【摘要】：目的建立專屬性強(qiáng)的方法用于鑒定地龍的品種,建立地龍生物效價(jià)方法并對(duì)不同來(lái)源不同加工方法的地龍的纖溶活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法1.采用將12批樣品進(jìn)行DNA提取,用CO1通用引物進(jìn)行序列擴(kuò)增并雙向測(cè)序拼接,其中4批進(jìn)行12S rDNA引物擴(kuò)增測(cè)序拼接,得到不同樣品的序列及品種,從Genbank中下載相關(guān)種屬的序列,采用MEGA-X軟件分析處理。2.采用纖維蛋白平板的測(cè)定方法,比較不同炮制不同來(lái)源地龍樣品的纖溶活性,結(jié)果1.得到了12批的15個(gè)CO1基因序列,4批的4個(gè)12s基因序列。購(gòu)買的大平二號(hào)被鑒定為安德愛勝蚓;3批廣地龍中有兩批的樣品鑒定為大腔蚓及其亞種,有一批的樣品為廣地龍正品;1批山地龍的樣品鑒定為廣地龍偽品;5批滬地龍經(jīng)序列比對(duì)均為正品,3批鑒定為通俗遠(yuǎn)盲蚓,2批鑒定為威廉腔蚓。2.不同批號(hào)的凝血酶測(cè)定藥材效價(jià)RSD值為1.71%,線性:點(diǎn)樣量在12.5~400U范圍內(nèi),回歸方程Y=0.9824X+97.651,R~2=0.9531�；厥章蕿�86.16%,RSD為9.65%,精密度試驗(yàn)RSD為0.98%。3.不同產(chǎn)地,不同加工方法的地龍纖溶生物效價(jià)差異很大,結(jié)果0~3122U/mg;炮制方式中以凍干處理效價(jià)最高,凍干優(yōu)于傳統(tǒng)炮制方法。4.隨著溫度的升高,地龍的生物活性呈下降趨勢(shì),但在60℃以下較穩(wěn)定。結(jié)論1.利用CO1和12S rDNA引物擴(kuò)增短的地龍DNA條形碼序列,可實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥地龍部分基原的快速準(zhǔn)確鑒定。2、纖維蛋白平板法快速準(zhǔn)確,具有高通量,操作簡(jiǎn)便,重現(xiàn)性好,可作為地龍藥材的纖溶生物活性評(píng)價(jià)方法之一。3、不同來(lái)源,不同干燥方法的地龍效價(jià)差異很大。
【圖文】：

圖 1-4 系統(tǒng)進(jìn)化樹1，2，，3 為收集的廣地龍樣品，結(jié)果為：2 與廣地龍條形碼及數(shù)據(jù)庫(kù)中其他廣地龍聚為一支，為廣地龍正品，圖中所有廣地龍最大有 23 個(gè)堿基變異位點(diǎn)；數(shù)據(jù)庫(kù)中大腔蚓分成兩大支的原因與序列的正反向有關(guān)，1-1 與 3 兩序列比對(duì) 97.54%，差異不大；1 與來(lái)自海南島的兩個(gè)大腔蚓亞種聚為 1 大支，1 的兩個(gè)樣品與大腔蚓

不同溫度提取對(duì)1號(hào)樣品電泳條帶影響
【學(xué)位授予單位】：山西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 黃帥;徐風(fēng);楊平;楊雪雁;劉廣學(xué);尚明英;王璇;蔡少青;;地龍的HPLC特征圖譜研究[J];中國(guó)藥房;2015年21期

2 徐立;宋文婷;任建勛;王光蕊;朱盛;姚明江;劉建勛;;溶栓膠囊對(duì)腦缺血缺氧耐受和腦儲(chǔ)備能力影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2015年07期

3 黃文芳;石召華;陳立軍;;指紋圖譜技術(shù)評(píng)價(jià)不同干燥方式對(duì)地龍氨基酸組分提取物的影響[J];藥物評(píng)價(jià)研究;2015年03期

4 季倩;高守紅;張漢明;張磊;;HPLC法測(cè)定各滬產(chǎn)地龍和廣地龍中次黃嘌呤、黃嘌呤、尿嘧啶和尿苷的含量[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2015年04期

5 馬梅;李薇;龔玲;盧瑞珊;;基于COI和16SrRNA基因的地龍藥材及其混淆品的DNA條形碼鑒定[J];中藥新藥與臨床藥理;2014年05期

6 唐秋鳳;劉順會(huì);徐曉鵬;宋雯舒;;地龍對(duì)哮喘小鼠氣道重塑的作用[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào);2013年05期

7 徐家s

本文編號(hào)：2617435