【摘要】：目的:華北地區(qū)黃刺玫資源豐富,分布廣泛,利用率低。本文采用膜分離技術(shù)富集黃刺玫果總黃酮,為后期制備高含量的總黃酮提取物奠定基礎(chǔ);建立同時(shí)測(cè)定黃刺玫果提取物中蘆丁、金絲桃苷、槲皮素三種化學(xué)成分的含量測(cè)定方法,為黃刺玫果的質(zhì)量控制提供依據(jù);以α-葡萄糖苷酶抑制活性為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)黃刺玫果75%乙醇提取物中的化學(xué)成分進(jìn)行分離,為黃刺玫果的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。方法:以總黃酮的保留率和膜通量為指標(biāo),采用單因素試驗(yàn)方法,通過(guò)改變溫度、pH值、料液比確定膜分離法富集黃刺玫果中黃酮類化合物的最佳工藝條件。通過(guò)對(duì)高效液相色譜法(HPLC)中波長(zhǎng)、流動(dòng)相的考察,確定高效液相色譜同時(shí)測(cè)定黃刺玫果提取物中蘆丁、槲皮素、金絲桃苷三種化學(xué)成分含量的方法,其色譜條件為:色譜柱Inertsil-ODS-SP型號(hào),流動(dòng)相乙腈-0.5%磷酸溶液,流速1.0 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm,柱溫37℃,進(jìn)樣量20μl,梯度洗脫,洗脫時(shí)間55min。并對(duì)其線性、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收率進(jìn)行考察。采用硅膠柱色譜法對(duì)黃刺玫果75%乙醇提取物進(jìn)行初步分離,以α-葡萄糖苷酶抑制活性為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)黃刺玫果不同極性組分進(jìn)行下一步分離,通過(guò)~1H-NMR、~(13)C-NMR、DEPT、H-H COSY、HSQC、MS波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果:超濾的最佳工藝條件是:溫度45℃、料液比1:5、料液pH7.0。最佳工藝條件下,黃刺玫果提取物經(jīng)超濾后,總黃酮含量達(dá)到34.00%,與原醇提物中總黃酮含量23.46%相比較有明顯提升。HPLC法同時(shí)測(cè)定黃刺玫果中蘆丁、槲皮素、金絲桃苷三種黃酮類成分含量的方法學(xué)考察中,精密度實(shí)驗(yàn)蘆丁、金絲桃苷、槲皮素峰面積的RSD值分別為0.78%、0.73%、0.83%,穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)蘆丁、金絲桃苷、槲皮素峰面積的RSD值分別為0.79%、1.53%、1.38%,重復(fù)性實(shí)驗(yàn)蘆丁、金絲桃苷、槲皮素峰面積的RSD值分別為0.93%、0.84%、1.02%,蘆丁、金絲桃苷和槲皮素的加樣回收率分別為98.10%、97.80%和97.50%,RSD值為3.20%,3.00%和2.80%,均符合實(shí)驗(yàn)要求;R~2均大于0.9999,線性關(guān)系良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度良好,方法重復(fù)性、準(zhǔn)確度良好,符合實(shí)驗(yàn)要求。黃刺玫果實(shí)際樣品中蘆丁、槲皮素、金絲桃苷的含量分別為65.15μg/g、1.86μg/g、13.43μg/g。硅膠柱色譜法首先對(duì)黃刺玫果75%乙醇提取物進(jìn)行梯度分離,得到E1-E10共10個(gè)組分,其中E2、E3對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率分別為88.35%、45.20%,降糖活性較高,E6組分經(jīng)TLC檢測(cè)化學(xué)成分較為簡(jiǎn)單,三個(gè)組分均進(jìn)行下一步分離,共得到5個(gè)化合物,對(duì)其中2個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征,一個(gè)確定為鄰苯二甲酸二丁酯,化合物2的結(jié)構(gòu)還在進(jìn)一步確證中。結(jié)論:黃刺玫果總黃酮類成分的膜分離富集實(shí)驗(yàn)表明,超濾用于黃刺玫果提取物富集總黃酮的方法是可行的。經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證,HPLC法可用于同時(shí)測(cè)定黃刺玫果中蘆丁、槲皮素和金絲桃苷的含量,該方法線性關(guān)系良好,準(zhǔn)確性、重復(fù)性、加樣回收率均符合要求。2個(gè)化合物均為首次從黃刺玫果中分離得到,其中化合物1確認(rèn)為鄰苯二甲酸二丁酯,化合物2的結(jié)構(gòu)還在進(jìn)一步確認(rèn)中。其中E1、E2、E3、E9對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率分別為78.76%、88.35%、45.20%、67.80%,降糖活性較高,可以推測(cè)黃刺玫果中含有具有降糖活性的化學(xué)成分。
【圖文】：

圖 1-1 料液溫度對(duì)膜通量的影響由圖 1-1 可得出，整個(gè)超濾過(guò)程中，在 3 個(gè)溫度下的膜通量變化趨勢(shì)都降低。在相同條件的情況下，料液溫度高，膜通量也高。溫度升高，分子運(yùn)動(dòng)加活躍，料液粘度下降，溶劑更容易透過(guò)膜。同時(shí)溫度升高使溶質(zhì)在溶液中的散系數(shù)增大，從而提高傳質(zhì)系數(shù)，，減少濃差極化和膜污染[23]。由表 1-2 可得溫度為 25℃，35℃，45℃下，總黃酮的保留值分別為是 67.33%、66.63%、75.4綜合考慮溶劑蒸發(fā)、膜通量、生物活性等因素，確定黃刺玫果超濾的最佳溫度45℃。2.2 料液 pH 對(duì)超濾膜純化效果的影響在壓力 0.06MPa，料液比 1:5，溫度為 45℃，pH=3.5/5.5/7.0 下,探討黃玫果提取液 pH 與總黃酮保留值的關(guān)系,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 1-4。

圖 1-2 考察 pH 對(duì)膜通量的影響由圖 1-2 可知，整個(gè)超濾過(guò)程中，pH=3.5 和 pH=5.5 兩個(gè) pH 下膜通量變趨勢(shì)差異不大。由課題組楊瑩瑩等[24]研究可得，黃刺玫果原液為酸性，為避免的含量過(guò)高影響超濾效果，故主要考慮酸度影響。由表 1-4 可知，在相同條件pH=3.5，總黃酮保留率為 66.13%；pH=5.5，總黃酮保留率為 82.85%；pH=7.總黃酮保留率為 82.33%。pH=5.5 與 pH=7.0 時(shí)，總黃酮保留率差距不大，綜合慮膜的清洗，膜通量及使用壽命等因素，確定黃刺玫果超濾的最佳酸堿度pH=7.0。2.3 考察料液濃度對(duì)超濾膜膜通量及分離純化效果影響在壓力 0.06MPa，pH=7.0，溫度為 45℃，料液比是 1:4、1:5、1:6 下,探料液比與總黃酮保留值的關(guān)系,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 1-5。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284.1

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本文編號(hào)：2617255