【摘要】：目的:明確中藥提取物人參皂苷Rh1對乳腺癌SKBR3細(xì)胞活性的影響,確定中藥提取物人參皂苷Rh1對乳腺癌SKBR3細(xì)胞干預(yù)的最佳藥物劑量;篩查在中藥提取物人參皂苷Rh1干預(yù)下乳腺癌SKBR3細(xì)胞中差異表達(dá)的基因,并運(yùn)用生物信息學(xué)對差異表達(dá)基因的功能及相關(guān)信號通路進(jìn)行分析。材料與方法:應(yīng)用MTS方法培養(yǎng)乳腺癌SKBR3細(xì)胞,明確中藥提取物人參皂苷Rh1對乳腺癌SKBR3細(xì)胞活性的影響,確定中藥提取物人參皂苷Rh1對乳腺癌SKBR3細(xì)胞干預(yù)的最佳藥物劑量;應(yīng)用高通量測序技術(shù)篩查在中藥提取物人參皂苷Rh1的干預(yù)下乳腺癌SKBR3細(xì)胞中差異表達(dá)的基因,并應(yīng)用生物信息學(xué)對差異表達(dá)基因的功能及相關(guān)信號通路進(jìn)行分析。結(jié)果:1.MTS結(jié)果發(fā)現(xiàn):500μM中藥提取物人參皂苷Rh1在24小時、48小時對乳腺癌SKBR3細(xì)胞的活性有明顯抑制作用,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.高通量測序結(jié)果發(fā)現(xiàn):在中藥提取物人參皂苷Rh1的干預(yù)下,乳腺癌SKBR3細(xì)胞中差異表達(dá)的基因6580個,包括上調(diào)的差異表達(dá)基因3403個。下調(diào)的差異表達(dá)基因3177個。經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫注釋后,篩查出的差異表達(dá)基因中m RNA和lnc RNA分別為5967個和451個;KEGG生物通路富集分析發(fā)現(xiàn):差異表達(dá)基因在人類乳頭瘤病毒感染、剪接體、細(xì)胞凋亡、p53信號通路、TNF信號通路等信號通路中結(jié)果顯著;GO生物通路富集分析發(fā)現(xiàn):差異表達(dá)基因在調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的組成、輔因子結(jié)合、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)腔、核糖核蛋白復(fù)合物的生物合成、GDP結(jié)合、染色體區(qū)域等基因功能中結(jié)果顯著。結(jié)論:1.500μM中藥提取物人參皂苷Rh1在24小時和48小時對乳腺癌SKBR3細(xì)胞的活性具有顯著的抑制作用。2.中藥提取物人參皂苷Rh1可能通過干預(yù)人類乳頭瘤病毒感染、剪接體、細(xì)胞凋亡、p53信號通路、TNF信號通路等信號通路對SKBR3細(xì)胞的活性進(jìn)行抑制。3.中藥提取物人參皂苷Rh1可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的組成、輔因子結(jié)合、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)腔、核糖核蛋白復(fù)合物的生物合成、GDP結(jié)合、染色體區(qū)域等基因功能對SKBR3細(xì)胞活性進(jìn)行抑制。
【圖文】：

圖 2 毛細(xì)管電泳法檢測 RNA 完整性樣品編號 樣品名稱 RIN 28S/18S S17101003 SKBR1-1 9.0 1.26 S17101004 SKBR1-2 9.8 1.6 S17101005 SKBR1-3 9.6 1.57 S17101006 SKBR1-RH1-1 8.8 0.79 S17101007 SKBR1-RH1-2 9.1 1.39 S17101008 SKBR1-RH1-3 8.6 1.09 表 2 Qiaxcel 檢測結(jié)果檢結(jié)果樣品 RNA 檢測結(jié)果進(jìn)行匯總分析（表 3），結(jié)果顯示六組樣品的合實(shí)驗(yàn)要求，樣品合格，滿足構(gòu)建 2 次文庫的要求。

圖 3 R1 堿基組成分布圖（1） 圖 4 R1 堿基組成分布圖（2）3.4 堿基質(zhì)量分布根據(jù)質(zhì)控條件統(tǒng)計(jì)對每個測序循環(huán)的堿基質(zhì)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并繪制堿基質(zhì)量分布圖，以便從整體水平上評估測序質(zhì)量，我們將堿基位置設(shè)置為橫坐標(biāo)，將對應(yīng)的 Q 值設(shè)置為縱坐標(biāo)，紅線代表中位數(shù)，藍(lán)線表示平均值，黃色表示 25%-75%的區(qū)間，觸須是 10%-90%。由于測序采用的是 2X150 堿基的測序模式，所以測序包含 6 個樣本，每個樣本相對應(yīng)兩個堿基質(zhì)量分布圖，，圖 5、圖 6 為樣本 R1 堿基質(zhì)量分布圖。
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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4 孫

本文編號：2618541