【摘要】：苦木Picrasma quassioides(D.don)Bennet是苦木科苦木屬植物常被用于炎癥相關(guān)疾病的治療,具有較為良好的抗炎活性。據(jù)報(bào)道,苦木屬(Simaroubaceae)植物中發(fā)揮活性的主要化學(xué)成分是吲哚類結(jié)構(gòu)的生物堿,其中包括:β-卡波林生物堿、鐵屎米酮及二聚體生物堿,但這類結(jié)構(gòu)的天然化合物的抗炎分子機(jī)制尚不明確。課題組前期曾對苦木中的活性成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離,并對分離鑒定的化合物進(jìn)行抗炎活性評價(jià),發(fā)現(xiàn)部分β-卡波林型和鐵屎米酮型生物堿具有良好的抗炎活性。本文旨在前期研究基礎(chǔ)上,有針對性的獲得一系列吲哚生物堿,并評價(jià)它們的抗炎活性,探討及其抗炎分子機(jī)制,為苦木屬植物的臨床應(yīng)用提供相應(yīng)的理論基礎(chǔ)。被研究的化合物庫由75個(gè)吲哚生物堿組成,這些生物堿大部分是從苦木(Picrasma quassioides)或其他苦木屬植物(Simaroubaceae)中分離得到,還有一部分是經(jīng)過化學(xué)合成獲得。首先以LPS刺激RAW 264.7細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)NO,Griess法檢測化合物庫中的75個(gè)單體化合物對LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞釋放NO的抑制活性,評價(jià)化合物的體外抗炎活性,同時(shí)通過MTT法評價(jià)化合物的細(xì)胞毒性。結(jié)合NO抑制活性和細(xì)胞毒性測試結(jié)果,優(yōu)選出代表性活性化合物。對活性化合物開展進(jìn)一步研究,采用ELISA法檢測活性化合物對LPS誘導(dǎo)RAW 264.7細(xì)胞釋放炎癥因子PGE_2、IL-6和TNF-α的抑制作用;采用Western Blot法檢測活性化合物對炎癥蛋白表達(dá)(iNOS和COX-2)以及對NF-κB炎性信號通路(IκB-α蛋白降解)以及對MAPK通路(JNK,p38和ERK蛋白磷酸化)的調(diào)控作用。化合物庫共75個(gè)生物堿,包括39個(gè)?-卡波林型生物堿、30個(gè)鐵屎米酮型生物堿、6個(gè)二聚體生物堿。篩選了以上藥物在100?M濃度下對LPS誘導(dǎo)RAW 264.7細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)NO的抑制活性,39個(gè)?-卡波林型生物堿中,有14個(gè)生物堿(11,12,13,15,21,22,23,27,29,30,31,37,41,42)表現(xiàn)顯著的抑制活性,抑制率高于80%,但一些生物堿具有細(xì)胞毒性;30個(gè)鐵屎米酮型生物堿中僅有5個(gè)生物堿(46,47,55,57,64)表現(xiàn)顯著的抑制活性,抑制率高于80%。6個(gè)二聚體生物堿中,72和76雖然也表現(xiàn)較強(qiáng)的NO抑制率,但是MTT平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明化合物對RAW 264.7細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性,隨著化合物濃度降低,細(xì)胞毒性降低但是同時(shí)NO抑制活性也漸漸消失,提示二聚體生物堿具有一定的細(xì)胞毒性,對巨噬細(xì)胞釋放NO無明顯抑制活性。根據(jù)初篩實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,優(yōu)選出4個(gè)活性化合物進(jìn)行進(jìn)一步的研究,其中包括兩個(gè)β-卡波林生物堿:Benzalharman(23),Kumujian C(27);兩個(gè)鐵屎米酮生物堿:Canthin-6-one(46),9-methoxy-canthin-6-one(57)。Griess和ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:四個(gè)活性化合物均能抑制LPS誘導(dǎo)RAW 264.7細(xì)胞釋放NO、IL-6和TNF-α。兩個(gè)鐵屎米酮生物堿46和57能顯著抑制LPS誘導(dǎo)RAW 264.7細(xì)胞釋放PGE_2,但兩個(gè)β-卡波林生物堿23和27不能抑制PGE_2的釋放。Western Blot結(jié)果表明兩個(gè)β-卡波林生物堿(23,27)能下調(diào)iNOS蛋白表達(dá),而對COX-2蛋白表達(dá)無明顯抑制作用;兩個(gè)鐵屎米酮生物堿(46,57)能同時(shí)抑制iNOS和COX-2蛋白表達(dá)。另外四個(gè)活性化合物均能抑制NF-κB通路中IκB-α蛋白的降解。兩個(gè)鐵屎米酮生物堿46和57還能抑制MAPK通路中的JNK蛋白磷酸化,而且57還能下調(diào)p38蛋白磷酸化水平,但兩個(gè)β-卡波林生物堿對MAPK通路中的JNK,ERK和p38蛋白磷酸化均無抑制作用。綜上所述,雖然β-卡波林生物堿和鐵屎米酮生物堿具有相似的吲哚結(jié)構(gòu),但兩種類型的生物堿在抗炎分子機(jī)制上仍存在明顯的差異。β-卡波林生物堿能阻斷LPS引起的NF-κB通路的活化而對MAPK通路無影響,但鐵屎米酮生物堿對NF-κB通路和MAPK通路的激活均有一定的抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：煙臺大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2618897