裂解規(guī)律及相逡逑關(guān)文獻(xiàn)＠＿８７１，經(jīng)過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)高車前素的比對(duì)，該化合物被鑒定為高車前素。逡逑Ａ逡逑Ｓｐｅｃｔｒｕｍ邋ｆｒｏｍ邋ｓａ－ｎｅｇ２．ｗｉｆ（邋（ｓａｍｐｌｅ邋１）邋－邋Ｓａｍｐｌｅ００２，邋Ｅｘｐｅｉｉｍｅｎｔ邋１．邋－ＴＯＦ邋ＭＳ邋（１００邋－邋２０００）邋ｆｒｏｍ邋５４．５８６邋ｍｉｎ逡逑３0ｅ５邐＞９９．０５６６逡逑２邋５ｅ５逡逑２．０ｅ５逡逑｜邐１．５ｅ５逡逑１邐１．０ｅ５邐３０００６０３逡逑５０，４邐２８４０３２７逡逑Ｏ．ＯｅＯ邋Ｈ邐
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2619487