【摘要】：目的目前,我國已成為糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)患病率最高的國家,每年發(fā)病人數(shù)不斷攀升。DM患者血糖長期處于高水平,可引起腎臟的微血管發(fā)生病變,是DM的常見并發(fā)癥之一,也是導(dǎo)致終末期腎病(End-stage renal disease,ESRD)的主要原因之一。糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)的發(fā)病機制尚不完全清楚,其病理表現(xiàn)涉及到腎小球系膜細胞(Mesangial cells,MCs)的增殖活化以及細胞外基質(zhì)的積聚。有研究表明某些因素導(dǎo)致MCs的增殖與凋亡與p53有關(guān)。p53能上調(diào)許多靶基因的表達,從而在DNA修復(fù)、細胞凋亡、分化、衰老和抗血管生成等方面發(fā)揮作用,可能參與了調(diào)控DN系膜細胞的增殖活化,通過某種方法抑制MCs的增殖活化對減緩DN的發(fā)展及其向慢性演變有重要意義。目前DN的治療主要圍繞早期干預(yù)各種危險因素等措施以及ESRD的腎臟替代治療,無特別有效的治療藥物。白芍總苷(total glucosides of paeony,TGP),其有效活性成分為芍藥苷(Paeoniflorin,PF),具有抗炎、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等作用,對某些腎臟疾病可能有腎保護作用�；A(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)PF能夠抑制MCs增殖,是否與P53基因相關(guān)的調(diào)控通路有關(guān)聯(lián)有待深入研究。本研究通過PF干預(yù)高糖培養(yǎng)下的MCs,檢測細胞增殖、凋亡情況以及p53蛋白水平等,初步探究PF抑制MCs增殖是否與p53蛋白相關(guān)。方法1.正常糖濃度培養(yǎng)的系膜細胞中加入不同濃度梯度的PF(10 umol/L、20 umol/L、40 umol/L、80 umol/L、160 umol/L),CCK-8試劑盒檢測細胞活力以選取合適的試驗濃度。2.根據(jù)培養(yǎng)條件的不同將MCs分為6組:甘露醇組(Motl)、正常糖濃度組(NG)、高糖組(HG)、高糖+20 umol/L PF組(HG+PF20)、高糖+40 umol/L PF組(HG+PF40)、高糖+80 umol/L PF組(HG+PF80)。CCK-8試劑盒、EdU試劑盒、流式細胞術(shù)分別檢測MCs細胞活力、增殖及凋亡情況。Western Blot法檢測Ⅳ型膠原(Ⅳ-Col)、p53、p-p53、Bcl-2、Bax蛋白表達情況。3.通過CCK-8實驗選擇合適濃度的p53抑制劑進行實驗,分4組如下:高糖組(HG)、高糖+0.01 umol/L PFT-α組(HG+PFT)、高糖+80 umol/L PF組(HG+PF80)、高糖+0.01 umol/L PFT-α+80 umol/L PF組(HG+PFT+PF80)。EdU試劑盒、流式細胞術(shù)檢測MCs的增殖與凋亡情況。結(jié)果1.20 umol/L、40 umol/L、80 umol/L PF對正常糖濃度培養(yǎng)下的MCs細胞活力無明顯影響(P0.05),故選用濃度為20 umol/L、40 umol/L、80 umol/L的PF進行試驗。2.與NG組相比,高糖環(huán)境可以促進MCs增殖,p53、Bax、p-p53蛋白水平降低,Bcl-2、Ⅳ-Col蛋白水平增高。3.與HG組相比,40 umol/L或80 umol/L PF可以明顯抑制高糖刺激導(dǎo)致的MCs增殖(P0.05),促進凋亡;而HG+PF20組MCs的增殖未明顯受到抑制(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示:與HG組相比,HG+PF20組、HG+PF40組和HG+PF80組p53、Bax、p-p53蛋白水平顯著升高(P0.05),Bcl-2、Ⅳ-Col蛋白水平降低(P0.05)。4.與HG+PF80組相比,p53抑制劑使PF對MCs增殖的抑制作用減弱。結(jié)論1.高糖環(huán)境下MCs增殖活躍,p53表達水平降低。2.PF能夠抑制高糖培養(yǎng)下MCs增殖,p53蛋白表達水平升高,細胞的凋亡水平增加。3.抑制p53功能,PF抑制高糖培養(yǎng)下MCs增殖、促進細胞凋亡的作用減弱。綜上,PF抑制MCs增殖可能與p53上調(diào)有關(guān)。
【圖文】：

激光共聚焦顯微鏡下觀察各組系膜細胞的增殖

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文4.7 PFT-α 干預(yù)對系膜細胞增殖情況的影響在激光共聚焦顯微鏡下觀察，如圖 8 所示，MCs 細胞核染為染為紅色。與 HG 組比較，加入 p53 抑制劑 PFT 組紅色HG+PFT+PF80 組與 HG+PF80 組對比，紅色熒光明顯增強；而組比較，紅色熒光強度明顯減弱。以上提示 80 umol/L PF 可增殖減弱，加入 p53 抑制劑 PFT 反而使 PF 抑制 MCs 增殖的作PF 可能是通過提高 p53 蛋白水平，進而促進 MCs 凋亡，抑制
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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9 郭志勇,崔若蘭;細胞間粘附分子對巨噬細胞促進腎小球系膜細胞增殖的影響[J];腎臟病與透析腎移植雜志;1997年01期

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本文編號：2618296