發(fā)布時間：2020-04-08 06:34

【摘要】：目的本研究為初步探討化濕補腎法治療膝骨關(guān)節(jié)炎(knee osteoarthritis,KOA)的機制。方法1、SD大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎模型的建立以及鑒定木瓜蛋白酶注射法建立骨性關(guān)節(jié)炎動物模型是用于骨關(guān)節(jié)炎防治研究的常用方法之一。本研究采用木瓜蛋白酶注射法。按照隨機數(shù)字表法將56只SD大鼠分出16只作為空白組(其中8只作為模型鑒定的空白組),對其余SD大鼠均進行造模,分別在第1、3、7天進行膝關(guān)節(jié)注射木瓜蛋白酶。造模完成后采用改良Mankin’s評分及HE染色光鏡下觀察進行模型鑒定。2、干預(yù)方法除空白組外,將余下的SD大鼠按照隨機數(shù)字表法平均分為模型組、龜鹿二仙膠組、化濕定痛湯組以及化濕定痛湯+龜鹿二仙膠組,予空白組和模型組灌喂生理鹽水,龜鹿二仙膠組灌喂龜鹿二仙膠,化濕定痛湯組灌喂化濕定痛湯,化濕定痛湯+龜鹿二仙膠組灌喂化濕定痛湯+龜鹿二仙膠。3、光鏡下觀察軟骨組織形態(tài)使用蘇木素-伊紅(HE)染色,觀察軟骨組織形態(tài)并進行Mankin’s評分。4、qPCR技術(shù)檢測脛骨平臺軟骨中p38MAPK、Ⅱ型膠原、P53含量的表達。5、Elisa檢測滑膜的白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、腫瘤壞死因子-a(Tumor necrosis factor-a,TNF-α)以及關(guān)節(jié)液的前列腺素E(Prostaglandin E,PGE)、環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)含量的表達。結(jié)果1、造模結(jié)果HE染色觀察發(fā)現(xiàn)空白組軟骨面表層切線層光滑無缺損,細胞形態(tài)正常,排列均勻,無簇集成團。而模型組軟骨表層切線層破損、裂隙深達骨質(zhì)輻射層,細胞成簇聚集。模型組Mankin’s評分顯著高于空白組,該分數(shù)越高顯示關(guān)節(jié)軟骨損傷越嚴重,差異符合統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。說明膝骨性關(guān)節(jié)炎造模成功。2、HE染色結(jié)果HE染色發(fā)現(xiàn)空白組表層關(guān)節(jié)軟骨光滑平整,細胞排列均勻,無增生。模型組軟骨表層切線層破損、裂隙深達骨質(zhì)輻射層,細胞成簇聚集。龜鹿二仙膠組表層破壞,移行層完整,細胞排列紊亂,有增生�；瘽穸ㄍ礈�+龜鹿二仙膠組表層較光滑,見少量受損,移行層完整,細胞排列相對均勻。3、ELISA結(jié)果化濕定痛湯組的PGE、COX-2、IL-1β、TNF-a表達量比模型組低,p0.05,且化濕定痛湯+龜鹿二仙膠組的PGE、COX-2、IL-1β、TNF-a表達含量均比龜鹿二仙膠組低,差異符合統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。4、PCR結(jié)果化濕定痛湯+龜鹿二仙膠組中軟骨的P38、P53含量的表達低于龜鹿二仙膠組(p0.05),化濕定痛湯+龜鹿二仙膠組中Ⅱ型膠原含量的表達高于龜鹿二仙膠組(p0.05)。結(jié)論化濕定痛湯能有效抑制KOA中炎性因子的表達,減輕炎性水腫,使其減少對軟骨的刺激,減少軟骨的凋亡,進而促進龜鹿二仙膠對軟骨的修復(fù),延緩KOA的進程。
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5;R-332

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