【摘要】：目的:比較分析不同濃度膽汁酸誘導(dǎo)下,Gpbar1蛋白表達(dá)的變化,及對(duì)其下游信號(hào)通路的改變,并通過(guò)不同劑量清胰湯含藥血清的干預(yù),探究Gpbar1蛋白及下游通路在急性胰腺炎中的作用與清胰湯含藥血清的干預(yù)機(jī)制。方法:依據(jù)本課題組前期研究基礎(chǔ),以0.8mmol/L和0.4mmol/L兩種不同濃度DCA誘導(dǎo)AR42J細(xì)胞,體外模擬以壞死為主的重癥胰腺炎和以凋亡為主的輕癥胰腺炎腺泡細(xì)胞損傷模型,隨后QRT-PCR與Western-Blot檢測(cè)不同濃度DCA處理對(duì)細(xì)胞Gpbar1表達(dá)的影響,Elisa檢測(cè)胞內(nèi)cAMP含量變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)鈣離子含量的變化。隨后,將不同劑量清胰湯含藥血清干預(yù)該模型不同時(shí)間,Western-Blot檢測(cè)Gpbar1表達(dá)的變化,Elisa檢測(cè)cAMP含量的改變,Fluo-3 AM流式細(xì)胞術(shù)鈣離子濃度的變化。結(jié)果:不同濃度DCA處理后,Gpbar1蛋白、cAMP以及鈣離子表達(dá)水平較陰性對(duì)照組相比,均明顯上調(diào)(P0.001),且0.8mmol/L DCA處理組較0.4mmol/L DCA處理上調(diào)明顯(P0.001)。0.4mmol/L DCA誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷模型中,清胰湯含藥血清干預(yù)組與模型組相比:1.細(xì)胞Gpbar1蛋白的表達(dá)隨著清胰湯含藥血清劑量的增加而降低,但低劑量清胰湯含藥血清干預(yù)時(shí)降低不顯著(P0.05)。而隨著清胰湯含藥血清作用時(shí)間的增加,蛋白表達(dá)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);2.胞內(nèi)cAMP含量隨著清胰湯含藥血清劑量的增加而顯著降低(P0.05)。隨著清胰湯含藥血清作用時(shí)間的增加,胞內(nèi)cAMP含量也降低,但清胰湯含藥血清干預(yù)時(shí)間從0.5h增加到6h時(shí),胞內(nèi)cAMP含量降低無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),12h時(shí)cAMP降低明顯(P0.05);3.胞內(nèi)鈣離子含量隨著清胰湯含藥血清劑量的增加而顯著降低(P0.05),其中高劑量清胰湯含藥血清干預(yù)與中劑量相比鈣離子降低無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但與低劑量相比降低明顯(P0.05),而清胰湯含藥血清干預(yù)僅在0.5h與12h比較時(shí)胞內(nèi)鈣離子含量明顯降低(P0.05),其他干預(yù)時(shí)間比較鈣離子降低均不明顯(P0.05)。0.8mmol/L DCA誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷模型中,清胰湯含藥血清干預(yù)組與模型組相比:1.細(xì)胞Gpbar1蛋白的表達(dá)隨著清胰湯含藥血清劑量的增加而降低,細(xì)胞Gpbar1蛋白含量隨著清胰湯含藥血清劑量的增加而降低,而低劑量清胰湯含藥血清時(shí)降低不明顯(P0.05)。隨著清胰湯含藥血清作用時(shí)間的增加,Gpbar1蛋白表達(dá)變化不明顯(P0.05);2.胞內(nèi)cAMP含量隨著清胰湯含藥血清劑量的增加而顯著降低(P0.05),而高、中、低劑量清胰湯含藥血清之間對(duì)cAMP降低效果無(wú)明顯差異(P0.05)。隨著清胰湯含藥血清作用時(shí)間的增加,胞內(nèi)cAMP含量也降低,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3.低劑量清胰湯含藥血清干預(yù)組胞內(nèi)鈣離子降低不明顯(P0.05),中、高劑量干預(yù)組降低明顯(P0.05),而高、中、低劑量清胰湯含藥血清各組間鈣離子含量相互比較差異不顯著(P0.05)。清胰湯含藥血清干預(yù)時(shí)間對(duì)鈣離子含量降低的影響與輕癥胰腺炎細(xì)胞損傷模型時(shí)一致,僅在0.5h與12h比較時(shí)胞內(nèi)鈣離子含量明顯降低(P0.05),其他干預(yù)時(shí)間比較鈣離子降低均不明顯(P0.05)。結(jié)論:1.DCA誘導(dǎo)AR42J細(xì)胞損傷時(shí),Gpbar1蛋白表達(dá)上調(diào),其下游相關(guān)因子cAMP和鈣離子濃度亦隨之增加,且都隨著DCA作用濃度的增加而增加;2.清胰湯含藥血清可以降低DCA誘導(dǎo)AR42J細(xì)胞損傷時(shí)Gpbar1的表達(dá)及其下游cAMP和鈣離子的濃度,這可能是清胰湯含藥血清治療膽源性胰腺炎的潛在作用靶點(diǎn)之一;3.清胰湯含藥血清的干預(yù)效果在一定范圍(10%-20%)內(nèi)隨劑量的增加而增強(qiáng);4.DCA誘導(dǎo)AR42J細(xì)胞損傷時(shí),Gpbar1蛋白表達(dá)及cAMP濃度并不隨清胰湯含藥血清干預(yù)時(shí)間的增加而顯著變化。
【圖文】：

圖 1：不同組 Gpbar1 蛋白表達(dá)的改變；1 為陰性對(duì)照組；2 為 0.4mmol/L DCA 處理組；3 為0.8mmol/L DCA 處理組；4 為 LCA 處理組。2.Gpbar1 mRNA 水平的表達(dá)采用QRT-PCR方法檢測(cè)經(jīng)不同濃度DCA處理AR42J細(xì)胞6h后Gpbar1 mRNA

圖 2：Gpbar1 及內(nèi)參基因 RT-PCR 擴(kuò)增曲線及產(chǎn)物溶解曲線圖：A.Gpbar1 基因擴(kuò)增曲線圖B.Gpbar1 基因產(chǎn)物溶解曲線圖；C.內(nèi)參基因β-actin 擴(kuò)增曲線圖；D.內(nèi)參基因β-actin 產(chǎn)物溶曲線圖。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2618471