【摘要】：目的:以中藥血清藥理學(xué)為基礎(chǔ),利用圖譜分析技術(shù)、細胞檢測技術(shù)、數(shù)理統(tǒng)計學(xué)以及中藥譜效關(guān)系理論,考察生肌膏經(jīng)輻照滅菌達到無菌標準后,是否會對藥品療效產(chǎn)生影響,以評價生肌膏選用輻照滅菌工藝的可行性。方法:1.家兔瘡瘍造模成功后,隨機分成未輻照和輻照兩組,分別使用輻照前后的生肌膏換藥治療。在用藥第3d、6d、9d、12d、15d時觀察創(chuàng)面愈合情況,同時取血,分離載藥血清,-80℃凍存、備用;15d后處死家兔,切除創(chuàng)口愈合處皮膚,制成病理切片、鏡下觀察。另外篩選符合條件的受試者,隨機分組,換藥治療,在治療的第0d、9d,采集創(chuàng)面分泌物分析創(chuàng)面感染變化情況。2.建立載藥血清中游離氨基酸指紋圖譜,分析不同時間點載藥血清中游離氨基酸的變化幅度及變化時間。3.采用MTT實驗法,測定兩個實驗組不同時間點載藥血清的OD值;使用流式細胞檢測技術(shù),測定兩組載藥血清對細胞凋亡率。分別以O(shè)D值和凋亡抑制率為評價指標,分析生肌膏輻照滅菌后對人真皮成纖維細胞增殖與凋亡的影響。4.利用上述實驗所得的指紋圖譜和細胞實驗數(shù)據(jù),采用SPSS及Excel統(tǒng)計分析軟件,分別用雙變量相關(guān)性分析、多元線性回歸分析及灰色關(guān)聯(lián)度分析等方法,對數(shù)據(jù)進行相關(guān)性分析。建立載藥血清游離氨基酸和瘡瘍愈合療效之間的譜效關(guān)系,分析輻照對生肌膏療效的影響。結(jié)果:1.兩實驗組家兔創(chuàng)面愈合情況類似:用藥第3d,創(chuàng)面肉芽組織生長,15d創(chuàng)面基本完全愈合。病理切片鏡檢可見,兩組創(chuàng)面均有大量成纖維細胞生長,未輻照組可見大量嗜酸性細胞灶性聚集,毛細血管數(shù)量較輻照組多。受試者創(chuàng)面感染情況比較,無差異(P=0.881,0.05)。2.氨基酸分析儀建立載藥血清游離氨基酸指紋圖譜,檢測牛磺酸(Tau)、蘇氨酸(Thr)、絲氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、纈氨酸(Val)、甲硫氨酸(Met)、異亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、鳥氨酸(Orn)、賴氨酸(Lys)、組氨酸(His)、精氨酸(Arg)、脯氨酸(Pro)等17種氨基酸含量。與空白兔血清相比,除Tau和Glu外,兩組均有15種游離氨基酸含量的最大降幅超過40%。未輻組降幅范圍為42.58%~96.12%;輻照組為41.95%~90.64%,變化排名的前4位均是Gly、Leu、Orn和Pro,從氨基酸變化幅度分析,兩組不存在差異。從含量變化時間分析,兩組變化過程略有不同,但整體趨勢不存在差異。3.細胞增殖和凋亡實驗結(jié)果顯示兩組均有明顯的細胞增殖促進作用和對細胞凋亡的抑制作用,但在影響時間和作用強度上存在著較為明顯的差異。4.建立載藥血清游離氨基酸與人真皮成纖維細胞增殖和凋亡作用的譜效關(guān)系,并進行綜合評價分析。雙變量相關(guān)性分析顯示:Gly,Lys與細胞增殖密切相關(guān)(Pearson指數(shù)分別為0.725和0.695,P0.05);Orn與細胞凋亡抑制率密切相關(guān)(Pearson指數(shù)為-0.653,P0.05)。多元線性回歸分析:將細胞增值率設(shè)定為Y1,多元回歸方程為:Y_1=-1.012-0.012X_3+0.004X_4+0.001X_6+0.016X_7+0.002X_(13)+0.000X_(14)-0.017X_(15)-0.001X_(16)+0.000X_(17)(R=1.000);細胞凋亡抑制率設(shè)定為Y_2,多元回歸方程為:Y_2=186.972+0.275X_3-0.032X_4-0.157X_6-0.429X_7-0.276X_(13)+0.275X_(14)+0.262X_(15)-0.134X_(16)+0.113X_(17)(R=1.000)�；貧w分析顯示只有Ser、Glu、Ala、Val、Orn、Lys、His、Arg、Pro等9種氨基酸與成纖維細胞的增殖和凋亡有關(guān)。灰色關(guān)聯(lián)度分析顯示:游離氨基酸與增殖作用的關(guān)聯(lián)度排序為MetLys0.7OrnIlePheProValHisTyrGluLeuAlaTauSerThrGlyArg0.6;與凋亡抑制作用的關(guān)聯(lián)度排序為TauSerIlePheHisValTyrLeuThrGluArgAlaMetLysProOrn=0.700Gly0.6。綜合三種統(tǒng)計分析結(jié)果證明:Lys與人真皮成纖維細胞增殖明顯正相關(guān);Orn與細胞的凋亡抑制明顯負相關(guān);Glu、Ala、Val、Arg等4種氨基酸與凋亡抑制負相關(guān),而Gly則可判斷為與凋亡抑制無關(guān)。比較兩實驗組中確認相關(guān)的游離氨基酸含量變化,未證明輻照前后的生肌膏在對真皮成纖維細胞增殖和凋亡方面的療效存在差異。結(jié)論:通過對輻照前后生肌膏的臨床療效、載藥血清氨基酸分析、載藥血清對人真皮成纖維細胞增殖與凋亡的的影響以及譜效關(guān)系的分析證實:生肌膏采用輻照工藝滅菌是可行的。
【圖文】：

分成兩份：一份按現(xiàn)行包裝要求分裝，為未輻照生肌膏；另一份使用相同包材分裝成單劑量包裝（每盒約 20g），盒外用聚乙烯復(fù)合膜袋塑封，25 kGy 輻照滅菌滅菌，并經(jīng)無菌檢查法檢驗達到無菌標準，制成輻照生肌膏。1.1.1.3 儀器顯微鏡（BHT），日本 Olympus。生化培養(yǎng)箱（SPX-150 BⅢ），天津泰斯特儀器有限公司。其它：剃毛器、1 ml 注射器、10 ml 注射器、醫(yī)用鑷子、醫(yī)用剪刀、紗布、棉球、棉拭子、醫(yī)用膠帶、醫(yī)用系帶口罩等1.1.2 實驗方法1.1.2.1 建立家兔瘡瘍模型將家兔頸后脊柱左右兩側(cè)剃毛，面積約為 6 cm×4 cm，碘伏消毒皮膚，皮下注射 1 mL鹽酸利多卡因注射液進行局部麻醉，于消毒區(qū)手術(shù)切除直徑 3 cm的皮膚全層，止血后取濃度為 1 108cfu/mL金黃色葡萄球菌菌液 0.2 mL涂抹于創(chuàng)面，用無菌敷料覆蓋包扎[37]（圖 1.1）。術(shù)后正常喂食喂水，注意動物的健康狀態(tài)。48h后用生理鹽水浸潤并打開敷料，創(chuàng)面有膿液生成則確認感染造模成功（圖 1.2）

分成兩份：一份按現(xiàn)行包裝要求分裝，為未輻照生肌膏；另一份使用相同包材分裝成單劑量包裝（每盒約 20g），盒外用聚乙烯復(fù)合膜袋塑封，25 kGy 輻照滅菌滅菌，，并經(jīng)無菌檢查法檢驗達到無菌標準，制成輻照生肌膏。1.1.1.3 儀器顯微鏡（BHT），日本 Olympus。生化培養(yǎng)箱（SPX-150 BⅢ），天津泰斯特儀器有限公司。其它：剃毛器、1 ml 注射器、10 ml 注射器、醫(yī)用鑷子、醫(yī)用剪刀、紗布、棉球、棉拭子、醫(yī)用膠帶、醫(yī)用系帶口罩等1.1.2 實驗方法1.1.2.1 建立家兔瘡瘍模型將家兔頸后脊柱左右兩側(cè)剃毛，面積約為 6 cm×4 cm，碘伏消毒皮膚，皮下注射 1 mL鹽酸利多卡因注射液進行局部麻醉，于消毒區(qū)手術(shù)切除直徑 3 cm的皮膚全層，止血后取濃度為 1 108cfu/mL金黃色葡萄球菌菌液 0.2 mL涂抹于創(chuàng)面，用無菌敷料覆蓋包扎[37]（圖 1.1）。術(shù)后正常喂食喂水，注意動物的健康狀態(tài)。48h后用生理鹽水浸潤并打開敷料，創(chuàng)面有膿液生成則確認感染造模成功（圖 1.2）
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R286.0;R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2618483