【摘要】：目的:觀察積雪草苷(asiaticoside,AS)對高糖腹透液(peritoneal dialysis solution,PDS)誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞氧化應(yīng)激水平及p38絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路活化的影響,探討AS抗腹膜氧化應(yīng)激的分子機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞株HMrSV5,CCK-8法檢測4.25%葡萄糖腹透液及不同濃度(10、50、100、150、200μmol/L)的AS對細(xì)胞活力的影響;根據(jù)CCK-8檢測細(xì)胞活力的結(jié)果篩選出用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的AS的合適藥物濃度,將細(xì)胞隨機(jī)分為7組:對照組、PDS 組、AS 低(50 μmol/L)、中(100 μmol/L)、高(150μmol/L)劑量組、NAC 組、SB203580組,分別培養(yǎng)6、12、24 h,采用雙氯熒光素(DCFH-DA)染色、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生;比色法檢測細(xì)胞中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、總超氧化物歧化酶(Total-superoxide dismutase,T-SOD)的水平;Western Blot 檢測磷酸化 p38MAPK(phosphorylated-p38MAPK,p-p38MAPK)、p38MAPK 蛋白的表達(dá)。結(jié)果:①PDS作用下HMrSV5細(xì)胞活力下降,ROS生成增多,p-p38MAPK表達(dá)上調(diào),均呈時(shí)間相關(guān),以PDS作用24h最顯著;PDS作用24h細(xì)胞中MDA水平升高,T-SOD水平下降;②低、中、高劑量的AS能提高PDS作用下的細(xì)胞活力,減少ROS的生成,中、高劑量的AS能降低PDS作用下細(xì)胞中MDA的水平,升高T-SOD的水平,下調(diào)p-p38MAPK的表達(dá),均呈劑量相關(guān),以AS高劑量組作用最顯著;③抗氧化劑NAC及p38MAPK抑制劑SB203580均能減少ROS的生成,降低細(xì)胞中MDA的水平,升高T-SOD的水平,下調(diào)p-p38MAPK的表達(dá)。結(jié)論:高糖腹透液可以激活p38MAPK信號通路,誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞氧化應(yīng)激;積雪草苷可能通過抑制p38MAPK信號通路降低高糖腹透液誘導(dǎo)的人腹膜間皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平,發(fā)揮對腹膜的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2618446